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肿瘤细胞对TRAIL敏感性与其表面DR5表达水平的相关性研究被引量：35: 2004年; 目的　探讨肿瘤细胞表面DR5表达水平与其对肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)敏感性之间的关系。方法　利用抗DR5特异性单克隆抗体 ,采用流式细胞仪技术直接检测不同肿瘤细胞系表面DR5的表达水平 ,并采用TRAIL凋亡检测试剂盒检测肿瘤细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感性 ,研究两者之间的关系。结果　不同肿瘤细胞表面DR5的表达水平分别为 :U937细胞97.9%、Jurkat细胞 95 .1%、SW4 80细胞 93.8%、HCT116细胞 86 .2 %、HL 6 0细胞 6 4 .2 %、HeLa细胞4 6 .6 %、K5 6 2细胞 13.1% ;TRAIL诱导的细胞凋亡率分别为 :U937细胞 72 .6 %、Jurkat细胞 85 .2 %、SW4 80细胞 78.6 %、HCT116细胞 70 .2 %、HL 6 0细胞 6 0 .1%、HeLa细胞 4 5 .4 %、K5 6 2细胞 12 .3%。经统计学分析 ,两者之间呈现非常明显的正相关 (r=0 .997,P <0 .0 0 1)。结论　肿瘤细胞对TRAIL的敏感性与其表面DR5表达水平有关。; 马远方张军赵粤萍杨东亮陈有海; 关键词：DR5 肿瘤细胞 SW480 U937细胞 HCT JURKAT细胞

DR5在TRAIL诱导Jurkat细胞凋亡中的作用被引量：12: 2004年; 目的 :研究DR5在介导TRAIL凋亡信号中的作用。方法 :用含人DR5细胞外全长结构域重组DR5免疫BALB C小鼠 ,制备抗DR5单克隆抗体 ;流式细胞仪检测Jurkat细胞表面DR5表达水平 ;采用TRAIL凋亡检测试剂盒 ,检测Jurkat细胞凋亡率及抗DR5单克隆抗体对TRAIL诱导细胞凋亡的阻断率。结果 :DR5在Jurkat细胞表面的表达率为 94 83% ,TRAIL和抗TRAIL单克隆抗体能够诱导Jurkat细胞凋亡 ,呈现明显的剂量相关性 ,TRAIL浓度在 5 0～ 10 0ng ml时 ,杀伤率达 90 %以上。预先用抗DR5单克隆抗体与Jurkat细胞作用后 ,TRAIL对Jurkat细胞的杀伤功能几乎完全被mAb所阻断 ,其平均阻断率达90 4 9%。结论 :DR5在TRAIL诱导Jurkat细胞凋亡中起着十分关键的作用。; 马远方杨东亮陆士新陈有海; 关键词：死亡受体5 凋亡

抗人DR5单抗与阿霉素联合对人肝癌细胞SMMC-7721协同杀伤效应被引量：7: 2006年; 目的:探讨mDRA-6对肝癌细胞系SMMC-7721致凋亡作用,及阿霉素与mDRA-6联合协同杀伤效应与机制。方法:常规培养肝癌细胞SMMC-7721,流式细胞术检测细胞表面DR5的表达率。Hoechst 33258染色观察SMMC-7721细胞形态变化;MTT法检测细胞毒性作用;流式细胞术定量分析凋亡细胞率。结果:(1)mDRA-6能够诱导SMMC-7721细胞凋亡,在1.89μg/m l浓度下可杀伤36%的细胞,增加mDRA-6浓度,凋亡作用无明显增加;(2)SMMC-7721细胞对阿霉素敏感,存在浓度依赖性;(3)阿霉素与mDRA-6联合对SMMC-7721细胞具有协同杀伤作用,2μg/m l的mDRA-6与40 ng/m l的阿霉素联合杀伤60%SMMC-7721,Hoechst 33258染色和Annexin V/PI染色证实杀伤作用是通过细胞凋亡实现的。结论:mDRA-6能够诱导肝癌细胞SMMC-7721凋亡,阿霉素与mDRA-6联合具有协同作用。; 张军马远方刘广超李淑莲卢锋; 关键词：阿霉素协同杀伤作用

