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不同猪胰岛素前体基因拷贝数Mut^+型毕赤酵母的摇瓶发酵研究: 2010年; 毕赤酵母是优秀的外源蛋白的表达系统之一。本文对Mut^+型的不同PIP基因拷贝数的毕赤酵母进行了摇瓶试验。研究了生长特性以及对外源蛋白表达量的影响等。发现了低拷贝和高拷贝的蛋白表达量、生长情况有差异。G12重组菌的PIP表达量最高为181.6mg/L,是单拷贝重组菌表达量的12.6倍。对于基因拷贝数低于12的菌株,PIP表达水平与PIP基因拷贝数成线性关系(r=0.996)。; 张明郭美锦庄英萍储炬张嗣良; 关键词：重组毕赤酵母基因拷贝数猪胰岛素前体

Tween-80对Pichia pastoris表达重组人复合α干扰素聚合的影响研究被引量：1: 2008年; 在5 L发酵罐使用Pichia pastoris表达重组人复合α干扰素(cIFN),考察了Tween-80添加量(以质量体积比计)及添加时间对单体cIFN表达量、生物活性及菌体生长的影响。结果表明,诱导相温度为25℃时,添加0.01%Tween-80能明显抑制cIFN发生聚合,单体含量从41.2%显著提高到82.3%;添加0.04%Tween-80后,生物活性从1.91×108IU.mL-1提高到3.73×108IU.mL-1;在诱导开始后不同时间加入0.02%Tween-80,一段时间后cIFN单体表达量均明显提高。且Tween-80的添加并不影响总蛋白表达和菌体生长。; 杨琪郝玉有储炬王永红张嗣良庄英萍; 关键词：TWEEN-80

重组植酸酶高表达与新型智能称量式补料装置的工业应用被引量：1: 2009年; 针对重组毕赤酵母（Pichia pastoris GS115-phy）表达的基因工程产品的高吨位发酵罐的工业生产，采用称重传感器与计算机组合方式设计并制造了一新型智能称量式补料系统，具有高精度和重复性。智能称量式补料装置与电子秤对比试验误差均在-0．001—0．009kg之间，相对误差小于0．5％。将智能称量式补料装置应用于重组植酸酶发酵，很好地控制了甲醇补料速率，在25m3发酵罐中211h植酸酶表达量达到23，077U／ml的高水平。; 刘健张伟平张恂张明郭美锦张嗣良

pH对毕赤酵母表达重组人复合α干扰素的降解影响被引量：11: 2008年; 使用Pichiapastoris表达重组人复合0c干扰素（cIFN）会发生降解、聚合等不均一表达的现象。在5L发酵罐中考察了不同诱导pH对cIFN表达产生降解的影响，结果发现在适合酵母生长的pH3．0-7．0范围内，当诱导pH为4．0~5．0时，cIFN不均一表达现象最少，生物活性达到2．5×1O^8IU／mL。通过测定发酵液中总蛋白酶活和细胞活性寻找了cIFN降解出现的原因：发现低诱导pH下细胞死亡率升高释放更多酶系，高诱导pH下蛋白酶活性明显增大，两者都使蛋白酶作用加强，加剧cIFN的降解；特别是诱导pH为7．0时，适宜的pH使蛋白酶酶活陡升，将cIFN完全降解。; 张盛郝玉有储炬王永红郭美锦张嗣良庄英萍; 关键词：PH 降解流式细胞仪

龟裂链霉菌zwf2基因敲入及阻断对土霉素合成的影响被引量：3: 2009年; 目的考察敲入及阻断zwf2基因对6-磷酸葡糖脱氢酶(G6PDH)活性、细胞生长、土霉素合成的影响。方法构建敲入转化子M4018-(zwf2)和阻断转化子M4018-Δzwf2后,以原始菌株为对照,比较敲入转化子菌株M4018-(zwf2)和阻断转化子菌株M4018-Δzwf2摇瓶发酵后G6PDH活性、细胞生长、土霉素合成等生物性质的变化。结果阻断转化子菌株M4018-Δzwf2的G6PDH活性是原始菌的50%左右,敲入转化子菌株M4018-(zwf2)的G6PDH活性则略高于原始菌;阻断转化子菌株M4018-Δzwf2土霉素生物合成水平比原始菌提高27%,比敲入转化子菌株M4018-(zwf2)高约40%;发酵结束时敲入转化子菌株M4018-(zwf2)的细胞干重高于其他2株菌,其它2株菌的细胞干重差异不大。结论zwf2阻断有利于土霉素的生物合成,zwf2增强则对细胞生长有利。; 廖瑜玲刘志勇唐振宇郭美锦庄英萍张嗣良

A Systematical Investigation of Foreign Gene Dosage Effect in Picihia Pastoris Expression System: ＜正＞Foreign gene dosage effect has been a long discussed issue for Pichia pastoris expression sys- tem.Most stu...; 文献传递

重组毕赤酵母甲醇利用表型与基因拷贝数对外源基因表达的影响被引量：27: 2007年; 毕赤酵母是目前最优秀的外源蛋白表达系统之一。着重对重组毕赤酵母甲醇利用表型(Mut+型、MutS型和Mut-型)、基因剂量对外源蛋白高效表达的影响机理进行综述。MutS型的比生长速率和蛋白产率比Mut+型低、发酵周期长、副产物(如乙醇、乙酸等)形成速率不同。外源基因拷贝数对外源蛋白的影响主要有三种情况:(1)高基因拷贝数对外源蛋白表达水平有明显的正效应作用;(2)基因拷贝数增加反而降低了表达水平,即负效应作用;(3)重组蛋白表达与基因剂量正相关,之后则表现负相关关系,这可能与外源蛋白翻译后加工有关(如二硫键形成、折叠等),而与分子伴侣共表达可促进外源蛋白的高表达。; 郭美锦朱泰承张明储炬庄英萍张嗣良; 关键词：重组毕赤酵母表型

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国家自然科学基金(30560006)