湖南省科技厅科技计划项目(2010SK3093)
- 作品数：3 被引量：8H指数：2
- 相关作者：欧阳奕侯周华谭德明刘国珍刘菲更多>>
- 相关机构：中南大学东南大学更多>>
- 发文基金：湖南省科技厅科技计划项目湖南省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- HBx基因缺失突变体(HBx-d382)对L02细胞cyclinD1、cyclinG1和E2F1表达的影响
- 2011年
- 目的前期的研究成功构建了稳定表达HBx基因及其缺失突变体(HBx-d382)的L02细胞,分别命名为L02/HBx和L02/HBx-d382,并证实其可导致肝细胞恶性转化。该研究进一步探讨HBx-d382对L02细胞G1期细胞周期调控相关基因cyclinD1,cyclinG1和E2F1表达的影响。方法实验分为L02/pcDNA3.0(稳定转染pcDNA3.0)、L02/HBx和L02/HBx-d382(分别稳定转染质粒pcDNA3.0/HBx和pcDNA3.0/HBx-d382)3组。通过实时定量PCR以及wester-blot检测转染HBx基因及其缺失突变体HBx-d382后L02细胞cyclinD1、cyclinG1和E2F1表达的改变。方法实时定量PCR以及wester-blot结果表明稳定表达HBx基因或HBx-d382的L02细胞cyclinD1、cyclinG1和E2F1表达上调,表达HBx-d382的L02细胞上调最为明显。结论 HBx-d382可能通过上调cyclinD1、cyclinG1和E2F1从而影响细胞G1期调控,进一步导致肝细胞恶性转化。
- 胡志亮侯周华符小玉陈莉谢萍欧阳奕杨永峰谭德明
- 关键词：HBXCYCLIN
- 微小RNA在HBx缺失突变体致肝细胞增殖中的作用及其机制被引量：2
- 2012年
- 目的研究微小RNA（miRNA）在HBx缺失突变体致人肝细胞异常增殖中的作用及其相关机制。方法利用miRNA芯片技术检测稳定表达HBx-d382及HBx的L02（即分别含HBx基因缺失突变体HBx-d382及野生型HBx基因）细胞系中miRNA的表达，实时荧光定量PCR对上述miRNA进行验证。选取在L02／HBx-d382和L02／HBx细胞中均表达明显下调的两个miRNA：roAR-338—3P、miR-551b进行功能研究，分为实验组（转染miRNA模拟物组）、阴性对照组（NC，转染miRNA阴性对照）及脂质体组（1ipo，单加转染试剂），通过脂质体转染到细胞中，四甲基偶氮唑盐法检测细胞存活率，流式细胞仪检测细胞周期，实时荧光定量PCR和Westernblot检测细胞周期蛋白D1、细胞周期蛋白G1和E2F转录因子的改变。采用SPSS16．0统计软件，数据均进行了正态检验并符合正态性，组间均数比较采用成组f检验。结果（1）与L02／pcDNA3．0细胞比较，L02／HBx-d382细胞有6个miRNA表达上调，5个miRNA表达下调；L02／HBx细胞有4个miRNA表达上调，12个miRNA表达下调。实时荧光定量PCR验证的结果与芯片相一致。（2）转染了miR-338—313-模拟物和miR-551b-模拟物后，L02／HB0d382及L02／HBx细胞增殖均受抑制，细胞周期均阻滞在G1期，细胞增殖能力减弱。L02／HBx-d382细胞中，细胞增殖能力：lipo组、NC组、miR-338—3p组和miR-551b组分别为90．0％±1．3％、88．0％±1．6％、56．0％±6．1％和62．0％±6．4％，miR-338—3p组与：lipo组、NC组比较，t值分别为10．402、9．133；miR-551b组和与lipo组、NC组比较，t值分别为8．763、7．403，P值均〈0．01。L02／HBx细胞中，细胞增殖能力：lipo组、NC组、miR-338-3p组和miR-551b组分别为91．0%±1．7％、89．0%±2．1％、60．0%±7．7％和66．0％±9．3％，miR-338—3p组与lipo组、NC组比较，t值分别为9．105、8．074；miR-551b组与lipo组、NC组比较，t值分别为7．
- 符小玉谭德明侯周华胡志亮刘国珍欧阳奕刘菲
- 关键词：RNA细胞增殖
- HBx基因及其缺失突变体(HBx-d382)对L02细胞microRNA表达谱的影响被引量：6
- 2010年
- 目的研究转染HBx基因(hepatitis Bvirus Xgene)及其缺失突变体(HBx-d382)后L02细胞Mi-croRNA表达谱的变化。方法通过脂质体转染和G418筛选获得L02/HBx、L02/HBx-d382阳性克隆,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和western blot鉴定目的基因表达,利用MicroRNA芯片技术检测其对L02细胞MicroRNA表达的影响。结果 RT-PCR及Western blot表明在L02/HBx和L02/HBx-d382细胞株中存在目的基因表达。MicroRNA芯片发现与L02细胞相比,L02/HBx-d382细胞有7个MicroRNA表达上调,5个MicroRNA表达下调,L02/HBx细胞有4个MicroRNA表达上调,12个MicroRNA表达下调。结论成功构建HBx基因及其缺失突变体(HBx-d382)的真核表达模型,该类病毒基因会影响L02肝细胞的MicroRNA表达谱。
- 胡志亮谭德明侯周华刘国珍谢萍欧阳奕刘菲刘洪波
- 关键词：HBX微小RNA
