天津市自然科学基金(013615811)
- 作品数：9 被引量：19H指数：2
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- 相关机构：天津医科大学天津市第一医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 重叠延伸PCR方法的建立与应用被引量：11
- 2005年
- 目的建立一种新型PCR技术(重叠延伸PCR)并用于腺病毒早期基因E1A与内核蛋白体进入位点IRES(internalribosomeentrysite)的直接连接,为构建复制型腺病毒载体作准备。方法以PcAE1A质粒与PIRES-EGFP质粒为模板,通过引物设计,使E1A基因3’端与IRmES基因5’端具有相互重叠的一段序列,用该组引物行PCR分别扩增E1A基因与IRES基因,再以这两种PCR产物的混合物作为模板,进行重叠延伸PCR扩增E1A-IRES基因片段。结果经酶切及测序鉴定重叠延伸PCR方法成功构建了E1A-IRES基因片段。结论重叠延伸PCR法能将任意两段DNA序列连接起来,其在分子生物学的领域中具有潜在应用价值。
- 曹阳李冬田尹冰楠佟惠春
- 关键词：腺病毒载体
- 腺病毒介导CDES融合基因对乳腺癌细胞的抑制作用
- 2005年
- 目的:构建一种重组腺病毒rAdCDES,在体内外进行抑瘤和放疗增敏作用实验研究。方法:用细菌内同源重组法与腺病毒骨架质粒重组构建出重组腺病毒质粒,经脂质体介导转染293包装细胞扩增获取重组腺病毒rAdCDES。用测定生长曲线和MTT法检测其对人乳腺癌细胞株MCF-7的生长抑制情况;建立津白号鼠乳腺癌模型,观察rAdCDES和放疗对瘤体大小及鼠存活期的影响。结果:成功构建了rAdCDES;rAdCDES对MCF-7细胞生长抑制率达(83.1±8.1)%,与对照rAdLacZ (19.2±7.8)%相比较有显著性差异(P<0.01);体内rAdCDES对小鼠乳腺癌MA737细胞有明显生长抑制作用,延长了小鼠的存活期,且对放疗有肯定的增敏作用。结论:本文所构建的rAdCDES在体内外对乳腺癌细胞均有明显的抑制作用和对放疗的增敏作用。
- 李秋香李冬田佟惠春尹冰楠李光明
- 关键词：乳腺癌腺病毒基因疗法
- 重组腺病毒rAdCDglyES体内抑瘤作用的研究
- 2005年
- 目的:探讨重组腺病毒rAdCDglyES对肺癌的体内抑、杀瘤作用。方法:建立近交纯系C57BL小鼠Lewis肺癌模型;于小鼠荷瘤部位注射定量的重组腺病毒rAdCDglyES并给予5-氟胞嘧啶。通过观测小鼠瘤体大小、重量,中位生存期,及组织病理学改变判定疗效。结果:对荷瘤小鼠连续10d的治疗观测后发现,实验组与对照组之间平均瘤重有显著性差异(P<0.05);对荷瘤小鼠的中位生存期比较发现实验组较对照组天数有显著性差异(P<0.05);对实验组和对照组肿瘤进行HE染色后病理检测,镜下所见,含ES基因的实验组小鼠瘤组织血管数明显少于对照组,仅为对照组的53.85%(14/26)。结论:rAdCDglyES/5-FC对C57BL小鼠的Lewis肺癌有明显的抑杀瘤作用。
- 李光明李冬田尹冰楠李秋香佟惠春
- 关键词：自杀基因
- 恶性肿瘤基因治疗载体的研究进展被引量：4
- 2005年
- 曹阳李冬田
- 关键词：恶性肿瘤基因治疗
- AdCDES对人肺癌细胞增殖抑制作用的研究被引量：1
- 2004年
- 目的 :观察构建的AdCDES重组腺病毒对人肺腺癌细胞A549增殖的抑制作用。方法 :采用同源重组法构建AdCDES。用测定生长曲线和MTT法观察AdCDES和5FC系统对人肺腺癌细胞A549的生长抑制率。结果 :AdCDES转染A549后对细胞生长有明显的抑制作用 ,且对细胞抑制率随AdCDES、5FC的浓度及药物作用时间的增加而增高 ,差别有统计学意义。结论 :AdCDES和5FC系统对肺腺癌细胞A549有明显抑制作用 。
