国家教育部博士点基金(20070001784)
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
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- 外源性一氧化碳对体外培养的SH-SY5Y细胞的影响被引量：1
- 2008年
- 目的研究不同浓度的外源性一氧化碳（CO）对体外培养的神经细胞SH—SY5Y的影响，进一步探讨CO中毒脑损伤的机制。方法SH—SYSY细胞在含有不同浓度CO的装置中培养12h，然后用MTI＇法检测细胞存活率，DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测细胞凋亡的发生，以激光共聚焦显微镜荧光染色法检测细胞内活性氧的产生和线粒体膜电位的变化，用荧光酶标仪测定caspase-3的活性，并用Western印迹的方法检测Bax蛋白的表达水平。结果1000、10000ppmCO处理SH—SY5Y细胞12h后显著降低细胞的存活率；诱导细胞发生凋亡，凋亡率分别达29．03％和41．67％；激光共聚焦显微镜结果细胞内活性氧水平及caspase-3的活性显著升高；线粒体膜电位明显降低，红／绿荧光强度的比值由正常的5．97分别降低为1．56±0．07和0．34±0．02；而且细胞中Bax蛋白表达水平显著升高。而100ppm CO对体外培养的SH—SY5Y细胞的存活率、caspase-3的活性、活性氧水平、线粒体膜电位以及Bax蛋白的表达无明显影响。结论高浓度的外源性CO（1000、10000ppm）对体外培养的SH—SY5Y细胞造成损伤，具有明显的细胞毒性；而低浓度的CO（100ppm）对SH—SY5Y细胞没有明显的损伤作用。
- 邓敏赵金垣樊东升张俊沈扬
- 关键词：一氧化碳线粒体膜电位活性氧
- 腺病毒介导骨形态发生蛋白2基因转染诱导脂肪间充质干细胞向成骨细胞的定向分化被引量：3
- 2009年
- 背景:在众多的骨生长因子中,骨形态发生蛋白2具有显著促进骨缺损修复和骨折愈合的效果。骨修复是一个阶段性过程,不需要转染的目的基因长久表达,因此利用腺病毒载体将目的基因导入脂肪间充质干细胞来促进骨愈合比较理想。目的:观察腺病毒介导的骨形态发生蛋白2基因转染后大鼠脂肪间充质干细胞的分化情况。设计、时间及地点:细胞学体外对照观察,于2008-01/10在北京大学第三医院中心实验室完成。材料:清洁级3周龄雄性Lewis大鼠24只,由北京大学实验动物学部提供。腺病毒载体Ad-BMP2、Ad-GFP由靳小兵博士构建扩增。方法:胶原酶消化法分离培养大鼠脂肪间充质干细胞,传至第3代分为Ad-BMP2转染组、Ad-GFP转染组和未转染组。各转染组分别向培养液中加入对应的腺病毒液,转染复数MOI=100。主要观察指标:转染后脂肪间充质干细胞碱性磷酸酶活性,vonKossa染色结果,Westernblotting法检测骨桥蛋白和骨形态发生蛋白2的表达。结果:与未转染组比较,转染后7,14,21dAd-GFP转染组细胞碱性磷酸酶活性无明显变化;Ad-BMP2转染组细胞碱性磷酸酶活性明显增高(P<0.01),且随时间延长碱性磷酸酶活性增加更为显著。Ad-BMP2转染组vonKossa染色出现黑色钙结节,免疫细胞化学染色结果示胞浆内有大量黄染颗粒,骨桥蛋白、骨形态发生蛋白2均呈明显强阳性表达。Westernblotting检测结果显示Ad-BMP2转染组脂肪间充质干细胞骨桥蛋白、骨形态发生蛋白2表达水平增高,Ad-GFP转染组中未检测到骨桥蛋白、骨形态发生蛋白2的表达。结论:大鼠脂肪间充质干细胞经腺病毒介导的骨形态发生蛋白2基因转染后,可定向分化为成骨细胞。
- 邓敏张楠唐璐鞠晓东
- 关键词：脂肪间充质干细胞成骨诱导骨形态发生蛋白2基因转染
