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Lactacystin诱导帕金森病大鼠黑质小胶质细胞、CD68和环氧化酶-2表达的变化被引量：2: 2012年; 目的：研究蛋白酶体抑制剂lactacysdn诱导大鼠黑质小胶质细胞的数量、活化程度的变化及环氧化酶-2（COX-2）的表达。方法：采用立体定向术将10肛glactacystin注射至大鼠黑质部位，免疫组织化学观察黑质区多巴胺能神经元和小胶质细胞数量、小胶质细胞活化程度（CD68）的变化及炎性介质COX-2的表达；RT-PCR方法检测THmRNA和CD68mR-NA的转录变化情况。结果：注射lactacystin3周后，阿扑吗啡腹腔注射诱导大鼠出现典型旋转行为；4周时模型组大鼠损毁侧黑质酪氨酸羟化酶（TH）阳性细胞数明显减少，黑质小胶质细胞数量增加，CD68和COX-2的表达均增强，与对照组相比，差异均有统计学意义。模型组THmRNA表达低于对照组，CD68mRNA表达高于对照组，差异均有统计学意义。结论：蛋白酶体抑制剂lactacystin能激活大鼠黑质小胶质细胞，诱导与炎症发生有关的CD68和COX2的表达。; 庄文欣陈丹丹付文玉袁丽朱勋于文辉刘丙新吴晓东; 关键词：LACTACYSTIN 帕金森病黑质小胶质细胞 CD68

Nr4a2过表达慢病毒载体的构建及鉴定被引量：1: 2014年; 目的:构建含Nr4a2基因的绿色荧光慢病毒载体,并检测其体外表达目的基因的水平。方法:设计Nr4a2基因的引物,采用聚合酶链反应(PCR)扩增,插入经AgeⅠ/AgeⅠ酶切的GV287慢病毒载体构建GV287-Nr4a2慢病毒质粒。PCR鉴定、测序验证后,将其与pHelper1.0载体、pHelper2.0载体共同转染293T细胞(人胚肾细胞),48小时后收集含慢病毒颗粒的细胞上清液,经浓缩并测定滴度后感染293T细胞,72h后观察增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)的表达。结果:酶切及测序鉴定证实成功构建了重组慢病毒载体GV287-Nr4a2;荧光显微镜下可见绿色荧光高度表达;Nr4a2蛋白能在293T细胞中有效表达;包装过表达慢病毒并测其浓缩滴度为2.0×108TU/ML。结论:成功构建Nr4a2慢病毒载体且在293T细胞中良好表达,为进一步转染大鼠骨髓间充质干细胞,基因治疗帕金森病奠定基础。; 王晓晓付文玉庄文欣王倩刘宗昱刘金城; 关键词：慢病毒过表达

改良纹状体内两点注射6-OHDA法制备大鼠帕金森病模型被引量：6: 2015年; 目的:探讨改良的单侧纹状体两点法双靶点注射神经毒素6-羟多巴胺(6-OHDA)制备帕金森病(PD)大鼠模型,对提高制模成功率的可行性。方法:利用立体定向技术以两点法双靶点注射6-羟多巴胺(6-OHDA)于雄性Sprague-Dawley大鼠右侧纹状体,分别于注射后2周和4周检测两组大鼠行为学变化;免疫组织化学法观察大鼠黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞的数量变化;RT-PCR和Western Blot法分别检测TH mRNA和TH蛋白的表达变化。结果:造模2周后模型成功率为82.9%,4周后模型成功率高达88.6%;与对照组比较,模型大鼠6-OHDA注射侧黑质TH阳性细胞数显著减少(P<0.01);TH mRNA和TH蛋白的表达水平均明显降低(P<0.01)。结论:改良的单侧纹状体两点法双靶点注射6-OHDA制备大鼠帕金森病模型简单、易行,成功率高。; 王晓晓付文玉庄文欣王倩刘宗昱刘金城; 关键词：帕金森病 6-OHDA 纹状体

