国家自然科学基金(30000148)
- 作品数：7 被引量：11H指数：2
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- 抗角蛋白抗体在活细胞反应部位的观察被引量：3
- 2003年
- 目的 :观察抗角蛋白抗体在活细胞的反应部位 .方法 :以鼠抗人角蛋白的IgG单克隆抗体作用于培养中的Tca8113,以抗乙肝病毒表面抗原抗体做阴性对照 ,同时设置阳性对照和空白对照 .细胞固定、包埋后与FITC标记的羊抗鼠IgG结合 ,用荧光显微镜观察细胞的荧光着色 ;以胶体金标记的羊抗鼠IgG抗体染色 ,用透射电镜观察胶体金颗粒的部位 .结果 :抗角蛋白mAb作用的Tca8133细胞胞质呈亮绿色 ,着色较均匀 ,细胞核未见着色 .两种对照均未见着色 .抗角蛋白抗体作用的Tca8133细胞胞质的中间丝有胶体金颗粒 ,与阳性对照组类似 .阴性对照组及空白对照均未见胶体金颗粒 .结论 :抗角蛋白抗体可以进入活细胞 。
- 武彩霞刘玉峰李承新夏汝山卢宁
- 关键词：抗角蛋白抗体活细胞
- 抗角蛋白单克隆抗体对舌鳞癌细胞角蛋白酪氨酸磷酸化的作用
- 2005年
- 目的观察抗角蛋白抗体对角蛋白酪氨酸磷酸化的影响。方法以鼠抗人角蛋白的IgG单克隆抗体作用于培养中的Tca8113,以抗乙肝病毒表面抗原抗体做阴性对照,同时设置阳性对照和空白对照。细胞固定、包埋后以胶体金标记的羊抗鼠IgG抗体染色,用透射电镜观察。提取抗体作用过Tca8113细胞角蛋白,以抗乙肝病毒表面抗原抗体作用的细胞做阴性对照。不同分子量的角蛋白经SDSPAGE分离后转膜,用抗酪氨酸磷酸化抗体作用、显色。结果抗角蛋白抗体作用的Tca8133细胞胞质的中间丝有胶体金颗粒,与阳性对照组类似。阴性对照组及空白对照均未见胶体金颗粒。转膜后染色,在分子量大约58KD处出现阳性条带。阴性对照未出现条带。结论抗角蛋白抗体结合于胞浆中间丝,58KD角蛋白发生酪氨酸磷酸化。
- 武彩霞刘玉峰李巍李承新
- 关键词：抗角蛋白抗体角蛋白酪氨酸磷酸化
- 酪氨酸蛋白激酶抑制剂对正常人角质形成细胞增殖的影响
- 2001年
- 目的 观察酪氨酸蛋白激酶抑制剂 genistein对体外培养的正常人角质形成细胞增殖代谢的影响 .方法 将不同浓度的 genistein(GST)作用于体外培养的正常人角质形成细胞 ,测定 MTT值及 3 H- Td R参入量 ,并用流式细胞仪测定细胞周期的变化 .结果 以对照组 MTT和 A490 nm值作为百分之百 ,不同浓度的 GST(10 - 7,10 - 6,10 - 5m ol· L- 1 )的 MTT和 A490 nm值变化率分别为 (90 .8± 5 .2 ) % ,(76 .5± 4.8) %和(6 4.3± 5 .7) % (P<0 .0 1) ,cpm值的变化率分别为 (87.1±4.9) % ,(73.4± 5 .3) %和 (5 7.6± 5 .6 ) % (P<0 .0 1) .表明不同浓度的 GST可明显抑制角质形成细胞的代谢与 DNA合成 ,并存在着剂量效应 .与对照组相比 ,10 - 5mol· L- 1的GST作用 2 4h可使体外培养的正常人角质形成细胞 G1 期细胞比例明显增加 (4 0 .3% vs 71.6 % ,P<0 .0 1) ,而 G2 +S期细胞比例则明显下降 (5 9.7% vs2 8.4% ,P<0 .0 1) .结论 GST在体外能明显抑制体外培养的正常人角质形成细胞的增殖与代谢 .