- 李秋香刘俊燕李菲佟惠春
- 关键词：肺癌细胞增殖癌细胞
- 乳腺癌rAdCDES基因治疗的体内外实验研究
- 2004年
- 李秋香李冬田佟惠春尹冰楠李光明
- 关键词：肿瘤治疗重组腺病毒基因治疗
- 肝细胞癌基因治疗的体外实验研究被引量：1
- 2003年
- 目的 :构建一种对肝细胞癌有直接、间接治疗作用的重组腺病毒。方法 :用PCR方法扩增CD基因和glyES基因片段 ,插入腺病毒穿梭质粒。用细菌内同源重组方法与腺病毒骨架质粒重组构建出重组腺病毒质粒。经脂质体介导转染293包装细胞扩增获取重组腺病毒rAd CDglyES。用MTT法检测其对肝癌细胞株 (SMMC -7721)的生长抑制率及其表达产物对经ECGF处理的脐静脉血管内皮细胞 (ECV -304)增殖的影响。结果 :纯化的重组腺病毒滴度为1×1013 3TCID50/L ,对SMMC 7721的生长抑制率达 (82 1±8 3) % ,与对照组 (24 6±14 1) %比较有显著性差异 (P<0 01)。浓缩的转染了该重组腺病毒的细胞培养上清液对ECV 304细胞增殖的抑制率为(78 7±1 8) % ,而同样浓缩的转染了对照重组腺病毒rAd CD的细胞培养上清液的抑制率仅为 (24 2±9 7) % ,两者亦有显著性差异 (P<0 01)。结论 :rAd
- 李菲李冬田张巍佟惠春尹冰楠
- 关键词：肝细胞癌基因治疗体外实验研究胞苷脱氨酶腺病毒
- 重组腺病毒rAdCDglyES治疗宫颈癌的体外实验研究被引量：1
- 2008年
- 目的:构建含CDglyES融合基因的重组腺病毒,并观察其在体外对宫颈癌细胞的直接抑瘤作用和对血管内皮细胞的抑制作用。方法:用PCR方法扩增CD基因和glyES基因片段,构建成腺病毒穿梭质粒pAdCDglyES。用细菌内同源重组方法与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1重组构建出重组腺病毒质粒prAdCDglyES。经脂质体介导转染293细胞,进而扩增获取重组腺病毒rAdCDglyES。用MTT法检测rAdCDglyES/5-FC系统对宫颈癌细胞株HeLa细胞的生长抑制率及其表达产物对脐静脉血管内皮细胞ECV-304增殖的影响。结果:纯化的rAdCDglyES滴度为1×1013.3TCID50/L,对HeLa细胞的生长抑制率达(84.1±7.3)%,高于对照rAd-LacZ/5-FC系统的(23.1±14.1)%,差异有统计学意义(P<0.01)。浓缩的转染了rAdCDglyES的细胞培养上清液对ECV-304细胞增殖的抑制率为(77.7±1.8)%,高于同样浓缩的转染rAd-CD细胞培养上清液抑制率的(22.9±9.7)%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:rAdCDglyES在体外对宫颈癌具有直接和间接抑瘤作用。
- 李圃李冬田尹冰楠汤华
- 关键词：胞嘧啶内皮抑素类重组蛋白质类腺病毒科
- 肿瘤靶向性腺病毒载体研究进展被引量：1
- 2006年
- 近年来,腺病毒载体广泛应用于恶性肿瘤的靶向性基因治疗的研究。对传统腺病毒载体的改造策略主要包括:通过改造腺病毒的嗜性,构建感染靶向性腺病毒载体,如纤维嵌合型靶向性腺病毒载体和免疫靶向性腺病毒载体;在转录水平,控制外源基因的靶向表达或腺病毒基因组自身的靶向复制,即转录靶向性腺病毒载体和选择性裂解肿瘤细胞的条件复制型腺病毒载体。
- 周丽君李秋香
- 关键词：腺病毒肿瘤基因疗法