真核表达载体pIRES2-EGFP-Nurr1的构建及鉴定: 2014年; 目的:构建带有增强型绿色荧光蛋白报告基因EGFP及目的基因Nurr1的真核表达载体pIRES2-EGFP-Nurr1,并检测其在293T细胞中的表达。方法:采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法从大鼠黑质中获取Nurrl基因,连接T载体测序正确后与真核空载体pIRES2-EGFP一起,经Nhe1和Xho1双酶切,T4 DNA连接酶连接,构建pIRES2-EGFP-Nurr1;真核表达载体pIRES2-EGFP-Nurr1测序正确后采用脂质体法将其转染293T细胞,倒置荧光显微镜下观察转染效率,PCR检测Nurr1基因mRNA水平的表达情况,免疫印迹试验(Western Blot)检测Nurr1蛋白的表达水平。结果:酶切及测序鉴定证实成功构建了重组真核表达载体pIRES2-EGFP-Nurr1;293T细胞转染pIRES2-EGFP-Nurr1后可以高度表达绿色荧光,有效转录Nurr1基因并正确的高表达Nurr1蛋白。结论:成功构建Nurr1真核表达载体且在293T细胞中高水平表达,为进一步转染大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),基因治疗帕金森病奠定基础。; 王晓晓付文玉郭军堂庄文欣林志娟; 关键词：真核表达载体

骨髓间充质干细胞黑质内移植对帕金森病大鼠的治疗作用被引量：9: 2013年; 目的探索骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植到帕金森病(Parkinson's disease,PD)大鼠毁损侧黑质内,PD模型大鼠的姿势不对称性和黑质及纹状体内酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)表达的改变,以及BM-SCs在大鼠脑内的存活、分化情况。方法黑质、前脑内侧束两点法注射6-羟多巴胺(6-OHDH)并行为学分析筛选PD模型大鼠。将PD模型大鼠随机分为移植组和对照组。BMSCs移植术后4周和8周,观察大鼠姿势不对称性,免疫组织化学及免疫荧光显色方法检测黑质和纹状体酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)的表达变化以及BMSCs在大鼠体内的存活、迁移及分化情况。结果 BMSCs黑质内移植可使PD模型大鼠的转动频率由(10.62±2.97)r/min降至(4.65±1.08)r/min(P<0.01),显著增加毁损侧黑质TH阳性细胞数量和纹状体内TH阳性纤维密度。BMSCs在大鼠黑质内可以存活至少8周,部分细胞分化为神经干细胞、神经元和神经胶质细胞。结论黑质内移植BMSCs对PD模型大鼠有一定的治疗作用。; 陈丹丹付文玉庄宝祥李锋杰吕翠; 关键词：帕金森病黑质间充质干细胞

应用改良质子磁共振波谱技术研究帕金森病大鼠纹状体内神经代谢的变化被引量：8: 2010年; 利用改良的氢质子磁共振波谱技术观察帕金森病大鼠纹状体内神经代谢的变化。6-羟多巴胺单侧黑质注射制备的帕金森病大鼠模型7只作为实验组,5只正常大鼠设为对照组。采用改良的1.5Tesla双梯度超导型磁共振成像仪对两组大鼠双侧纹状体行氢质子磁共振波谱检测,免疫组织化学技术检测黑质及纹状体酪氨酸羟化酶变化。结果显示,实验组大鼠损毁侧黑质致密部酪氨酸羟化酶阳性神经元及纹状体酪氨酸羟化酶阳性纤维明显减少(P<0.05),证明模型制作成功。损毁侧纹状体内N-乙酰天门冬氨酸/肌酸比值和N-乙酰天门冬氨酸浓度明显低于健侧(P<0.05),双侧纹状体内胆碱类化合物/肌酸比值无显著差别。结果表明,氢质子磁共振波谱可以进行活体连续化无创检测,改良的1.5Tesla磁共振波谱技术可以为偏侧帕金森病大鼠模型纹状体细胞物质代谢改变提供有价值的信息。; 郑志娟付文玉王峻清孙西河庄文欣吕娥杨丽吕翠; 关键词：帕金森病氢质子磁共振波谱酪氨酸羟化酶免疫组织化学

Lactacystin诱导帕金森病大鼠黑质胶质细胞的变化被引量：2: 2011年; 目的观察蛋白酶体抑制剂Lactacystin诱导大鼠黑质胶质细胞的变化、炎性介质NF-κB的表达。方法采用立体定向术将蛋白酶体抑制剂Lactacystin 10μg注射至大鼠黑质部位,免疫组织化学法观察黑质区多巴胺(DA)能神经元、小胶质细胞、星形胶质细胞的变化,炎性介质核转录因子κB(NF-κB)的表达。结果注射Lactacystin 3周,阿朴吗啡腹腔注射后出现典型旋转行为;8周后实验组大鼠损毁侧黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞数明显减少,黑质小胶质细胞及星形胶质细胞的数量均增加,NF-κB表达增强。结论蛋白酶体抑制剂Lactacystin能激活大鼠黑质小胶质细胞及星形胶质细胞,诱导炎性介质表达。; 庄文欣付文玉杨丽; 关键词：LACTACYSTIN 帕金森病小胶质细胞星形胶质细胞

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山东省自然科学基金(Y2008C129)

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