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肿瘤多药耐药形成机制研究进展被引量：16: 2009年; 恶性肿瘤的发病率呈逐年上升趋势，化疗的应用也更加广泛和迫切，但多药耐药的存在严重影响了化疗的疗效，因此多药耐药的逆转一直是肿瘤研究领域的研究热点。随着分子生物学技术的发展，肿瘤多药耐药机制形成的研究越来越深入，更多的产生机制被揭示，以利于针对耐药形成的机制进行逆转。本文对肿瘤多药耐药机制的研究进展予以综述。; 潘光栋严律南; 关键词：肿瘤多药耐药

猪细小病毒自然弱毒N株遗传稳定性研究被引量：3: 2008年; 本研究将PPV-N株通过敏感猪三代、猪肾传代细胞25代,测定该毒株对敏感猪的致病性,结果表明将PPV-N株连续分别通过PPV HI抗体阴性的4月龄小猪、后备母猪、怀孕母猪三代,均未从试验猪检出病毒血症和分离到病毒,且母猪产仔正常。在IBRS-2细胞中连续传代,随着传代次数的增加其细胞病变未见异常,毒价稳定在103.5TCID50/mL。将第1、5、10、15、20、25代病毒培养物接种PPV HI抗体阴性怀孕母猪,未从母猪测出病毒血症和检出病毒,所产仔猪PPV HI抗体阴性,未从弱仔猪脏器分离到病毒,说明该毒株毒力不返强,具有良好的遗传稳定性。这为该弱毒株成为一株良好的自然弱毒疫苗株提供了依据。; 杜坚白安斌梁家幸梁保忠赵武李斌黄安国姚瑞英蒋玉雯; 关键词：猪细小病毒

猪细小病毒N株耐热性研究被引量：3: 2009年; 观察不同温度对猪细小病毒N株血凝活性的影响。结果表明,猪细小病毒N株在37℃条件下十分稳定,作用28d血凝滴度变化不大,只下降1～3个滴度;在60℃恒温水浴下的血凝滴度变化缓慢,血凝滴度在前7d一直稳定;随着温度的升高,病毒血凝的稳定性迅速降低,短时间内即可失去血凝活性,在75℃1h、80℃10min、85℃5min,检测不出病毒血凝活性。由此证明,猪细小病毒N株在37、60℃时血凝活性十分稳定,对热有很强的抵抗力,为将该弱毒株开发成方便运输、保存和使用的疫苗提供了依据。; 白安斌梁家幸梁保忠杜坚赵武李斌姚瑞英黄安国蒋玉雯叶敏杨娟; 关键词：温度血凝活性

猪细小病毒自然弱毒N株VP2基因的克隆及原核表达被引量：1: 2011年; 为了进一步研究猪细小病毒自然弱毒株(PPV-N株)的自然弱毒分子生物学机理,对PPV-N株VP2基因进行克隆、测序和原核表达研究。结果表明,成功构建PPV-N株VP2基因的克隆重组质粒pMD18-T-VP2及表达重组质粒pET32a-VP2,经SDS-PAGE及Western blotting鉴定,PPV-N株VP2基因在BL21(DE3)plysS菌中成功进行融合表达,表达出约85.4 KDa的VP2融合蛋白,且表达的VP2融合蛋白能与PPV阳性血清发生特异性反应。PPV-N株VP2基因的成功克隆及原核表达为今后研究PPV-N株的自然弱毒的分子生物学机理和研制PPV诊断抗原奠定了基础。; 李斌苏乾莲赵武梁家幸梁保忠何颖秦毅斌何苹萍; 关键词：VP2基因原核表达

猪细小病毒主要非结构蛋白与结构蛋白的密码子偏爱性分析被引量：6: 2008年; 通过分析猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)主要非结构蛋白(non-structural protein,NS1)及结构蛋白(VP1、VP2)的密码子偏爱性,为三种蛋白基因表达中宿主系统的选择提供参考。运用EMBOSS(The European Molecular Biology Open Software Suite)的CHIPS(Codon Heterozygosity in aProtein Coding Sequence)和CUSP(Create a codon usage table)程序对PPV的NS1、VP1和VP2蛋白基因进行分析,并将分析结果与大肠杆菌、酵母及人的密码子偏爱性进行比较。结果显示,PPV的NS1、VP1、VP2基因的Nc(Effective number of codons)值分别为39.696、36.638和36.482,表明三种蛋白存在较明显的密码子偏爱性,并且均偏爱选择第三位核苷酸为A的密码子。PPV三种蛋白与大肠杆菌、酵母及人的密码子偏爱性也有一定差异,其中与酵母的密码子偏爱性差异最小,其表达系统选择酵母较为合适。; 赵武李斌梁家幸梁保忠姚瑞英黄安国何颖蒋玉雯; 关键词：猪细小病毒非结构蛋白结构蛋白密码子偏爱性

