国家重点基础研究发展计划(G1999064007)
- 作品数:7 被引量:18H指数:2
- 相关作者:张岱阮燕朱忠军王雪何其华更多>>
- 相关机构:北京大学第六医院北京大学北京回龙观医院更多>>
- 发文基金:国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域:医药卫生更多>>
- 神经节苷脂促进细胞内β-淀粉样蛋白生成的机制被引量:2
- 2003年
- 目的 :本研究着重分析和探讨神经节苷脂 (GM1 )促进细胞内 β -淀粉样蛋白 (Aβ)生成、聚积的作用机制。方法 :采用人类APP6 95cDNA转染人成神经细胞瘤细胞株 (HY -SY5Y)为模型 ,应用IP -Western印迹法检测不同浓度GM1处理后 ,细胞内Aβ生成量的变化 ;应用激光共聚焦扫描显微术 (LSCM)确定GM1作用的具体亚细胞分布部位。结果 :实验表明 ,细胞内Aβ含量随GM1浓度的增加而明显递增 (P <0 0 1 ,n =6) ;内 /外源性GM1分别与细胞内Aβ4 2 协同分布在内质网内。结论 :GM1与Aβ4 2 在亚细胞器内的协同分布对于Aβ4 2 在细胞内聚积。
- 王雪何其华阮燕张岱
- 关键词:阿尔茨海默病神经节苷脂类淀粉样Β蛋白
- β-淀粉样蛋白前体N端神经节苷脂GM1结合位点定位分析被引量:2
- 2002年
- 目的 :确定 β 淀粉样蛋白前体 (amyloidβ proteinprecursor ,APP)分子N端的神经节苷脂GM1结合位点。 方法 :利用重组DNA技术获得不同长度Mty4 APP融合蛋白以及合成APP多肽 ,用于分析和确定APP N端GM1的活性区 ;用免疫沉淀Western印迹方法探讨不同神经节苷脂与APP N端融合蛋白的结合能力。结果 :Western印迹法证实APP18 81、APP18 65和APP18 58片段可与GM1分子结合 ,而APP18 51片段不与GM1分子相互作用。多肽抑制实验证明 ,多肽APP52~ 81明显阻断了融合蛋白APP18 81与GM1的结合。不同神经节苷脂与APP N端融合蛋白的结合能力实验表明 ,融合蛋白APP18 81与GM1特异性结合 ,而不与GD1a ,GT1b ,GALCER相互作用。结论 :APP分子N端存在着一个GM1的活性区域 ,位于 5 2~ 81氨基酸残基区间。此区域与GM1存在着特异性相互作用 ,有赖于GM1糖链的特殊构象 ,而与神经节苷脂上唾液酸的数目无关 ,也与神经酰胺母链无关。GM1在APP N端活性区域的发现和定位 ,对探讨GM1代谢异常与 β
- 丁吉新阮燕朱忠军张岱
- 关键词:阿尔茨海默病Β-淀粉样蛋白前体神经节苷脂GM1结合位点
- 男性精神分裂症患者海马磁共振质子波谱成像的研究被引量:11
- 2004年
- 目的 探讨精神分裂症患者双侧海马的磁共振质子波谱(MRS)的特点,以期对此疾病的临床诊断提供代谢方面依据,为精神分裂症的病因学探讨提供线索。方法 应用MRS成像技术,对20例男性精神分裂症患者和20名男性正常人检测双侧海马的氮-乙酰天门冬氨酸复合物(NAA)、胆碱复合物(CHO)和肌酸-磷酸肌酸复合物(Cr)含量,对NAA/Cr和CHO/Cr的比值进行计算。以重复测量方差分析的方法进行统计分析,其中组别作为组间差异,左右侧作为组内差异。结果 CHO/Cr的比值在精神分裂症患者双侧海马(左侧为1.03±0.22,右侧为1.00±0.23)高于正常人(左侧为0.95±0.16,右侧为0.97±0.16),差异有显著性(F=6.896,P=0.013);而NAA/Cr的比值在精神分裂症患者与正常人间的差异无显著性(患者左侧为1.29±0.16,右侧为1.25±0.13;正常人左侧为1.41±0.20,右侧为1.36±0.17)。结论 男性精神分裂症患者的海马可能存在膜的磷脂代谢异常。
- 王菲孙治国阮燕王希林张鸿燕丛中洪楠张岱
- 关键词:精神分裂症海马磁共振质子波谱成像病因学
- β-淀粉样前体蛋白第二、三外显子删除突变抑制β-淀粉样蛋白分泌被引量:2
- 2003年
