国家自然科学基金(30000183)
- 作品数：7 被引量：9H指数：3
- 相关作者：史常旭梁志清何畏李玉清吴玉章更多>>
- 相关机构：第三军医大学西南医院第三军医大学中国人民解放军总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 多价精子抗原表位肽的设计与免疫效应研究
- 2002年
- 目的 开发可供两性使用的多价合成嵌合肽疫苗。方法 选择小鼠精子 /睾丸特异性抗原SP1 7、Cyritestin中特异性氨基酸序列与牛核糖核酸酶非限制性T细胞表位作为骨架 ,按一定连接方式设计、合成新抗原 35肽 ,并与弗氏佐剂混悬后免疫雌性BALB/C小鼠。结果 在 430A固相自动肽合成仪上成功地合成 35肽 ,并经HPLC纯化、质谱鉴定证实其纯度达 95 %以上 ;免疫后小鼠血清特异性IgG抗体滴度最高达 1∶6 0 0 0 ,阴道粘膜冲洗液中特异性IgA抗体滴度最高达 1∶30 0 ;小鼠脾脏淋巴细胞增殖率达 50 %左右 ,淋巴细胞分泌的INF γ和IL 4分别为 60、1 0 8μg/ml;实验组BALB/C雌鼠妊娠率平均降至 60 % ,每胎产仔数平均降低 58%～71 %。结论 含有两种特异性精子抗原中特异性氨基酸序列的新抗原可激发小鼠产生较理想的特异性体液免疫和粘膜免疫 ,并使小鼠受孕率下降 。
- 何畏梁志清吴玉章李玉清贾正才周伟史常旭
- 关键词：免疫效应肽疫苗避孕
- 一种精子蛋白嵌合肽的实验研究被引量：3
- 2002年
- 目的 探讨可供两性使用的免疫避孕疫苗的可能性。方法 设计含有小鼠精子 /睾丸特异性抗原SP17、Cyritestin中特异性氨基酸序列的新抗原 35肽。经合成、鉴定及纯化后 ,免疫雌性Balb/C小鼠 ,并了解其免疫原性 ,同时观察其抗生育效应。结果 获得的新抗原 35肽经质谱鉴定证实其合成正确 ,经高压液相色谱 (KPLC)纯化后纯度达 95 %以上 ;嵌合肽与钥孔血蓝蛋白 (KLH)偶联后免疫小鼠获得的特异性抗血清可识别小鼠、大鼠及人睾丸组织蛋白提取物中相对分子质量的蛋白质 ;与等量弗氏佐剂混悬后免疫小鼠 ,其血清中特异性IgG抗体滴度最高达 1∶6 0 0 0 ,阴道粘膜冲洗液中特异性IgA抗体滴度最高达 1∶30 0 ;免疫后小鼠受孕率降至 6 1.11% ,平均每胎产仔量也减至 4 .3只。结论 新抗原 35肽可在雌性Balb/C小鼠体内激发出较强的特异性体液和粘膜免疫 ,使小鼠受孕率和每胎产仔数明显下降。
- 何畏梁志清吴玉章史常旭贾正才周伟李玉清
- 关键词：肽类避孕
- 小鼠精子Sp17与IL-5融合蛋白的构建、表达及其免疫原性鉴定被引量：4
- 2009年
- 目的构建和表达小鼠精子蛋白Sp17与白介素5(IL-5)融合蛋白,并对其进行纯化和免疫原性鉴定。方法采用PCR技术从质粒pGEM-1-IL-5中扩增IL-5基因片段,将其克隆至pET/Sp17原核表达载体中与Sp17基因融合,构建重组质粒pET/Sp17-IL-5,经酶切鉴定后转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,采用Ni2+-NTAAgarose纯化,SDS-PAGE检测、N端测序及Western blot;重组蛋白Sp17-IL-5免疫小鼠后ELISA检测小鼠血清特异性抗体。结果成功构建小鼠精子蛋白Sp17与IL-5融合蛋白的高效表达质粒pET/Sp17-IL-5,重组工程菌pET-28a(+)-Sp17-IL-5/BL21经IPTG诱导目的蛋白表达率约28%,PAGE初步测定目的蛋白相对分子量(Mr)约39000,纯化后蛋白纯度达91%,免疫后小鼠血清中检测到特异性抗体。结论Sp17-IL-5蛋白经基因克隆获得了较高的表达量,并初步显示了较好的免疫活性,为新型Sp17避孕疫苗的研制奠定基础。
- 张巧玉李晋涛李玉燕梁志清吴玉章倪兵史常旭
- 关键词：精子蛋白17白细胞介素5基因融合