- 李承新迟素敏刘玉峰万业宏王强
- 关键词：拮抗剂抑制剂角蛋白细胞增殖银屑病
- 角蛋白及p38丝裂原活化的蛋白激酶磷酸化对角质形成细胞增殖抑制的调控被引量：2
- 2006年
- 目的:研究抗角蛋白抗体对角蛋白及p38丝裂原活化的蛋白激酶(MAPK)磷酸化的影响。方法:提取抗体作用过的人舌鳞状细胞癌(Tca)细胞角蛋白,以未经抗体作用的细胞作阴性对照。角蛋白经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离、转膜,用抗酪氨酸磷酸化抗体作用和显色。超声裂解抗体作用细胞,设置阴性对照。经SDS-PAGE分离、转膜后用抗磷酸化p38MAPK抗体作用,化学发光剂发光显影。结果:角蛋白在分子质量大约为58ku处出现阳性条带;阴性对照未出现条带。抗磷酸化p38MAPK抗体作用后在分子质量大约44ku处有阳性条带;阴性对照在相应处未出现条带。结论:角蛋白及p38MAPK磷酸化是Tca细胞增殖抑制的重要调控方式。
- 武彩霞李承新李巍刘玉峰
- 关键词：角质形成细胞抗角蛋白角蛋白酪氨酸磷酸化
- 表皮生长因子和牛垂体提取物对无血清培养的人垂体腺瘤细胞的作用被引量：3
- 2002年
- 目的 观察表皮生长因子 (EGF)和牛垂体提取物(BPE)在人垂体腺瘤细胞培养中的作用 .方法 将不同浓度的EGF和BPE作用于体外培养的人垂体腺瘤细胞 ,用MTT及3 H TdR掺入法测定细胞增殖及DNA代谢的变化情况 ,并用TUNEL和台盼蓝染色观察细胞凋亡和死亡情况 .结果 不同浓度的EGF和不同浓度的BPE对体外无血清培养的人垂体腺瘤细胞均表现出明显的刺激作用 ,并呈一定的剂量效应关系 .同时 ,EGF和BPE均可降低体外无血清培养的人垂体腺瘤细胞的死亡及凋亡数量 .以含 10 0mL·L-1血清的DMEM培养液组的A490nm 值和cpm值为 10 0 % ,无血清的DMEM组的A490nm值和cpm值为 (8.6± 5 .2 ) %和 (9.4±5 .4 ) % ;含 2 0mg·L-1EGF和 1mg·L-1BPE的无血清DMEM培养液组的A490nm 值和cpm值为 (98.7± 5 .3) %和(10 2 .4± 5 .5 ) % ,而凋亡指数 (AI)仅为 3.5± 0 .9,提示EGF和BPE之间具有协同作用 .结论 EGF和BPE具有明显改善人垂体腺瘤细胞体外无血清培养条件的作用 。
- 迟素敏李承新刘亚莉顾建文陈建康
- 关键词：表皮生长因子尿抑胃素垂体肿瘤垂体腺瘤
- 木黄酮对人催乳素瘤细胞增殖及其凋亡影响的实验研究被引量：1
- 2001年
- 目的 :观察木黄酮 (genistein ,GST)对培养的人垂体催乳素瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法 :将GST、β 雌二醇(E2 )作用于体外培养的人催乳素瘤细胞 ,测定MTT值及3 H TdR掺入量 ,流式细胞仪测定细胞周期 ,并用TUNEL法观察细胞凋亡情况。结果 :不同浓度的GST可抑制催乳素瘤细胞的增殖 ,并存在着剂量效应 ,10 - 5 mol·L- 1 GST可使G1 期的细胞比例从对照组的 5 5 3%上升为 90 3% ;不同浓度的E2 以剂量依赖方式刺激催乳素瘤细胞的增殖 ,并使G2 期的细胞比例从对照组的 15 6 %上升为 41 8%。GST和E2 的共同作用仍可抑制催乳素瘤细胞的增殖 ,但抑制程度降低。不同浓度的GST均明显促进催乳素瘤细胞的凋亡 ,E2 对GST的促凋亡作用无明显影响。结论 :GST在体外能明显抑制培养人催乳素瘤细胞的增殖 ,并促进其凋亡。E2 可部分拮抗GST的抑制增殖作用 。
- 迟素敏李承新朱运龙刘亚莉顾建文陈建康
- 关键词：木黄酮催乳素瘤细胞增殖细胞凋亡豆类食品
- 人源性抗角蛋白单链抗体的构建及表达被引量：2
- 2003年
- 目的用基因工程技术制备人源性抗角蛋白抗体单链抗体(singlechainFv,ScFv),并对其抗原结合特性等进行鉴定。方法利用基因重组技术对从半合成噬菌体抗体库中克隆的人源性抗角蛋白抗体Fab片段进行改造,获得了人源性抗角蛋白ScFv片段,并进行DNA序列分析。同时用ELISA法鉴定ScFv的抗原结合活性和特异性。结果DNA序列分析结果表明,单链抗体表达载体(pScFv)的Vκ和VH基因序列同Fab片段的Vκ和VH基因序列完全相同,表明在Fab片段改建成ScFv过程中未发生基因突变。可溶性表达的ScFv抗体能特异性地与角蛋白结合,而与其它抗原,如铁蛋白、胃蛋白酶、HBsAg等无关抗原不结合,说明人源性抗角蛋白Fab抗体改建为ScFv后具有较好的特异性,但可溶性表达的ScFv与角蛋白的结合活性低于可溶性Fab片段。结论成功表达并鉴定了人源性抗角蛋白的ScFv可溶性片段,为人源性抗角蛋白抗体工程化、进一步研究该抗体的生物活性并提高其临床应用价值奠定了基础。
- 李承新刘玉峰王刚李春英万业宏李巍
- 关键词：基因工程技术DNA序列分析ELISA法角质形成细胞
