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江苏省科技支撑计划项目(BE2013315): 作品数：10 被引量：27H指数：2; 相关作者：丁炜东邴旭文曹哲明胡彬魏国华更多>>; 相关机构：中国水产科学研究院淡水渔业研究中心南京农业大学姜堰市水产技术指导站更多>>; 发文基金：江苏省自然科学基金江苏省科技支撑计划项目中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>; 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程更多>>

黄鳝体表粘液中基因组DNA的提取与分析被引量：2: 2016年; 黄鳝基因组DNA一直采用抽血或剪取肌肉来提取,但是采血或剪取肌肉后黄鳝成活率很低。为了保留亲本,尝试从黄鳝体表粘液中提取DNA,并采用紫外分光光度计对提取到的DNA的纯度和浓度进行了检测。结果表明,用蛋白酶K消化,酚仿抽提后从粘液中得到的DNA的纯度与从肌肉中提取到的相差不大,但是提取到的量较少。为了验证提取的DNA是不是黄鳝基因组DNA,用黄鳝actin引物和18S r RNA基因引物扩增之后检测到了粘液中的较亮的DNA片段。为了进一步确认检测到的是黄鳝的DNA,我们又对得到的DNA进行了扩增,并得到的产物进行了克隆和测序。结果表明,粘液中提取到的DNA是黄鳝的基因组DNA。随后又选择了60尾黄鳝,提取其粘液之后对其成活率进行统计,养殖1个月后黄鳝的成活率都在95%以上。此黄鳝体表粘液提取DNA方法能提取高质量的DNA,可用于用于PCR鉴定。; 胡彬曹哲明丁炜东邴旭文; 关键词：黄鳝基因组DNA 粘液

三种体色野生黄鳝肌肉营养成分的分析被引量：13: 2016年; 分析测定3个野生黄鳝（Monopterus albus）群体（深黄大斑鳝（A）、浅黄细斑鳝（B）、青灰鳝（C））肌肉中主要营养成分,对其营养价值进行综合评价。采用常规方法测定一般营养成分、氨基酸、脂肪酸、矿物质元素。结果显示,3种体色野生黄鳝水分含量74.77%~77.20%,粗蛋白含量17.84%~18.52%,粗脂肪含量2.51%~4.32%,灰分含量0.96%~1.01%。其中水分、粗蛋白和粗脂肪含量C与A、B差异显著（p〈0.05）,灰分含量C显著高于A（p〈0.05）而与B差异不显著（p〉0.05）;A与B群体仅粗蛋白含量差异显著（p〈0.05）。氨基酸总量16.68~17.99 g/100 g,且C与A、B差异显著（p〈0.05）而A与B差异不显著（p〉0.05）;必需氨基酸含量7.16~7.25 g/100 g,3个群体间差异不显著（p〉0.05）,但含量A〉B〉C。21种脂肪酸中二十碳五烯酸与二十二碳六烯酸含量均较高,两者之和的含量为9.47%~9.99%,且A〉B〉C。矿物质元素含量丰富,其中K、Na、Mg、Ca、Zn、Fe、Cu、Mn、Cd、As的含量C与A、B差异显著（p〈0.05）,而A与B间仅K、Mg含量差异显著（p〈0.05）。综合比较：两黄色群体（A、B）间肌肉营养成分含量差异较小,而两黄色群体（A、B）与灰色群体（C）间差异较大。; 吴秀林丁炜东曹哲明魏国华胡彬邴旭文; 关键词：黄鳝肌肉营养成分

黄鳝Dmrt3基因在性腺中的甲基化差异被引量：3: 2014年; 黄鳝具有性逆转的特点,为了找到与黄鳝性别调控直接相关的序列位点,分析黄鳝性别相关基因在雌雄中的序列差异,本实验选择了性别相关基因Dmrt3作为研究对象,通过比较该基因在雌雄性腺中的甲基化状态就可以分析出参与性别控制的具体位点。实验通过甲基化敏感的限制性内切酶Hpa II酶切黄鳝的雌雄性腺,根据已知的m RNA序列设计相关引物扩增酶切产物,同时与未酶切的对照组进行比较,分析差异条带并对实验结果进行验证。研究结果发现,Dmrt3-FR2扩增序列中,精巢是去甲基化状态,而卵巢是甲基化状态,可以推测该位点很可能与性别调控相关。本实验补充了从分子学角度研究黄鳝性别调控的不足,同时也验证了用甲基化手段研究黄鳝性别调控的可行性,为其他研究提供了理论依据。; 宋颖邴旭文曹哲明丁炜东; 关键词：DNA 甲基化黄鳝性别控制