- 目的 :观察 β 淀粉样前体蛋白第二、三外显子编码结构域对培养的人神经纤维母细胞瘤细胞系 (SH SY5Y)生长代谢和 β淀粉样蛋白 (Aβ)分泌的影响。 方法 :利用重组DNA技术 ,构建 pcDNA3.1APP695和删除第二、三外显子的pcDNA3.1ΔAPP695质粒 ,用脂质体转染法将其转入SH SY5Y细胞系 ,用 0 .6 g·L-1G4 18筛选获得稳定表达外源基因的细胞系 ,采用MTT法分析对细胞增殖的影响 ,用免疫沉淀Westernblot分析细胞培养液中Aβ的含量。结果 :成功构建了APP695cDNA和删除第二、三外显子的ΔAPP695cDNA的真核表达载体 ,转染SH SY5Y细胞系后 ,Westernblot证实外源基因得到表达 ,MTT分析结果显示删除第二、三外显子的ΔAPP695cDNA未对细胞产生明显的抑制增殖作用 ,免疫沉淀Westernblot分析表明 ,与转染全长APP695cDNA细胞相比 ,转染ΔAPP695cDNA细胞Aβ分泌显著减少。 结论 :APP695第二、三外显子编码结构域删除后抑制了Aβ的生成 。
- 查芹芹阮燕刘中华曹连元张岱
- 关键词:阿尔茨海默病Β-淀粉样前体蛋白Β-淀粉样蛋白外显子
- Tenuigenin对转染APP695cDNA的SH-SY5Y细胞β-淀粉样蛋白生成的抑制作用及机制被引量:1
- 2005年
- 目的用转染APP695cDNA的SH-SY5Y细胞模型,研究tenuigenin对β-淀粉样蛋白(Aβ)生成的抑制作用及其作用机制。方法应用免疫沉淀和蛋白印迹法(Westernblot)检测Aβ含量,应用MTT和LDH法测定tenuigenin的细胞毒性。结果Tenuigenin降低SH-SY5YAPP695细胞Aβ分泌水平;无细胞增生和毒性作用;能抑制SH-SY5YAPP695细胞APPC99的生成,但对SH-SY5YSPA4CT细胞APPC99生成无抑制作用,亦不影响该细胞株Aβ的分泌。结论Tenuigenin可能通过抑制β-分泌酶对APP的水解,降低SH-SY5YAPP695细胞Aβ水平。Tenuigenin这一针对阿尔茨海默病(Alzheimerdisease,AD)上游病理环节的药效,显示了其在AD治疗方面重要的开发和临床应用的价值,值得进一步研究。
- 贾竑晓马辛姜勇阮燕张继志涂鹏飞张岱
- 关键词:阿尔茨海默病Β-淀粉样蛋白
- 重组APP-N端蛋白与神经节苷脂GM1相互作用后的构象变化
- 2003年
- 用基因重组方法制备人类 β 淀粉样蛋白前体 (APP)N端融合蛋白APP2 8~ 12 3 ,应用荧光光谱和圆二色谱技术观测GM 1对APP2 8~ 12 3 构象的影响 .结果表明 :APP2 8~ 12 3 与GM1水溶液和含GM1的脂质体孵育后 ,其荧光强度明显增强 ,最大发射峰位蓝移 2 0nm ;APP2 8~ 12 3 在溶液中的二级结构以α螺旋为主 ,峰位在 2 0 8nm和2 2 2nm ,而APP2 8~ 12 3 与PC/GM 1脂质体或GM 1水溶液孵育后 ,其二级结构虽以α螺旋为主 ,但摩尔椭圆度(θ)值明显增强 .以上结果表明GM1改变了APP2 8~ 12 3 二级结构 ,提示GM1引起APP分子构象的改变 ,可能影响APP分子正常生理功能和跨膜转运过程 .
- 丁吉新沙印林阮燕朱忠军黄力新耿慧敏聂松青张岱
- 关键词:神经节苷脂GM1相互作用构象变化Β-淀粉样蛋白前体
- 神经节苷脂促进β-淀粉样蛋白生成及其二者协同分布
- 2003年
- 目的 :探讨神经节苷脂GM1干扰 β -淀粉样蛋白前体 (APP)正常代谢途径以及增加 β -淀粉样蛋白 (Aβ)生成的可能机制 ,以确立GM1在阿尔茨海默病 (AD)脑淀粉样变性过程中的特定作用。 方法 :选用人类 β -淀粉样蛋白前体基因 (APP6 95)转染细胞模型 ,用IP -Western印迹法观察GM1,对细胞APP代谢产物Aβ释放的影响 ;应用激光共聚焦扫描显微术 (LSCM )分别定量分析不同浓度GM1作用下细胞内Aβ40和Aβ42荧光强度的变化 ;通过双重免疫荧光标记确定GM1与Aβ4 0 和 /或Aβ4 2 的协同定位分布。结果 :GM1干扰细胞APP水解代谢和促进Aβ的释放 ;细胞内Aβ4 0 和Aβ4 2 荧光强度均随GM1浓度的增加而增强 ;内、外源性GM1分别与Aβ4 0 和Aβ4 2 在细胞内协同定位。结论 :提示GM1通过与Aβ的协同分布 。
- 王雪何其华阮燕张岱
- 关键词:神经节苷脂