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云南省自然科学基金(2010FB)

作品数：1 被引量：6H指数：1
相关作者：王慧建王鑫曹树海李彦林陈建明更多>>
相关机构：昆明医科大学永州市中心医院更多>>
发文基金：云南省自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
相关领域：医药卫生更多>>

文献类型

  • 1篇中文期刊文章

领域

  • 1篇医药卫生

主题

  • 1篇软骨
  • 1篇软骨分化
  • 1篇软骨组织
  • 1篇软骨组织工程
  • 1篇转染
  • 1篇基因
  • 1篇基因转染
  • 1篇基因转染诱导
  • 1篇骨组织
  • 1篇骨组织工程
  • 1篇分化
  • 1篇TGF
  • 1篇BMSCS

机构

  • 1篇昆明医科大学
  • 1篇永州市中心医...

作者

  • 1篇陈建明
  • 1篇李彦林
  • 1篇曹树海
  • 1篇王鑫
  • 1篇王慧建

传媒

  • 1篇中国修复重建...

年份

  • 1篇2014
共 1 条 记 录，以下是 1-1
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排序方式：
TGF-β_3基因转染诱导滇南小耳猪BMSCs向软骨分化的初步研究被引量：6
2014年
目的观察TGF-β3基因转染滇南小耳猪BMSCs后目的基因的表达和向软骨细胞分化的作用。方法以血清5型重组腺病毒（recombinantadenovirus5，rAd5）构建系统为基因载体，包装为重组腺病毒rAd5．TGF-β3，行双酶切及PCR鉴定。采集2月龄滇南小耳猪（体重12～15kg）骨髓分离培养制备BMSCs，取第2代细胞用于实验。将实验分为3组，实验组和对照组分别用rAd5-TGF-β3人腺病毒阴性空病毒载体转染BMSCs，以未转染的BMSCs为空白对照组。流式细胞仪检测转染效率，免疫荧光染色、Westernblot检测各组TGF-β3蛋白表达情况；培养后各时间点倒置相差显微镜观察细胞形态变化，Westernblot检测各组II型胶原蛋白表达情况。结果rAd5-TGF．瞰重组腺病毒成功构建并转染BMSCs，在细胞内表达并迅速扩增，免疫荧光显微镜下可观察到强绿色荧光。流式细胞仪检测示转染72h时病毒达最佳转染效果（转染效率为84．86％）。免疫荧光染色示，rAd5．TGF-β3转染BMSCs72h，细胞质内有明显TGF-β3蛋白表达；转染后7、21dWesternblot检测示，实验组在相对分子质量为30×10^3处有TGF-β3阳性条带，而对照组和空白对照组均呈阴性。转染后体外培养，倒置相差显微镜下示实验组向软骨细胞分化明显。培养21d时Westernblot检测示，实验组在相对分子质量为130×10^3处有II型胶原阳性条带，对照组和空白对照组均呈阴性。结论重组腺病毒tAd5．TGF-β3可成功转染BMSCs,TGF-β3蛋白可稳定表达，并促使BMSCs向软骨细胞方向分化，为软骨缺损修复的局部基因治疗奠定了实验基础。
王慧建李彦林陈建明王鑫赵沣凯曹树海
关键词：BMSCS软骨分化基因转染
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