黄鳝雌激素受体α基因的克隆、抗体制备及初步分析被引量：2: 2014年; 对雌激素受体α基因的氨基酸序列进行抗原性分析,筛选合适的基因片段进行克隆,经RT-PCR扩增得到大小为945bp的片段,经测序鉴定后,将该片段定向亚克隆于pMAL-c2x表达载体中,转化至TB1感受态细胞中进行诱导表达。经1mmol/L IPTG诱导4h观察到有新的重组蛋白获得了表达,采用SDS-PAGE和Western blot试验进行检测,结果表明表达的重组蛋白的分子质量约为78.1ku,表达产物占菌体总蛋白的42.3%,且具有免疫学活性。进一步纯化和蛋白酶切后,得到单一的雌激素受体α蛋白。以该蛋白免疫小鼠制备抗体,在免疫第7周时达到最大滴度1.158±0.232。将制备的多克隆抗体进行黄鳝性腺免疫组化分析,结果表明其能特异性地与卵巢中的激素受体α反应,在细胞膜上形成褐色沉淀。; 丁炜东曹丽萍曹哲明邴旭文陈克春胡晋鸣; 关键词：黄鳝雌激素受体抗血清免疫组化分析

环境因子对黄鳝DMRT基因甲基化的影响: 2016年; DNA甲基化是一种重要的DNA修饰方式,它能在不改变DNA一级结构的情况下调控基因的表达,能够维持正常的细胞功能,在胚胎发育、遗传印记中起重要作用。以黄鳝为对象,采用限制性内切酶-PCR检测特定DNA片段是否发生甲基化的方法,研究不同温度、p H值、光照周期条件下DMRT基因在各组织中的甲基化差异。用甲基化敏感的限制性内切酶HpaⅡ酶切黄鳝的性腺、肾、脾、肝、肠等5个组织,根据已知的DMRT2、DMRT3、DMRT4基因序列设计特异的引物扩增酶切产物,并设置未酶切对照组,用1%琼脂糖检测,分析差异条带,若未酶切组泳道出现条带,酶切组泳道也出现条带则判定为阳性结果,否则判定为阴性结果。结果表明:不同生态因子条件下,在5个组织中DMRT2-FR2扩增序列中的位点均表现为阳性结果;DMRT3-FR2、DMRT4-FR2、DMRT4-FR3扩增序列中的位点均表现为阴性结果,说明这4个序列中位点的甲基化状态非常稳定,环境因子的小幅变化对其影响不大。; 吴秀林丁炜东曹哲明刘旭邴旭文; 关键词：黄鳝温度光照甲基化

中草药饲料添加剂对黄鳝性激素含量的影响被引量：1: 2014年; 试验以初始平均体重为(41.2±2.3)g的雌黄鳝和初始体重为(113.5±5.6)g雄黄鳝为研究对象,分别配置含中草药质量浓度为3%、4%、5%的鱼糜饲料,每组设置3个重复,连续投喂31 d(其中前10 d为无中草药的训食阶段,后21 d为添加中草药试验阶段)并进行抽血采样,测定其血清内雌二醇与睾酮的含量,来评价饲料中的中草药浓度对黄鳝性激素含量的影响,实验结果表明:(1)与对照组相比,摄食不含中草药饲料的亲鱼血液中雌二醇与睾酮的含量显著高于含中草药饲料的亲鱼(P<0.05),并且亲鱼血清内雌二醇与睾酮的含量随着中草药浓度的增加而降低(P<0.05);(2)从时间的角度分析得出的结论是,雌鱼血清内的雌二醇含量与雄鱼血清内的睾酮含量,在各个试验组中,都随着时间的积累而呈现降低的趋势(P<0.05)。; 赵庆凯丁炜东邴旭文王建新; 关键词：中草药黄鳝雌二醇睾酮

