江苏省自然科学基金(BK2005406) 作品数:6 被引量:9 H指数:2 相关作者: 季明春 李国才 王劲松 朱立天 焦红梅 更多>> 相关机构: 扬州大学 更多>> 发文基金: 江苏省自然科学基金 江苏省高校自然科学研究项目 更多>> 相关领域: 生物学 医药卫生 更多>>
人CD46启动子真核表达载体的构建 被引量:4 2007年 为了构建人CD46(hCD46)启动子指导目的基因表达的真核表达载体,提取HeLa细胞基因组DNA,用PCR扩增出hCD46基因的启动子区域,序列分析结果表明其与GenBank中hCD46基因5′端某片段的同源性为99.9%。用此启动子替换pcDNA3EGFP中的CMV启动子,并在hCD46启动子和EGFP基因之间插入兔β-球蛋白基因第二内含子(RGI),得到的重组表达载体转染CHO和SP2/0两种鼠源细胞,流式细胞术检测表明CHO细胞EGFP的表达量高于SP2/0细胞,表达特性与人体CD46相似;RGI可以增强EGFP的表达量,但不改变其表达的组织特异性,提示克隆的hCD46启动子可以用于研制模拟人体CD46基因表达特性的转基因小鼠。 李国才 王劲松 焦红梅 朱立天 潘兴元 季明春关键词:真核表达载体 EGFP 淋病奈瑟菌NspA基因疫苗诱导小鼠特异性体液免疫应答 被引量:2 2007年 1999年Martin等首先克隆了淋病奈瑟菌表面蛋白A(Neisseria surface protein A,NspA)基因,发现其在细胞表面持续表达,菌株之间NspA氨基酸序列的同源性高达98%,提示NspA可能是研制淋病疫苗的理想抗原。我室已成功构建NspA真核表达载体pcNspA,本文研究了pcNspA基因免疫在小鼠体内诱生特异性抗体的作用。 蒋桂花 李国才 王劲松 龚卫娟 朱立天 季明春关键词:淋病奈瑟菌 特异性抗体 体液免疫应答 A基因 疫苗诱导 小鼠 淋病奈瑟菌对hCD46基因转染COS-1细胞的黏附 2008年 为研究人CD46(hCD46)在菌毛介导的淋病奈瑟菌宿主特异性黏附过程中的作用。用连接PCR技术扩增出启动子与cDNA相连的hCD46小基因,并将其置换出pcDNA3.1载体中的CMV启动子,构建成重组真核表达载体pCD46。转染COS-1细胞后用间接免疫荧光法检测到hCD46cDNA在其自身启动子的指导下可在COS-1细胞膜表面有效表达,Western blotting检测表明表达产物的分子量正确,用流式细胞术分选表达hCD46的基因转染细胞COS-1-46。细菌黏附实验显示菌毛阳性淋病奈瑟菌临床分离株对COS-1-46细胞有较强的黏附性。提示hCD46是菌毛介导的淋病奈瑟菌特异性黏附于人黏膜细胞的一种重要受体,hCD46小基因可用于淋病奈瑟菌感染转基因小鼠模型的制备。 李国才 王劲松 朱立天 王晓红 焦红梅 潘兴元 季明春关键词:淋病奈瑟菌 hCEACAM1介导淋病奈瑟菌对COS-1细胞的黏附 2008年 目的研究人癌胚抗原相关细胞黏附因子1(hCEACAM1)在淋病奈瑟菌黏附宿主细胞过程中的作用。方法将hCEACAM1 cDNA置于hCD46启动子和兔β-球蛋白第2内含子之后,构建重组真核表达载体pCDPGICEA1。转染COS-1细胞,G418筛选和流式细胞术分选稳定表达hCEACAM1的基因转染细胞。细菌黏附实验检测淋病奈瑟菌对基因转染COS-1细胞的黏附。结果在hCD46启动子和兔β-球蛋白第2内含子的作用下,hCEACAM1 cDNA在COS-1细胞获得高效表达,淋病奈瑟菌可以黏附表达hCEACAM1的COS-1细胞。结论hCEACAM1可以介导淋病奈瑟菌对动物细胞的黏附,可能是淋病奈瑟菌特异性感染人体的一种重要受体,可用来制备淋病奈瑟菌感染的相应转基因动物模型。 李国才 王劲松 朱立天 焦红梅 季明春关键词:淋病奈瑟菌 基因转染 利用雌激素构建小鼠淋病奈瑟菌感染模型 被引量:2 2007年 目的探讨用雌激素构建淋病奈瑟菌感染小鼠模型的方法。方法淋病奈瑟菌WHO-A接种经皮下注射苯甲酸雌二醇和真皮下埋植尼尔雌醇片(雌三醇)预处理的雌性ICR小鼠,小鼠阴道拭子接种T-M选择培养基培养分离淋病奈瑟菌,取小鼠阴道分泌物涂片染色观察淋病奈瑟菌感染情况,比较两种雌激素对小鼠淋病奈瑟菌感染的差异。结果与对照组相比,苯甲酸雌二醇小鼠体内淋病奈瑟菌有短时间的定植,而尼尔雌醇组与对照组无差异。结论雌激素(尤其是雌二醇)有利于淋病奈瑟菌在小鼠阴道内的定植。 蒋桂花 李国才 夏怡吉 陈荣 季明春关键词:雌激素 淋病奈瑟菌 小鼠 动物 奈瑟氏淋球菌感染小鼠实验模型的研究 被引量:1 2005年 奈瑟氏淋球菌容易感染人,却难以感染所有常用实验动物,因此长期以来一直缺少合适的实验动物模型,严重限制奈瑟氏淋球菌的研究进展。雌激素有一定的抗炎作用,利用雌激素处理的小鼠建立奈瑟氏淋球菌实验感染模型,有助于奈瑟氏淋球菌感染机制、疫苗的开发的研究,有助于抗菌药物的筛选与评价。本文将对该实验感染模型研究情况作一综述。 蒋桂花 季明春 李国才关键词:小鼠