国家自然科学基金(30560038)
- 作品数：8 被引量：44H指数：5
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 幽门螺杆菌CagA蛋白研究进展被引量：11
- 2008年
- 汪苏周建奖单可人
- 关键词：幽门螺杆菌A蛋白胃部疾病酪氨酸磷酸化C-ABL
- 幽门螺杆菌NCTC11637、NCTC11639毒素相关基因A的克隆、序列分析及真核表达载体的构建被引量：1
- 2010年
- 目的克隆幽门螺杆菌毒素相关基因A(cytotoxin-associated gene A,CagA)全长序列并进行序列分析,构建表达CagA的真核表达载体,研究CagA调控胃泌素基因的表达。方法PCR扩增出CagA基因全长片段后构建克隆载体pMD18-T/CagA7和pMD18-T/CagA9,测序结果登录GenBank,登录号分别为GQ161098(NCTC11637)和GQ161099(NCTC11639),用测序后筛选的PstI和BamHI内切酶将原核载体上的CagA基因酶切后连接到pcDNA3.1/ZEO(-)真核表达载体上,构建真核表达载体pcDNA3.1ZEO(-)/CagA7和pcDNA3.1ZEO(-)/CagA9,并经双酶切和CagA PCR扩增鉴定,最后转染胃癌细胞,检测胃癌细胞中胃泌素基因的表达。结果序列比对结果显示NCTC11637和NCTC11637 CagA的同源性为88.77%,NCTC11637与已收录的NCTC11637(AB015416)同源性为99.22%,序列分析显示两者均有两个Ca-gA酪氨酸磷酸化位点,转染细胞后CagA上调胃泌素基因的表达。结论成功克隆了CagA全长基因,并构建了含CagA全长基因的真核表达载体,在胃癌细胞内上调了胃泌素基因的表达。
- 汪苏周建奖单可人赵燕谢渊
- 关键词：幽门螺杆菌CAGA真核载体胃泌素
- shRNA表达载体的改建及鉴定
- 2011年
- 目的通过改建pSilencer3.1-H1载体快速有效筛选重组shRNA表达载体,并可使线性化载体环化,长期保存。方法制备含有单一限制性内切酶NotⅠ识别序列的双链DNA插入片段,与BamHⅠ和HindⅢ酶切线性化的shRNA表达载体pSilencer3.1-H1连接,构建载体pSilencer3.1-H1/NotⅠ,再用BamHⅠ和HindⅢ双酶切pSilenc-er3.1-H1/NotⅠ,将含靶向目的基因JAK2siRNA表达框的DNA模板与其连接,构建pSilencer3.1-H1/JAK2的shRNA表达载体,提取质粒DNA,用NotⅠ进行单酶切,快速选择阳性克隆,选取不能被NotⅠ切开的质粒进行测序鉴定。随后将pSilencer3.1-H1/JAK2转染胃癌细胞系,用Western blot检测JAK2蛋白的表达。结果通过测序证实pSilencer3.1-H1/NotⅠ和含JAK2siRNA表达框的表达载体成功构建,将其转染胃癌细胞系AGS后,抑制了JAK2蛋白的表达。结论通过对pSilencer3.1-H1表达载体的改建可以快速有效地筛选shRNA表达载体。
- 陈娴谢渊赵艳周建奖
- 关键词：RNA干扰基因沉默
- 胃癌转移的研究进展被引量：10
- 2011年
- 徐文杰周建奖
- 关键词：胃癌转移多器官功能衰竭流行病学资料胃癌患者致死率治愈率
- CIAPIN1基因与肿瘤
- 2010年
- 细胞因子诱导的凋亡抑制因子1(cytokine induced apoptosis inhibitor1,CIAPIN1)是最新发现的一个细胞因子依赖性抗凋亡分子,并已经被证实是独立于Bcl家族、胱天蛋白酶(caspase)家族等之外的Ras信号转导通路中的另一个调节分子。CIAPIN1广泛分布于胎儿和成人的正常组织中,特别在分化型组织和活性代谢组织中具有很高的表达水平,但是在某些癌症发生时表达受到抑制。通过基因转染、RNA干扰等技术手段研究CIAPIN1与肿瘤发生、发展的关联,揭示了CIAPIN1表达水平的改变与肿瘤进展具有相关性,CIAPIN1有望成为一个新的肿瘤治疗靶分子。
- 王妍周建奖
- 关键词：肿瘤多药耐药血管生成
- 幽门螺杆菌毒素相关蛋白CagA上调胃泌素基因表达被引量：12
- 2009年
