国家重点基础研究发展计划(2012CB966504)
- 作品数：9 被引量：26H指数：3
- 相关作者：李栋肖东杰汪运山段永娟胡晓更多>>
- 相关机构：山东大学济南市中心医院中国医学科学院北京协和医学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划山东大学自主创新基金天津市应用基础与前沿技术研究计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- IFN-γ增强人脐带间充质干细胞的免疫抑制能力被引量：2
- 2014年
- 本研究旨在探讨IFN-γ对脐带间充质干细胞免疫抑制能力的影响。利用细胞因子刺激细胞表面受体的方法改变MSC的免疫抑制能力。用MSC与淋巴细胞共培养实验检测激活后MSC对淋巴细胞增殖抑制的变化。用荧光定量PCR实验和ELISA实验检测激活后MSC基因和蛋白的表达变化情况。结果表明:IFN-γ可以增强脐带MSC的免疫抑制能力,IFN-γ激活后的MSC能更有效的抑制淋巴细胞的增殖,上调MSC细胞内免疫抑制基因IDO1,COX2和HLA-G等的表达和可溶性免疫抑制蛋白HLA-G、KYN、IL-10、PGE2等的分泌,并在细胞共培养实验中将间充质干细胞的免疫抑制功能提高2-7倍。结论:IFN-γ可有效提高MSC的免疫抑制能力。
- 刘小盾刘东臧传宝张海燕明奕迟令龙沈柏均李栋
- 关键词：脐带间充质干细胞免疫抑制IFN-Γ
- 第三代慢病毒包装系统优化及Rev表达质粒对慢病毒包装效率作用初探被引量：5
- 2014年
- 目的:对目前最为常用的三质粒慢病毒包装系统进行优化,以期明确各质粒表达的病毒成分对提高慢病毒包装效率的重要性。方法:在限定总质粒量为10μg的情况下,将表达绿色荧光蛋白(GFP)的目的质粒、表达gag/pol、Rev、VSVG的包装质粒按不同比例混合,转染293T细胞进行病毒包装,48 h后收集上清用于感染293T及K562细胞,72 h后经流式细胞术检测GFP+阳性细胞比例,分析所获病毒的感染效率。结果:采用不同的质粒混合比例包装的病毒感染效率具有明显差异,其中携带GFP的目的质粒量影响作用最为显著,当目的质粒量从15%(1.5μg)增至35%(3.5μg)时,GFP+293T细胞比例从14.2%升至45.1%,增加了3.2倍。当固定目的质粒量为35%,同时分别将表达gag/pol或Rev的质粒量从15%提高到25%时,改变Rev组的GFP+阳性率提升最明显,为1.5倍;而改变VSVG质粒量在已测试的混合比例中作用不显著。包装病毒感染K562细胞的结果与293T细胞类似。结论:通过对比包装病毒的感染效率,优化了慢病毒包装的混合质粒条件,并成功地应用于感染白血病细胞系;首次发现提高Rev质粒量可以更有效地提高病毒的包装效率,为利用慢病毒表达体系研究多种基因在血液系统中的功能奠定了技术基础。
- 阮峥王文天杨洋段永娟胡晓
- 构建稳定过表达转录辅助因子LBH的人间充质干细胞株
- 2016年
- 目的:构建转录辅助因子LBH(limb-bud and heart)过表达的人间充质干细胞(MSC)株,研究Lbh基因对人MSC功能的调控。方法:通过分子克隆的方法构建人Lbh基因的慢病毒表达质粒p CDHP-Lbh,经限制性内切酶酶切和核酸测序鉴定,利用293T细胞包装表达Lbh基因的慢病毒及对照;将包装的病毒感染人MSC,利用表达载体携带的GFP报告基因,采用流式细胞术分选GFP阳性目的细胞;通过油红O染色鉴定阳性细胞的成脂分化能力,通过茜素红和硝酸银染色鉴定阳性细胞的成骨分化能力。