国家自然科学基金(30560035)
- 作品数：13 被引量：56H指数：5
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- 蛇毒抗补体蛋白atrase B抑制补体活化引起的血小板聚集被引量：4
- 2009年
- 目的观察眼镜蛇毒抗补体蛋白atrase B抑制补体活化引起的血小板聚集。方法采用眼镜蛇毒因子激活补体诱导血小板聚集,观察atrase B对补体活化引起人凝胶过滤血小板聚集的影响,并采用流式细胞仪测定血小板膜P-选择素和GPⅡb/Ⅲa表达情况。结果Atrase B能抑制补体激活引起的血小板聚集和P-选择素、GPⅡb/Ⅲa在血小板膜上的表达。结论眼镜蛇毒抗补体蛋白atrase B能有效抑制补体激活引起的血小板活化、聚集。
- 王彩娥孙黔云李敏石京山
- 关键词：补体活化血小板活化血小板聚集眼镜蛇毒因子蛇毒P-选择素
- 刺梨多糖的抗补体活性研究被引量：10
- 2009年
- 目的:研究刺梨多糖10种组分体外的抗补体活性。方法:采用补体溶血实验测定刺梨多糖10种组分对补体经典途径和替代途径的作用。结果:所测刺梨多糖的10种组分对补体经典途径均有抑制作用,同时有7种组分对补体替代途径也有抑制作用。结论:刺梨多糖组分具有抗补体活性,该工作为进一步认识和阐明刺梨多糖对免疫系统的作用和影响及刺梨多糖的相关开发应用提供了参考依据。
- 崔昊孙黔云杨娟
- 眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A抗血小板聚集作用及机制被引量：3
- 2009年
- 目的研究中华眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A对血小板聚集的影响及其相关的机制。方法测定atrase A对二磷酸腺苷、胶原、血小板活化因子、花生四烯酸、瑞斯托霉素、凝血酶诱导血小板聚集的影响情况,并通过蛋白质免疫印迹检测atrase A对血小板膜糖蛋白和血管假血友病因子的酶切情况。结果中华眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A能明显抑制由瑞斯托霉素和凝血酶诱导的血小板聚集,这种抑制作用呈量效、时效关系。而atrase A和血小板预孵5min后对二磷酸腺苷、胶原、血小板活化因子、花生四烯酸诱导的血小板聚集有微弱的抑制作用,预孵时间延长至30min对血小板聚集有明显的抑制作用。蛋白质免疫印迹结果显示atrase A能特异性酶切血小板膜糖蛋白GPIb,但对vWF几乎没有酶切作用。结论中华眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A对二磷酸腺苷、胶原、血小板活化因子、花生四烯酸、瑞斯托霉素、凝血酶诱导的血小板聚集均有抑制作用,其中对瑞斯托霉素和凝血酶诱导的血小板聚集具有明显的抑制作用,其机制是通过酶切血小板膜糖蛋白GPIb。
- 王彩娥孙黔云李敏石京山
- 关键词：中华眼镜蛇毒血小板聚集血小板膜糖蛋白瑞斯托霉素
- 烙铁头蛇毒中一个具有抗补体活性金属蛋白酶的纯化和性质研究被引量：5
- 2010年
- 目的从烙铁头蛇毒中筛选分离抗补体活性蛋白,并对其部分生物学活性开展研究,以了解其在蛇伤中的病理生理作用和潜在的应用价值。方法采用蛋白层析技术分离纯化抗补体活性蛋白,测定其分子量、等电点、抗补体作用、多种蛋白水解酶活性、水肿活性及出血活性。结果从烙铁头蛇毒中分离纯化出一个抗补体活性蛋白TMAC-1,表观分子量约为25ku,等电点为9.0。TMAC-1能够抑制补体经典途径和替代途径的溶血,预孵条件下,其IC50分别为62、29mg·L-1;不预孵条件下,其IC50为263、246mg·L-1。TMAC-1能够裂解C3、C5,但裂解产物不能诱导内皮细胞P-selectin的表达。TMAC-1能依次降解纤维蛋白原的Aα、Bβ、γ链,该活性能被EDTA、1,10-phenanthroline、EGTA完全抑制,不受PMSF、SBTI的抑制。TMAC-1具有水肿活性和微弱的偶氮酪蛋白水解活性,没有精氨酸酯酶水解活性和皮下出血活性。结论 TMAC-1是一个非出血性的金属蛋白酶,它可通过酶切补体特定成分抑制补体激活。
- 闫银萍孙黔云
- 关键词：蛇毒炎症蛇伤
- 眼镜蛇毒中一个弱纤维蛋白原水解活性金属蛋白酶的纯化和性质研究(英文)被引量：9
- 2007年
- 通过蛋白层析从中华眼镜蛇毒中分离纯化出一个新的纤维蛋白原水解酶atrase A. Atrase A是一个分子量为64.6 kD,等电点为pH9.6和中性糖含量为4.16 %的碱性单链糖蛋白.它具有弱的纤维蛋白原α链水解活性.该活性能被金属螯合剂EDTA,EGTA,1 ,10-phenanthroline和还原剂DTT完全抑制,而PMSF只能部分抑制该活性,大豆胰蛋白酶抑制剂对其没有影响,表明atrase A属于金属蛋白酶.Atrase A具有水肿活性和金黄色葡萄球菌抑制活性.它对A549和K562细胞没有细胞毒性,但能使贴壁生长的A549细胞解离悬浮. Atrase A没有纤维蛋白、azocasein 、BAEE水解活性,对ADP、胶原诱导的血小板聚集没有明确的抑制作用.经小鼠皮下注射后没有发现其有出血毒活性.
