辽宁省高校科研计划项目(L20100610)
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 相关作者：秦晓松谭明旗佟威威吴丽娜潘莉莉更多>>
- 相关机构：中国医科大学德岛大学更多>>
- 发文基金：辽宁省自然科学基金辽宁省高校科研计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Nephrin和Podocin的细胞内共定位及相互作用被引量：4
- 2010年
- 目的研究肾小球裂孔隔膜分子Nephrin和Podocin的细胞内表达及相互作用。方法构建载有Nephrin和Podocin羧基端的质粒载体,双重转染的COS-7细胞,采用双免疫荧光标记后经共聚焦显微镜观察Nephrin和Podocin的细胞内分布情况;构建载有谷胱甘肽S-转移酶（GST）-Nephrin,-Podocin的质粒载体转化至感受态细菌后提取融合蛋白,应用免疫共沉淀及GST pull-down分析研究体外培养的COS-7细胞内和大鼠肾小球细胞内Nephrin和Podocin蛋白间的相互作用。结果 Nephrin和Podocin在体外培养的COS-7细胞内共存,二者共存于细胞质的囊泡样结构内,尤其在细胞膜上重合为线样结构;体内和体外实验结果均表明二者存在相互作用,具体的作用部位为细胞内段的羧基端,Nephrin 1 134~1 241氨基酸区域与Podocin 262~383氨基酸区域存在相互作用。结论裂孔隔膜分子Nephrin和Podocin具有体内、体外的物理作用,可能与维持裂孔隔膜的功能和结构稳定性有关。
- 秦晓松谭明旗塚口裕康
- 关键词：NEPHRINPODOCIN免疫共沉淀
- 在笼型蛋白和脂筏介导的两种内吞途径中nephrin的磷酸化修饰动力学不同
- 2010年
- 研究肾小球裂隙膜的主要成分nephrin分子在细胞内的转运途径及不同转运途径对nephrin磷酸化的影响.分别应用笼型蛋白介导的内吞(clathrin-mediated endocytosis,CME)和脂筏介导的内吞(raft-mediated endocytosis,RME)标记物转铁蛋白和霍乱毒素B亚基对nephrin的内吞过程进行分析,并进一步应用两种内吞途径阻断物EPS15Δ和Dyn2aK44A,研究阻断nephrin的内吞途径对其磷酸化水平的影响.结果显示,nephrin通过笼型蛋白和脂筏介导的两种内吞途径以不同速率进行内吞;与Src酪氨酸激酶家族成员Fyn共表达时,细胞内nephrin酪氨酸磷酸化被增强,而在Src家族激酶抑制剂PP2的作用下,nephrin酪氨酸磷酸化被减弱,表明nephrin的磷酸化过程是Fyn依赖的;内吞20min时,笼型蛋白介导的内吞途径的特异性阻断物EPS15Δ降低了nephrin磷酸化水平、笼型蛋白和脂筏介导的内吞途径的通用抑制剂Dyn2aK44A则增加了nephrin的磷酸化水平,综上结果表明:单独阻断脂筏介导的内吞可引起nephrin的磷酸化水平增加,脂筏介导的内吞对nephrin磷酸化过程起下调作用.
- 秦晓松郑锐潘莉莉吴丽娜佟威威刘岩岳丹
- 关键词：NEPHRIN内吞蛋白质转运