- 目的对幽门螺杆菌分泌的CagA蛋白能否调控胃泌素基因表达及作用机制进行研究。方法用含有cagA基因的真核表达载体——pcDNA3．1ZEO（-）／cagA7转染AGS和SGC-7901细胞；同时培养幽门螺杆菌NCTC11637后感染AGS和SGC-7901细胞；加入JAK2信号通路抑制剂AG490和ERK信号通路抑制剂U0126，实时荧光定量PCR检测转染和感染细胞中胃泌素mRNA的表达。结果用pcDNA3．1ZEO（-）／cagA7转染和NCTC11637感染胃癌细胞AGS和SGC-7901后胃泌素mRNA表达量显著增加（P〈0．05），但加入AG490和U0126后胃泌素mRNA的表达量显著降低（P〈0．05）。结论CagA上调胃泌素基因的表达，ERK／MAPK和JAK／STAT信号通路参与了cagA对胃泌素表达的调控。
- 汪苏周建奖单可人赵燕谢渊
- 关键词：幽门螺杆菌胃泌素CAGAERK/MAPKJAK/STAT
- 钙调蛋白、钙网蛋白及周期蛋白依赖性激酶1基因在胃癌组织中的表达被引量：5
- 2013年
- 目的研究钙调蛋白(CaM)、钙网蛋白(CRT)及周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)基因在胃癌组织中的表达,及其与胃癌发生发展的相关性。方法实时定量PCR法定量检测CaM、CRT及CDK1基因在人胃癌组织中的表达,并分析其表达与临床病理参数、幽门螺杆菌感染的关系。结果胃癌组织和淋巴结组织中CaM、CRT及CDK1基因的表达比癌旁组织高2.08～3.70倍,幽门螺杆菌感染组中此三个基因的表达比非感染组分别上调2.78～7.36倍。其中CaM基因的表达与生存时间相关,CDK1基因的表达与pTNM分期及淋巴结转移相关,而CRT基因的表达与肿瘤大小、生存时间及淋巴结转移相关。结论 Hp通过上调CaM、CRT及CDK1基因的表达参与胃癌的发生发展,联合检测三个基因对判断预后有一定作用。
- 王妍周建奖谢渊赵艳陈娴
- 关键词：幽门螺杆菌钙调蛋白钙网蛋白
- 幽门螺杆菌毒素相关蛋白A对胃泌素基因启动子的调控作用被引量：11
- 2010年
- 目的 研究幽门螺杆菌（HP）毒素相关蛋白A（CagA）对胃泌素基因启动子（GP）的调控作用及其信号传导机制,进一步阐明胃癌发生、发展的相关机制.方法 采用双酶切、聚合酶链反应（PCR）和测序技术,鉴定CagA表达载体pcDNA3.1ZEO（-）/CagA和胃泌素报告基因载体PGL/GP.采用pcDNA3.1ZEO（-）/CagA＋PGL/GP瞬时共转染AGS和SGC-7901细胞,同时用PGL/GP转染AGS和SGC-7901细胞,36 h后用HP感染细胞.在感染与转染细胞的同时,加入JAK2信号通路抑制剂AG490和ERK信号通路抑制剂U0126.以未经处理的胃癌细胞和转染空载体的细胞为对照,通过检测荧光素酶活性,测定转染和感染细胞中GP转录活性的改变.TaqMan（R）实时荧光定量PCR测定胃泌素mRNA的表达.结果 与对照组、pcDNA 3.1 ZEO（-）/CagA＋PGL3/Basic共转染组和pcDNA3.1ZEO（-）＋PGL/GP共转染组相比,pcDNA3.1ZEO（-）/CagA＋PGL/GP共转染组的萤光素酶活性在AGS细胞分别升高到251.3倍、106.1倍和2.4倍,在SGC-7901细胞分别升高到35.8倍、22.7倍和13.4倍（P〈0.05）.与对照组、PGL3/Basic＋HP感染组和PGL/GP转染组相比,PGL/GP转染＋HP感染组的萤光素酶活性在AGS细胞分别升高到1673.2倍、33.5倍和1.4倍,在SGC-7901细胞分别升高到1180.2倍、72.2倍和1.5倍（P〈0.05）.pcDNA3.1ZEO（-）/Cag,A＋PGL/GP共转染组加入信号通路抑制剂AG490或U0126后,萤光素酶活性明显降低,在AGS细胞分别下降了33.0%和95.7%,在SGC-7901细胞分别下降了86.2%和94.8%（P〈0.05）.而在PGL/GP转染＋HP感染组加入AG490或U0126后,萤光素酶活性明显降低,在AGS细胞分别降低了25.8%和24.6%,在SGC-7901细胞分别降低了14.1%和57.3%（P〈0.05）.在AGS和SGC-7901细胞中,HP感染组的胃泌素mRNA表达量分别是对照组的3.0倍和4.5倍,pcDNA3.1ZEO（-）/CagA转染组分别是对照组的10.8倍和10.9倍,是pcDNA3.1ZEO（-）组的2.3倍和16.2倍,差异均有统计学意义（P〈0.05）.结论 CagA能够增强G
- 赵艳谢渊汪苏陈娴周建奖
- 关键词：胃肿瘤胃泌素类CAGA