水产动物DNA甲基化的研究进展被引量：1: 2013年; DNA甲基化修饰是真核生物最常见的表观遗传现象之一,是一种可逆的过程,能够直接影响到基因的活性。越来越多的实验证明,DNA甲基化在水产动物的生长发育中起着举足轻重的作用。因此,研究DNA甲基化修饰是从分子学角度研究水产动物各种生理现象的关键。阐述了DNA甲基化的相关机制,并详尽介绍了研究DNA甲基化的最新的方法。根据近期的研究进展,总结了DNA甲基化在水产动物育种中的应用及前景。; 宋颖邴旭文曹哲明丁炜东; 关键词：DNA 甲基化水产动物

中草药在促进黄鳝性腺发育中的应用前景被引量：2: 2014年; 黄鳝的人工繁殖在我国的很多地方均已获得成功,黄鳝苗种的获得已成为制约黄鳝养殖业发展的主要因素。由于黄鳝的性逆转化、怀卵量低、性腺成熟不同步等特点,使人工繁殖难以取得历史性的突破。主要论述中草药在促进黄鳝性腺发育中的应用前景,利用中草药对亲鳝进行催熟催产,以实现鳝苗的大规模繁殖。; 赵庆凯邴旭文丁炜东; 关键词：黄鳝中草药生殖腺性激素

黄鳝粘液雌雄差异的cDNA-SRAP分析被引量：1: 2017年; 采用cDNA-SRAP技术对黄鳝雌雄粘液进行基因差异表达分析,筛选黄鳝体表粘液中与性别相关的分子标记。从64对引物组合中筛选出12对引物组合,共获得123个稳定清晰的扩增位点,并筛选出4条雌雄有差异的条带。这4条特异性条带经过回收、克隆、测序后,将测序结果进行Blast分析,结果发现在GenBank中只有片段1与白鳍豚硫酸盐/硫代硫酸盐CYSA样进口ATP结合盒蛋白有较高的同源性。根据片段1的序列设计1对引物进行半定量RT-PCR反应,结果发现,片段1在雌雄黄鳝体表粘液均可获得扩增条带,但其在雄性粘液中的表达量显著高于雌性。这可能是由于雌雄黄鳝粘液中所存在的表皮细胞和粘液腺细胞有差异所致。; 胡彬曹哲明丁炜东邴旭文; 关键词：黄鳝粘液分子标记

不同光照周期下黄鳝不同组织DNA甲基化的MSAP分析被引量：2: 2015年; 为研究光照周期对黄鳝不同组织的基因组DNA甲基化的影响,设置3个不同的光照时间(8、10和12h)处理,对黄鳝心、肝、脾、肾、肠、肌肉和脑等组织基因组DNA甲基化用甲基化敏感扩增多态性(methylation sensitive amplified polymorphism,MSAP)技术进行分析。结果显示,不同组织基因组DNA对光照时间有不同的反应。其中,肌肉基因组DNA甲基化对光照周期的变化较为敏感,不同光照周期下肌肉基因组DNA总甲基化差异显著,光照周期为12h半甲基化和其他处理相比差异也很显著;肾脏和脑的基因组DNA甲基化对光照周期变化最不敏感,各处理组之间全甲基化、半甲基化和总甲基化差异都不显著;肝脏、肠、脾和心脏表现比较复杂,其中肝脏不同处理下基因组DNA半甲基化和总甲基化差异都不显著,光照周期为8h时,全甲基化差异显著;肠不同处理下基因组DNA全甲基化、半甲基化差异不显著,在光照周期为10h的处理组的总甲基化和其他处理组差异显著;脾脏在光照周期为10h和8h时全甲基化和总甲基化各处理组差异显著,在光照周期为12h时半甲基化和其他处理组差异显著;心脏在光照周期为10h时半甲基化和其他处理组差异显著。; 魏国华曹哲明丁炜东邴旭文; 关键词：黄鳝 DNA甲基化甲基化敏感扩增多态性光照周期

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