国家自然科学基金(30000118)
- 作品数：17 被引量：128H指数：10
- 相关作者：李卫芬孙建义许梓荣吕文平顾赛红更多>>
- 相关机构：浙江大学江南大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金高等学校骨干教师资助计划浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 一株产生内切β-1,4-木聚糖酶的菌株的分离、鉴定及其酶学特性研究被引量：10
- 2003年
- 内切β-1,4-木聚糖酶作为饲料添加剂可明显改善麦类的营养价值,显著提高畜禽生长速度和饲料转化率;用在纸浆漂白中可减少漂白剂的用量并提高纸张质量。利用透明圈法从长期排放食堂锅炉污水口污泥中筛选分离到一株产内切β-1,4-木聚糖酶的细菌菌株,该菌株菌体呈长杆状、革兰氏染色可变、兼性厌氧、产芽孢(次端生、孢囊膨大),鞭毛周生,命名为A3。据部分片断长度的16SrDNA序列同源性分析和生理生化试验结果,发现分离菌株与浸麻芽孢杆菌(Bacillusmacerans)最为相近。A3菌株所产内切β-1,4-木聚糖酶的最适反应温度为60℃,最适反应pH为5.0～7.0,pH7.0条件下该酶在50℃下稳定,40℃条件下该酶在pH4.0～10环境中相对稳定。
- 肖竞孙建义周德平陈艳付亮剑
- 关键词：酶学特性饲料添加剂木聚糖纸浆漂白
- 一株嗜热梭菌β-葡聚糖酶基因的克隆和表达被引量：8
- 2005年
- 提取嗜热梭菌(Clostridium.sp)基因组DNA,首次通过PCR克隆了该菌的β-葡聚糖酶基因全长,结果表明:该基因全长1040bp,ORF为1003bp,编码334个氨基酸,计算分子量为37.8kD,等电点为7.67。经Blast分析,该序列与热纤梭菌同源性最高(99%),而与基因库中嗜热梭菌的同源性为94%,该基因已被GenBank接受(AY225318)。用BamHⅠ和XhoⅠ双酶切目的片段和表达载体pET鄄30a(+)后相连接,构建重组表达载体pET鄄clo,并导入BL21细菌中表达.酶学特性表明:SDS鄄PAGE电泳在37kD左右有表达蛋白带,该工程菌最适酶活29.4U/mL,是出发菌的15倍,最适温度在80℃左右,最适pH在9左右。该工程菌可构建耐热性好、酶活高的杂合基因工程菌。
- 吕文平许梓荣孙建义李卫芬杜文理
- 关键词：动物营养与饲料科学Β-葡聚糖酶克隆大肠杆菌
- β-1,3-1,4-葡聚糖酶酶源菌株筛选、鉴定及酶基因克隆和序列分析被引量：3
- 2004年
- 目的:筛选和鉴定β-1,3-1,4-葡聚糖酶酶源菌株并对酶基因进行克隆和序列分析。方法:利用透明圈法从食堂锅炉排水口污泥中分离筛选菌株,并采用形态和生理生化特征鉴定菌株。通过PCR方法扩增酶基因,将其克隆于T-载体,用Sanger双脱氧链终止法测定序列。结果:分离筛选的β-1,3-1,4-葡聚糖酶酶源菌株呈长杆状、革兰氏染色可变、兼性厌氧、产芽孢(次端生、孢囊膨大)。生理生化试验结果表明:该菌株与浸麻芽孢杆菌(Bacillusmacerans)最为相近,命名为BacillusspA3。PCR扩增获得的酶基因全长734bp,其中开放阅读框架为717bp,编码238个氨基酸。经Blast分析,该序列与多粘芽孢杆菌(B.polymyxa)和浸麻类芽孢杆菌(B.macer-ans)相似性较高,分别为98%和82%。结论:成功分离了β-1,3-1,4-葡聚糖酶酶源菌株BacillusspA3,酶基因序列与多粘芽孢杆菌和浸麻类芽孢杆菌有较高的同源性。
- 李卫芬孙建义肖竞吕文平
- 关键词：酶基因菌株筛选Β-1,3-1,4-葡聚糖酶麻类生理生化
- 里氏木霉β-葡聚糖酶稳定性研究被引量：22
- 2001年
- 研究了里氏木霉GXCβ -葡聚糖酶的稳定性。结果发现 :β-葡聚糖酶粗酶液的稳定性高于纯酶液 ,两者的耐热温度分别为 70℃和 6 0℃ ,其pH稳定范围都为 3.0～ 5 .0。Cu2 +,Mn2 +和Fe3+对酶有抑制作用 ,Zn2 +和Co2 +有激活作用 ,其他离子Ca2 +,Mg2 +,Fe2 +和K+在不同浓度条件下对β -葡聚糖酶有不同的作用。胰蛋白酶和胃蛋白酶对 β
- 李卫芬孙建义顾赛红
- 关键词：里氏木霉Β-葡聚糖酶稳定性饲用酶制剂
- 黑曲霉木聚糖酶和β-葡聚糖酶cDNA片段克隆和序列分析被引量：7
- 2001年
- 孙建义李卫芬顾赛红许梓荣
- 关键词：黑曲霉木聚糖酶Β-葡聚糖酶CDNA片段克隆造纸工业