- 小鼠精子蛋白Sp17的克隆、表达及其免疫原性研究被引量：3
- 2008年
- 目的获得鼠精子蛋白Sp17基因,构建重组表达载体并实现其在大肠杆菌中的高效表达,为制备免疫性避孕疫苗奠定基础。方法提取BALB/c小鼠睾丸组织总RNA,通过RT-PCR扩增Sp17基因全长cDNA序列,并将其克隆至pMD 18-T质粒载体中,再经HindⅢ/XhoⅠ双酶切将Sp17基因片段亚克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3),异丙基-β-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,采用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、Western blot对表达产物进行初步鉴定,并检测重组蛋白Sp17免疫小鼠后血清特异抗体滴度。结果获得了小鼠Sp17的全长cDNA,成功构建了重组原核表达载体pET/Sp17,在IPTG的诱导下实现了目的蛋白在大肠杆菌中的高效表达,免疫后小鼠血清中检测到特异性抗体。结论小鼠精子蛋白Sp17基因序列已被克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,并在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效、正确的表达,重组蛋白Sp17能够诱导产生特异性免疫反应,具有一定程度的免疫原性。
- 张巧玉梁志清李玉艳李晋涛史常旭
- 关键词：小鼠精子蛋白克隆原核表达
- 以小鼠精子/睾丸特异性抗原为基础的合成肽免疫避孕效应研究
- 2002年
- 目的 研制以精子 睾丸特异性抗原为基础的多价嵌合肽避孕疫苗。方法 选择小鼠精子 睾丸特异性抗原Sp17、Cy ritestin作为对象 ,采用分子设计的方法与外源性牛核糖核酸酶非选择性T细胞表位组合合成新型嵌合肽 3 5肽 ,并对其免疫效应进行研究。结果 该嵌合肽可刺激小鼠产生较高效价的血清和阴道粘膜特异性抗体 ,诱导脾脏淋巴细胞增殖 ,促进细胞因子IL 4的分泌 ;将其与佛氏佐剂混悬 ,免疫雌性BALB c小鼠可明显降低受孕率和每胎产仔率 ,其抗血清可显著抑制体外精 卵结合和融合。结论 新型嵌合肽具有较明确的抗生育作用 ,提示以分子设计、蛋白质优化方案进行多价避孕疫苗的研究是可行的。
- 何畏吴玉章梁志清李玉清史常旭
- 关键词：睾丸特异性抗原免疫避孕精子合成肽
- 人工合成的人精子抗原多肽抗体与人精子结合的生物学特性研究
- 2004年
- 目的 对人工合成的精子多肽 ( 3 5肽 )抗原抗体与人精子的结合情况进行评价。方法 获得抗 3 5肽抗体后 ,用荧光素直接进行标记 ,通过流式细胞仪检测抗体与精子的结合率 ,并在荧光显微镜下观察抗体与人精子的结合部位。结果 人精子抗 3 5肽抗体阳性率为 97 7% ,荧光显微镜下见精子头颈部着色 ,部分见赤道板及头部顶端着色增强。结论 3 5肽在人精子头表面有高度表达 ,抗 3 5肽抗体可与人精子表面高度特异结合。
- 李玉艳梁志清何畏李玉清史常旭
- 关键词：精子合成多肽抗体流式细胞术
- 抗精子多肽抗体体外抗受精作用的初步研究
- 2004年
- 目的 评价一种抗人工合成的精子多肽 ( 3 5肽 )抗体对人精子受精功能的影响情况。方法 将含抗 3 5肽抗体的兔血清与人精子共同孵育 ,用计算机辅助精液分析系统 (computeraimedspermassay ,CASA)检测精子活动力 ,以及检测顶体反应率和穿卵率。结果 抗 3 5肽抗体兔血清可显著抑制精子的速度 (包括直线速度、曲线速度和平均路径速度 )、活动精子百分比、顶体反应率及穿卵率。结论 抗 3 5肽抗体可抑制人精子受精功能 ,3 5肽作为一种避孕疫苗有一定开发前景。
- 李玉艳梁志清何畏李玉清史常旭
- 关键词：抗精子抗体
