山东省自然科学基金(Y2008C115)
- 作品数：3 被引量：9H指数：2
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- 雷帕霉素对莱菔硫烷诱导人结肠癌细胞UGT1A同工酶及CYP3A4表达的调控被引量：1
- 2013年
- 目的以人结肠癌Caco-2细胞为模型,观察雷帕霉素(Rapa)对莱菔硫烷(SFN)诱导葡萄糖醛酸转移酶(UGT)1A1、UGT1A8、UGT1A10及细胞色素P450(CYP)3A4的调控,探讨Rapa对SFN化学预防效应的影响。方法实验分为对照组、10 nmol/L Rapa组、25μmol/L SFN组和25μmol/L SFN+10 nmol/L Rapa组。透射电镜观察细胞超微结构,Western blotting法测定微管相关蛋白1轻链3(LC3)和核因子E2 P45相关因子2(Nrf2)的表达,实时荧光定量PCR法测定UGT1A1、UGT1A8、UGT1A10及CYP3A4 mRNA的表达,免疫荧光法观察Nrf2的核内转位。结果透射电镜观察到10 nmol/L Rapa组、25μmol/L SFN组和25μmol/L SFN+10 nmol/L Rapa组细胞中自噬体及自噬溶酶体的形成;与对照组相比,25μmol/L SFN组、25μmol/L SFN+10 nmol/L Rapa组可诱导LC3-II蛋白及UGT1A1、UGT1A8、UGT1A10 mRNA的表达增加,诱导Nrf2蛋白的表达及核内转位增强,且25μmol/L SFN+10 nmol/L Rapa组的作用更显著;而10 nmol/L Rapa组、25μmol/L SFN组和25μmol/L SFN+10 nmol/L Rapa组中,CYP3A4 mRNA的表达均受到抑制。结论 Rapa可协同增强SFN对Caco-2细胞自噬效应的诱导;Rapa可能通过上调Nrf2信号通路,使SFN诱导UGT1A1、UGT1A8和UGT1A10表达增加,进而增强SFN的化学预防效应,同时未影响SFN对CYP3A4转录抑制效应。
- 陈朔王敏陈建卿莹林颖敏刘亮齐莹莹
- 关键词：莱菔硫烷雷帕霉素细胞色素P450
- 结肠肿瘤中UGT1A、Nrf2、Keap1蛋白表达及意义被引量：6
- 2012年
- 目的探讨尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A（UGT1A）、核因子E2相关因子2（Nrf2）及Keleh样环氧氯丙烷相关蛋白-1（Keap1）表达与结肠肿瘤发生发展的关系。方法应用免疫组化法检测正常结肠（24份）、结肠腺瘤（30份）、结肠癌（77份）组织标本中UGT1A、Nrt2及Keap1的蛋白表达情况，分析其与结肠肿瘤患者临床病理特征的联系。结果UGT1A在正常结肠黏膜、结肠腺瘤、结肠腺癌组织中的阳性表达率分别为83．3％（20／24）、80．0％（24／30）和53．2％（41／77），腺癌组织中UGT1A阳性表达率明显低于前两者（P值均〈0．05）。而Nrf2在结肠腺瘤[70．0％（21／30）]及腺癌组织[87．0％（67／77）]中的阳性表达率明显高于正常结肠黏膜组织[41．7％（10／24）]，且腺癌中的阳性率亦高于腺瘤组织，P值均为0．000。Keap1的阳性表达率在结肠腺癌组织中为61．0％（47／77），高于正常结肠黏膜组织中的54．2％（13／24）（P=0．040），而低于结肠腺瘤组织中的70．0％（21／30）（P=0．002）。UGT1A及Nrf2的表达与结肠癌各临床病理特征参数无明显关联性，而Keap1的阳性表达率在结肠癌各分化程度[中高分化与低分化分别为70．0％（35／50）、44．4％（12／27）]及浸润程度分层间[T1-T2及L～T4分期分别为78．8％（26／33）、47．7％（21／44）]的差异均有统计学意义（P值均〈0．05）。结论UGT1A表达下调及Nrf2／Keap1信号系统的表达异常可能与结肠肿瘤的发生相关。
- 王敏齐莹莹陈朔刘亮陈建李延青
- 关键词：结肠肿瘤肿瘤形成过程
- 自噬调节剂对莱菔硫烷诱导Caco-2细胞自噬效应及UGT1A1表达的影响被引量：2
- 2013年
- 目的观察以人结肠腺癌细胞Caco-2为模型，探讨3-甲基腺嘌呤（3-MA）及雷帕霉素（Rapa）对莱菔硫烷（SFN）诱导细胞自噬及葡萄糖醛酸转移酶1A1（UGT1A1）的影响。方法采用Western印迹法测定微管相关蛋白1轻链3（LC3）和UGT1A1，采用免疫荧光法观察LC3的胞内分布及核因子E2P45相关因子2（Nrf2）的核内转位，实时荧光定量PCR法测定UGT1A1、人孕烷X受体（hPXR）的mRNA表达。结果SFN对LC3-Ⅱ蛋白的诱导呈浓度和时间依赖性，3-MA及Rapa可分别减弱或增强LC3-Ⅱ蛋白的表达；与对照组相比，Rapa、SFN及SFN＋Rapa可诱导UGTlAlmRNA的表达增强（分别为对照组的2．4倍、4．12倍、2．41倍，均P〈0．01），且诱导UGT1A1蛋白的表达增强；对照组未见明显的Nrf2核内荧光标记，而含有SFN的处理组中可见强烈的Nrf2核内荧光标记，且SFN＋Rapa更为明显；与对照组相比，Rapa及SFN＋Rapa的hPXRmRNA表达增强（分别为对照组的1．82倍、1．4倍，均P〈0．01）。结论3-MA和Rapa可分别减弱或增强SFN对Caco-2细胞自噬效应的诱导；Rapa可进一步增强SFN对UGTlAl的诱导；Rapa联合SFN可能通过同时激活Nrf2和hPXR增强了对UGTlAl的诱导。
- 王敏陈朔卿莹吴栋林颖敏陈建李延青
- 关键词：莱菔硫烷雷帕霉素细胞自噬