结果:双酶切和测序结果表明正确克隆了人Lbh基因的全长CDS序列,定量PCR和Western印迹结果表明构建的p CDHP-Lbh重组质粒能够表达Lbh基因;流式分选获得LBH稳定表达的人MSC细胞株,该细胞株经成骨和成脂诱导分化培养后,油红O染色、茜素红染色和硝酸银染色结果均呈阳性。结论:构建了人Lbh基因的慢病毒表达质粒p CDHP-Lbh,并获得稳定表达Lbh基因的人MSC细胞株,该细胞株保留了向脂肪细胞和成骨细胞定向分化的能力。本研究为进一步探讨Lbh基因对人MSC功能的调控提供了重要的实验基础。
- 牛琳段永娟王文天杨洋赵慧娟胡晓
- 关键词：HEART人间充质干细胞慢病毒载体
- 三维培养对脐带间充质干细胞表型及造血因子基因表达的影响被引量：2
- 2014年
- 本研究探讨三维立体培养条件下脐带间充质干细胞(UC-MSC)的细胞表型变化及部分造血相关因子的基因表达,为下一步研究三维立体条件下的造血扩增及诱导分化提供基础。从脐带中分离出MSC,分别在二维及三维条件下培养,通过流式细胞术检测MSC表面抗原的表达水平,通过成血管试验比较了两种细胞的成血管能力,并通过实时定量PCR检测两种培养条件下造血相关细胞因子的基因表达情况。结果表明:从脐带中成功地分离出了MSC,在三维培养条件下其内皮细胞、内皮祖细胞和间充质原始干细胞的表面标记CD31、CD133和CD271等阳性细胞百分比显著增加,体外成血管能力增强;骨架蛋白β-actin基因在三维培养条件下表达上调,G-CSF、LIF、SCF、IL-1α、IL-1β、IL-3、IL-7和IL-11等与造血调控有关的细胞因子基因表达也有不同程度的增高,其中LIF、IL-3和IL-7升高尤为明显;免疫调控相关的细胞因子IL-10的表达也增高,而SDF-1和IL-6的表达虽有轻微的降低,但无显著性差异。结论:三维培养条件下UC-MSC的CD31、CD133和CD271表达上调,体外成血管能力增强,并且多个造血相关因子的基因表达水平上调。
- 李芳李栋刘欢张坤汪运山高济凡肖东杰
- 关键词：脐带间充质干细胞细胞表型
- 胎儿骨髓间充质干细胞对成人外周血淋巴细胞体外增殖及免疫相关因子表达的影响被引量：3
- 2014年
- 目的 观察胎儿骨髓间充质干细胞（FBM-MSC）对成人外周血淋巴细胞的免疫调控作用及机制.方法 取妊娠14～ 22周龄胎儿骨髓,分离、培养FBM-MSC,通过观察细胞形态、细胞表面分子标志及成骨、成脂分化潜能等进行鉴定;将FBM-MSC与用荧光染料CFSE标记的成人外周血单个核细胞,在PHA刺激条件下共培养5d后,用流式细胞术分析刺激活化后的淋巴细胞增殖情况;用ELISA法检测共培养上清中IFN-γ和TNF-α等炎性因子水平;用荧光实时定量RT-PCR法检测IDO、TSG-6和TGF-β等免疫抑制性因子表达水平.结果 分离的FBM-MSC表面高表达CD29、CD44、CD49e、CD73、CD90、CD105;低表达CD31、CD34、CD45、HLA-DR,具有分化为脂肪和成骨细胞的能力;与单纯PHA刺激后的淋巴细胞相比较,与FBM-MSC共培养抑制淋巴细胞活化增殖,抑制率可高达96％; FBI-MSC共培养还可抑制淋巴细胞分泌炎性因子,对IFN-γ和TNF-α因子分泌的抑制率分别达90.9％和58.4％;与单独培养的FBM-MSC相比较,共培养后的FBM-MSC中重要的免疫调节因子如IDO、TSG-6和TGF-β的表达水平显著上调.结论 胎儿骨髓来源的FBM-MSC对外周血淋巴细胞体外增殖具有明显抑制作用;由MSC分泌的抑制性细胞因子如IDO、TSG-6和TGF-β等在FBM-MSC介导的免疫抑制中可能起重要调节作用.