- 孙黔云李敏杨付梅
- 关键词：金属蛋白酶蛇毒中华眼镜蛇
- 眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A诱导人内皮细胞释放炎症介质及凋亡被引量：4
- 2009年
- 目的研究眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A对人内皮细胞的作用。方法采用MTT法、SRB法、形态学观察分别检测atrase A对人微血管内皮细胞生长的影响;内皮细胞经at-rase A处理后,ELISA法检测内皮细胞释放IL-8、ICAM-1、MCP-1、E-selectin的变化,萤光发光法检测各组caspase-8、caspase-3/7的表达情况。经尾静脉给予大鼠atrase A后,检测大鼠血清中ICAM-1、IL-8、TNF-α的变化情况。结果At-rase A(400、40 mg.L-1)对内皮细胞的生长具有明显的抑制作用。而MTT法结果显示,atrase A对高接种密度的内皮细胞基本上没有影响;镜检结果显示,atrase A(400、40 mg.L-1)可使贴壁生长的内皮细胞解离悬浮。而4 mg.L-1的atrase A对内皮细胞的生长没有影响。高剂量atrase A(400mg.L-1)可诱导内皮细胞IL-8、ICAM-1、MCP-1释放增加,而低剂量atrase A(4 mg.L-1)对各炎症介质的表达没有影响。Atrase A还可诱导内皮细胞caspase-8、caspase-3/7的表达,12 h达峰值。经尾静脉分别给予2 240μg.kg-1和400μg.kg-1的atrase A后,高剂量组SD大鼠血清中ICAM-1、IL-8、TNF-α表达增加;而低剂量组中没有明显变化。结论眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A可抑制内皮细胞生长,诱导内皮细胞释放炎症介质和凋亡。
- 叶巧玲孙黔云李敏
- 关键词：内皮细胞炎症凋亡细胞粘附分子眼镜蛇毒
- 两种抗补体蛋白对脂多糖致急性肺损伤的保护作用比较研究被引量：4
- 2012年
- 目的通过比较两种不同的补体干预方式对脂多糖(LPS)致大鼠急性肺损伤(ALI)的保护作用,进一步认识补体在LPS致ALI中的作用,并探讨补体不同成分在ALI中的作用。方法造模前将抗补体蛋白眼镜蛇毒因子(CVF)和Atrase A分别给予对应组别的大鼠,抑制补体。通过大鼠尾静脉注射LPS(5 mg.kg-1),造成ALI模型。在给予LPS后1、6、12 h采集标本,分别测定血清补体溶血活性、肺含水量、肺组织匀浆髓过氧化物酶(MPO)活性,取支气管肺泡灌洗液(BALF)测定细胞数、蛋白含量以及TNF-α和P-selectin的含量,取肺组织行病理切片检查。通过对实验结果的分析比较,评价两种抗补体蛋白对LPS致大鼠ALI的保护作用。结果在LPS致ALI的早期伴随有明显的血清补体活性下降。模型组的血清补体活性在给予LPS后的1 h内下降了47%。采用Atrase A抑制了50%补体活性的实验组其MPO、TNF-α、P-selectin水平未上调。完全去除补体活性的CVF组其MPO活力在1 h时与正常对照组相当,在6、12 h时则上升至与模型组相当,而TNF-α和P-selectin水平则介于模型组和正常组之间。病理切片检查表明两种抗补体蛋白均能有效减轻肺组织病理损伤,其中Atrase A明显优于CVF。结论补体明确参与了LPS致ALI的病理过程。采用抗补体干预能减轻ALI炎症和相关病理损伤,但两种抗补体蛋白的保护作用有明显区别。采用CVF完全去除补体C3、C5-C9仅在ALI早期有明显的保护作用,而仅部分抑制了补体活性的Atrase A则明显优于CVF,提示Atrase A作用的补体成分可能在ALI中具有重要作用。