猪细小病毒自然弱毒N株非结构蛋白NS1基因原核表达被引量：5: 2010年; 为进一步探讨猪细小病毒自然弱毒N株(PPV-N株)的分子病原学机理,根据GenBank上已发表的PPV全基因组序列(登录号NC_001718)设计1对引物,通过PCR方法扩增获得PPV-N株NS1全长基因,将其克隆到pMD18-T载体上,进而构建原核表达重组质粒pET32a-NS1,并在BL21(DE3)pLysS中进行IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳显示NS1在大肠杆菌中得到成功表达,重组蛋白大小约为90.0 kDa;Western blotting分析表明,该蛋白能与PPV阳性血清发生特异性反应,证明该蛋白具有良好生物学活性。NS1在大肠杆菌中成功表达,且具有免疫原性,可作为PPV临床鉴别诊断抗原。; 苏乾莲李斌赵武梁家幸梁保忠何颖秦毅斌何苹萍; 关键词：猪细小病毒 NS1 原核表达

猪细小病毒自然弱毒N株VP1蛋白二级结构及B细胞抗原表位预测被引量：2: 2008年; 以PPV—N株的VP1蛋白基因序列为材料，采用Chou—Fasman、Garnier—Robson和Karplus—Schultz预测VP1蛋白的二级结构，用Kyte—Doolittle法预测VP1蛋白的亲水性，用Emini法预测VP1蛋白的表面可能性，用Jameson—Wolf法预测VP1蛋白的抗原指数，然后综合分析VP1蛋白的B细胞抗原表位。结果表明，PPV—N株VP1蛋白的二级结构以β-折叠为主，并有较多的转角和无规则卷曲区域，在序列的20～56、61～80、86～130、136～188区域最有可能是B细胞抗原表位的优势区域。本研究为PPV—N株的自然弱毒分子机理以及反向疫苗学研究提供了一定的理论依据。; 李斌赵武梁家幸梁保忠姚瑞英黄安国何颖蒋玉雯; 关键词：VP1蛋白 B细胞抗原表位

猪细小病毒N株免疫期测定被引量：3: 2009年; 用PPV-N株制备成弱毒疫苗,在配种前1个月接种PPV HI抗体阴性的后备母猪,接种2周后检测PPV HI抗体均达到1∶256以上。当怀孕到40d时用PPV强毒攻击,攻毒后40d剖杀的2头怀孕母猪其胎儿正常健活,胎儿心血未检测到PPV HI抗体,胎儿脏器未分离到病毒;自然分娩的2头母猪,其仔猪健活,未吃初乳仔猪PPV HI抗体阴性,仔猪脏器未分离到病毒;而强毒攻击的对照猪均出现不同程度的死胎,并从未吃初乳仔猪检测到PPV HI抗体和从死胎儿肺回收到病毒。按上述方法连续观察到第3胎(免疫后15个月),证明免疫母猪怀孕到第3胎仍能抵抗PPV强毒攻击,说明PPV-N株对母猪的免疫期达1年以上。; 梁保忠白安斌梁家幸赵武杜坚李斌黄安国姚瑞英蒋玉雯; 关键词：猪细小病毒免疫期

猪细小病毒自然弱毒N株的免疫原性研究被引量：5: 2009年; 用PPV-N株接种抗体阴性后备母猪,5天产生HI抗体,7天达到保护性水平(>1∶256),14天达高峰。用该毒株对4月龄猪、后备母猪和怀孕母猪进行免疫原性试验,结果攻毒后5、7、9天未检测到病毒血症和未分离到病毒。攻毒后第40天剖杀2头怀孕母猪,见胎儿正常,胎儿心血HI抗体阴性,从胎儿脏器未分离出病毒。自然分娩的母猪,产仔正常,仔猪吃初乳前HI抗体阴性,而对照猪攻毒后产生病毒血症,并产下不同组合异常仔,从死胎儿脏器分离到病毒,活仔HI抗体阳性。试验还表明豚鼠对PPV-N株的抗体应答和猪的相似,可作为PPV弱毒株免疫抗体应答检测的实验动物。本研究结果证明,PPV自然弱毒N株具有良好的免疫原性。; 杜坚白安斌梁保忠梁家幸赵武李斌黄安国郑儒标冯军姚瑞英陈西宁蒋玉雯; 关键词：猪细小病毒免疫原性

猪细小病毒N株的安全性试验被引量：1: 2009年; 用PPV-N株常规接种量的5倍和10倍接种PPVHI抗体阴性4月龄小猪、后备母猪和怀孕母猪,接种后第5、7、9天未能从血液中检测到病毒血症,鼻咽和直肠拭子未分离到病毒,无任何异常临床症状,母猪产仔正常,初生仔猪PPVHI抗体阴性,而未接种的对照猪产仔正常,没发现同居感染。以上研究证明PPVN株对4月龄小猪、后备母猪和怀孕母猪具有良好的安全性。; 梁家幸白安斌梁保忠杜坚赵武李斌黄安国姚瑞英蒋玉雯; 关键词：猪细小病毒安全性

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