- 李芳吕军强段永娟孙仪李栋汪运山胡晓肖东杰
- 关键词：胎儿骨髓间质干细胞免疫调节细胞因子类
- 应用于缺血缺氧性脑病治疗的神经干细胞移植：现实与未来被引量：11
- 2014年
- 背景:很多研究都揭示神经干细胞移植是治疗缺血缺氧性脑病的新方法。目的:就神经干细胞移植治疗缺血缺氧性脑病的现状、移植策略以及发挥作用的可能机制等方面做一系统的归纳分析。方法:检索2000年8月至2013年8月PubMed数据库及中国知网数据库有关神经干细胞移植及缺血缺氧性脑病等方面的文献,英文检索词为"Hypoxic-ischemic encephalopathy,neural stem cells",中文检索词为"缺血缺氧性脑病,神经干细胞"。排除与研究目的无关和内容重复者,保留39篇文献做进一步分析。结果与结论:神经干细胞移植能在一定程度上缓解缺血缺氧导致的神经功能的障碍,起到一定的治疗作用,给缺血缺氧性脑病患者带来新希望。但是该研究还处于实验室研究阶段,影响移植的一些关键因素,如:移植途径、时间、单纯或联合移植以及移植的细胞发挥作用的机制等还不明确,还有待科学实验来予以验证。
- 杨坦刘华王肇光高济凡肖东杰汪运山
- 关键词：干细胞神经干细胞缺血缺氧性脑病血管移植
- 脐带间充质细胞输注治疗大鼠肝硬化模型后表达谱的变化
- 2014年
- 目的 研究采用人脐带间充质细胞（UC-MSC）治疗肝硬化大鼠后,肝细胞中基因表达的变化. 方法 首先分离培养UC-MSC,然后鉴定其细胞表型以及向成骨细胞和脂肪细胞的分化能力.其次利用皮下注射四氯化碳方法建立大鼠肝硬化动物模型,将U C-MSC通过尾静脉注射途径对肝硬化大鼠进行治疗,利用血清学检测和组织学染色评价其治疗效果,最后提取肝脏RNA,进行表达谱芯片杂交并对结果进行统计分析,组间比较用t检验. 结果 细胞表型检测和诱导分化实验证明培养得到的贴壁细胞表型符合间充质细胞特征.血清学检测和组织病理学染色结果表明利用四氯化碳法成功建立了大鼠肝硬化模型,且U C-MSC治疗可以显著地改善肝损伤.芯片分析结果显示与对照组相比,脐带间充质细胞上调了补体凝血相关基因,下调细胞增殖、细胞周期和胶原合成等相关基因;肝功能生物化学指标检测显示球蛋白改善明显,分别为（33.9±1.5） g/L比（27.7±0.6） g/L,P=0.045;其他指标变化不明显. 结论 在脐带MSC治疗肝硬化逆转肝损伤的过程中,可能通过上调了补体凝血相关基因,抑制细胞增殖和胶原沉着发挥治疗作用.
- 张海燕明奕刘小盾臧传宝迟令龙李栋
- 关键词：间质干细胞细胞治疗
- 干细胞拉曼光谱收集条件选择及间充质干细胞与胚胎干细胞拉曼光谱的比较
- 2017年
- 背景:拉曼光谱在检测细胞状态方面相比于传统技术具有快速、非介入、非标记等特点,因此在生物医学领域中的应用正日益受到关注,但是该技术应用于干细胞检测的条件还有待进一步优化。目的:探索激光波长与光栅刻度密度对于干细胞拉曼光谱分辨率与收集时间等参数的影响,明确可以用于干细胞分析的拉曼光谱收集条件。方法:首先比较532,638,785 nm 3个波长激光及600,1 200,1 800 gr/mm 3种光栅刻度密度条件对人间充质干细胞与人胚胎干细胞拉曼光谱的影响;之后比较这2个条件不同组合得到的拉曼光谱的光谱分辨率与收集时间,选择出最佳的组合条件;最后使用选出的最佳条件结合主成分分析方法比较胚胎干细胞与间充质干细胞拉曼光谱的差异以验证优化条件的适用性。结果与结论:(1)激光波长与光栅刻度密度均会不同程度影响干细胞拉曼光谱的峰强,进而影响特征性拉曼峰之间的比值;(2)785 nm波长激光与1 200 gr/mm光栅刻度密度条件组合是最适合收集条件;(3)对比分析胚胎干细胞与间充质干细胞的拉曼光谱图,提示胚胎干细胞具有更高的核酸含量,而间充质干细胞在一些蛋白和脂类含量上更为丰富。
- 陈明程雪莲段永娟胡晓
- 关键词：干细胞胚胎干细胞拉曼光谱光栅间充质干细胞胚胎干细胞主成分分析
- 不同冻存液及降温方式对心脏瓣膜组织学及免疫原性的影响被引量：4
- 2016年
- 目的探讨液氮冻存心脏瓣膜的合适冻存保护剂及降温方式。方法将健康捐赠者的心脏瓣膜剪切为7份:新鲜对照组1份,冻存液A、B、C 3个组每组2份,分别为-80℃直接降温组(G1组)和程控降温仪缓慢降温组(G2组)。采用苏木精-伊红染色、弹力纤维染色、Masson染色法观察显微结构变化,透射电子显微镜(TEM)观察超微结构变化,采用Western blotting法及免疫组织化学法检测瓣膜表面人类白细胞抗原复合体(HLA)的相对表达量,比较各组瓣膜组织免疫原性。结果低温冻存会造成瓣膜组织结构损伤,使用含DMSO和硫酸软骨素的冻存液B组结构最完整,组织损伤最小,HLA-I蛋白的表达明显下调;G2组与G1组相比,胶原纤维着色偏浅,纤维排列更加紊乱,但HLA-I蛋白的表达相对较低。结论同时含有DMSO和硫酸软骨素对冻存组织保护效果最好,免疫原性最低。-80℃直接降温更有利于胶原纤维的保存,但免疫原性高于程控降温法。
- 宫妍婕王龙董来东李栋宋光民鞠秀丽
- 关键词：心脏瓣膜低温冻存组织学透射电镜人白细胞抗原