- 李敏沈良贤张湘燕孙黔云
- 关键词：急性肺损伤脂多糖补体炎症眼镜蛇毒因子
- 尖吻蝮蛇毒中一种具有抗补体活性金属蛋白酶的分离纯化及部分性质鉴定被引量：2
- 2010年
- 通过离子交换和凝胶过滤层析从湖南产尖吻蝮蛇毒中分离纯化出1个抗补体活性蛋白AACI-I.还原与非还原SDS-PAGE测得其表观分子质量分别为26 kD和22 kD,等电聚焦电泳显示其等电点为pH 8.9.它能抑制补体经典途径和替代途径的溶血,且该作用具有量效和时效性.AACI-I可依次水解纤维蛋白原的Aα、Bβ、γ链,此活性能被EDTA、EGTA和1,10-phenanthroline完全抑制,不受PMSF、SBTI作用影响.同时,该蛋白无精氨酸酯酶活性,提示AACI-I是金属蛋白酶.另外,AACI-I具有azocasein水解活性和水肿活性,当0.01μg/g AACI-I注射小鼠足趾,其诱导肿胀率约为(14.06±6.78)%,而小鼠皮下注射2.6μg/g AACI-Ⅰ后没有发现其有出血毒活性.
- 汪晗孙黔云
- 关键词：尖吻蝮蛇毒抗补体活性金属蛋白酶
- 眼镜蛇毒抗补体蛋白Atrase B对补体激活导致急性肺损伤的保护作用研究被引量：3
- 2009年
- 目的:观察眼镜蛇毒抗补体蛋白Atrase B对补体激活导致急性肺损伤的保护作用。方法:样品组于造模前2h给予Atrase B,样品组与模型组舌下静脉给予眼镜蛇毒因子致肺损伤。50min后,各组取支气管肺泡灌洗液测定总细胞数、蛋白含量、TNF-α、ICAM-1、IL-8含量,比色法测定肺匀浆中性粒细胞髓过氧化物酶含量,取肺组织行病理切片检查。结果:Atrase B可明显降低损伤的肺组织中TNF-α、ICAM-1、MPO含量,减轻肺组织中炎症反应;对肺系数、肺含水量和支气管肺泡灌洗液蛋白含量的影响无统计学意义。结论:Atrase B可减少中性粒细胞在肺组织聚集,减轻补体激活导致急性肺损伤的症状。
- 叶巧玲李敏孙黔云
- 关键词：眼镜蛇毒因子急性肺损伤抗补体炎症
- 补体旁路激活致小鼠急性肺损伤的炎症病理机制研究被引量：7
- 2016年
- 目的研究补体旁路激活所导致的小鼠肺部急性炎症的发生发展及相关指标的变化,为药物筛选及干预研究提供理想的小鼠肺部急性炎症病理模型。方法 SPF级昆明小鼠尾静脉注射眼镜蛇毒因子(CVF)激活血清补体旁路途径,根据注射后取样时间不同,分为15 min、30 min、1 h、2 h、6 h组,同时平行设置PBS对照组。取肺组织测定肺系数、肺含水量,并行病理切片检查,肺组织匀浆测定髓过氧化物酶(MPO)活性;制备支气管肺泡灌洗液(BALF)和血清,测定BALF中的细胞数和蛋白含量,采用ELISA法分别测定BALF和血清中的IL-6、TNF-α、P-selectin和ICAM-1含量。结果小鼠尾静脉注射CVF后可致肺部炎性细胞明显浸润,MPO活性明显上调,BALF中细胞总数和蛋白浓度明显增加。BALF和血清中的IL-6、TNF-α、P-selectin水平及血清中ICAM-1的含量均明显升高,其中,BALF中P-selectin含量在30 min时间点出现1个小高峰,IL-6和TNF-α在1 h时间点出现1个高峰,在2 h时间点均无进一步上升,但在6 h时间点各指标均又明显升高;血清中IL-6和TNF-α含量在1 h时间点达到峰值,随后浓度降低,P-selectin和ICAM-1水平随着时间的延长持续上升。而肺系数、肺含水量及BALF中ICAM-1的含量与PBS组相比无明显变化。结论补体旁路激活可导致小鼠肺部急性炎症的发生,以30 min至1 h的炎症反应最为明显,该实验可以为药物筛选及干预研究提供理想的动物肺部急性炎症病理模型。
- 郭静李敏杨付梅孙黔云
- 关键词：眼镜蛇毒因子急性肺损伤小鼠模型黏附分子炎性介质