- 浸麻芽孢杆菌(Bacillus macerans)β-1,3-1,4-葡聚糖酶特性及其基因克隆被引量：2
- 2004年
- 对浸麻芽孢杆菌 (Bacillusmacerans)所产的β- 1,3- 1,4 -葡聚糖酶特性进行了分析。结果表明 :该酶的最适温度为5 5℃ ,在 6 0℃以下酶相对稳定。通过 PCR方法扩增和克隆了该酶基因的全长 DNA序列 ,长度为 734bp,其中开放阅读框架长 717bp,编码 2 37个氨基酸。经 Blast分析 ,该序列与已登录的浸麻芽孢杆菌和多粘芽孢杆菌 (B.polymyxa)的同源性较高 ,分别为 99%和 82 %。
- 李卫芬孙建义许梓荣吕文平
- 关键词：Β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因克隆温度
- 多粘芽孢杆菌β-葡聚糖酶特性及其基因克隆被引量：11
- 2004年
- 对多粘芽孢杆菌所产的β-葡聚糖酶特性进行了分析.结果表明:该酶的最适温度为50℃,在60℃以下酶相对稳定.通过PCR方法扩增和克隆了该酶基因的全长DNA序列,长度为734bp,其中开放阅读框架长714bp,编码238个氨基酸.经Blast分析,该序列与已登陆的多粘芽孢杆菌和浸麻芽孢杆菌的同源性较高,分别为99%和82%.
- 李卫芬陆平周绪霞
- 关键词：Β-葡聚糖酶基因克隆
- 短小芽孢杆菌β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因克隆、表达及其酶特性研究被引量：9
- 2004年
- 提取短小芽孢杆菌(Bacilluspumilus)基因组,通过PCR克隆了短小芽孢杆菌β-葡聚糖酶基因全长序列.结果表明:该基因全长754bp,ORF为717bp,编码239个氨基酸,计算分子量为26.98kD,等电点为6.08.经Blast分析,该序列与地衣芽孢杆菌同源性最高(91%),该基因首次在GenBank上登录(登录号AY164456).在克隆载体上亚克隆基因全长,构建重组表达载体pET-pum,导入大肠杆菌BL21中表达.SDS-PAGE电泳表明:在27kD左右有表达带,酶活较低(7.24U/mL),仅为出发菌酶活的16%,其最适温度为50℃左右,最适pH在5左右.
- 吕文平许梓荣孙建义李卫芬杜文理
- 关键词：Β-葡聚糖酶短小芽孢杆菌克隆
- 热纤梭菌β-葡聚糖酶基因的克隆和表达被引量：1
- 2006年
- 提取热纤梭菌(Clostridium.sp)基因组DNA,首次通过PCR克隆了该菌的β-葡聚糖酶基因全长。结果表明:该基因全长1040bp,ORF为1003bp,编码334个氨基酸,计算分子质量为37.8kD,等电点为7.67。经Blast分析,该序列与热纤梭菌同源性最高(99%),而与基因库中嗜热梭菌的同源性为94%,该基因已被GenBank接受(AY225318)。用BamHⅠ和XhoⅠ双酶切目的片段和表达载体pET-30a(+)后相连接,构建重组表达载体pET-clo,并导入BL21细菌中表达。酶学特性表明:SDS-PAGE电泳在37kD左右有表达蛋白带,该工程菌最适酶活29.4U/mL,是出发菌的15倍,最适温度80℃,最适pH9。该工程菌可作为耐热性材料构建耐热性好、酶活高的杂合基因工程菌。
- 吕文平乐国伟韩晋辉
- 关键词：Β-葡聚糖酶克隆大肠杆菌
- 淀粉液化芽孢杆菌β-1,3-1,4葡聚糖酶基因的克隆和表达被引量：10
- 2005年
- 提取淀粉液化芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)基因组,通过PCR克隆了该菌的β-1,3-1,4葡聚糖酶基因全长。结果显示,该基因全长843bp,ORF为717bp,编码239个氨基酸,计算相对分子质量为26800,等电点为6.07。经Blast分析,该序列与基因库中的淀粉液化芽孢杆菌(M15674)同源性最高(97%)。该基因已被GenBank接受(AY205562.1)。用BamH和Xho双酶切目的片段和表达载体pET-30a(+)后相连接,构建了重组表达载体pET-amy,并导入BL21细菌中表达,酶学特性表明SDS-PAGE电泳在26000左右有表达蛋白带,该工程菌总酶活达90.74U/mL,是出发菌的3倍,最适温度在60℃左右,pH值在4～10之间。该工程菌可作为酶活高的理想材料,用以构建耐热性好和酶活高的杂合基因工程菌。
- 吕文平许梓荣李卫芬孙建义韩晋辉
- 关键词：葡聚糖酶基因淀粉液化SDS-PAGE电泳GENBANKPCR克隆双酶切