抗人DR5单克隆抗体对人肝癌细胞系HepG2的凋亡作用被引量：8: 2007年; 探讨抗人DR5单克隆抗体(mDRA-6)对人肝癌细胞系HepG2致凋亡的作用。常规培养人肝癌细胞系HepG2,流式细胞术定量分析检测HepG2细胞表面DR5的表达。MTT法检测mDRA-6的细胞毒性作用;Annexin V-FITC/PI双色标记HepG2细胞,流式细胞术定量分析检测细胞凋亡率;在荧光显微镜下观察mDRA-6对HepG2细胞形态变化的影响。结果显示,HepG2细胞表面有DR5表达,其平均表达百分率为40%。MTT法检测显示在40 mg/L mDRA-6浓度下可杀伤42%的细胞;Hoechst33258染色证实杀伤作用是通过细胞凋亡实现的经流式细胞术检测显示,3 mg/L的mDRA-6作用HepG2细胞6 h导致24.61%的细胞发生凋亡;在荧光显微镜下可观察到mDRA-6诱导导致HepG2细胞呈现典型细胞凋亡的形态特征。上述结果表明,mDRA-6能够诱导人肝癌细胞系HepG2凋亡。; 张军马远方刘广超李淑莲; 关键词：DR5 单克隆抗体细胞凋亡

食管癌细胞表面DR5的表达分布与细胞铺展状态的关系被引量：6: 2006年; 目的:探讨食管癌鳞癌EC9706细胞系细胞表面DR5的表达分布与细胞铺展状态的关系。方法:免疫细胞化学技术分析食管癌EC9706细胞的DR5表达分布;流式细胞术检测食管癌细胞表面DR5的表达及细胞的凋亡率。结果:DR5分布在食管癌EC9706细胞的细胞质和细胞膜表面,主要在细胞质,但在细胞核没有DR5分布,而且在悬浮的食管癌细胞表面DR5表达高于铺展者。悬浮的食管癌细胞对抗DR5功能性抗体诱导的细胞凋亡敏感性高于铺展者。结论:食管癌细胞表面DR5的表达与细胞铺展状态具有密切的关系,细胞铺展状态的变化直接影响细胞表面DR5的表达分布以及对抗DR5功能性抗体诱导的细胞凋亡敏感性。该研究结果对进一步探讨DR5表达分布的机制以及TRAIL和DR5的功能性抗体的抗肿瘤临床应用有一定的指导意义。; 刘广超都景芳马远方王秀英高荣高萍刘世贵; 关键词：DR5 功能性抗体 TRAIL 细胞凋亡

抗人DR5功能性抗体的研制: 2007年; 目的:研制抗人DR5功能性单克隆抗体。方法:采用杂交瘤技术制备抗人DR5的mAb;MTT方法筛选分泌有细胞毒活性mAb的杂交瘤细胞;亲和层析方法纯化mAb;夹心ELISA法测定mAb亚型;Western blotting和斑点ELISA法检测mAb的抗原表位类型;间接ELISA法检测mAb的特异性;观察抗体诱导细胞凋亡的形态学特征。结果:获得1株合成分泌有细胞毒活性抗体的杂交瘤细胞,其分泌的mAb命名为mDRA-6,为Ig G1,其抗原表位类型为构象表位,其特异性识别hDR5,与hFas、hDR4等无交叉反应。mDRA-6对Jurkat细胞具有细胞毒作用,经mDRA-6处理后,Jurkat细胞表现出细胞凋亡的形态学特征。结论:获得一种抗人DR5功能性抗体mDRA-6,在以TRAIL/DR5系统进行肿瘤治疗和探讨DR5的功能结构域研究方面具有广泛应用前景。; 刘广超李淑莲卢峰白慧玲张军杜耀武赵粤萍都景芳马远方; 关键词：死亡受体5 细胞凋亡单克隆抗体 TRAIL

检测DR5双抗体夹心ELISA方法的建立及应用被引量：1: 2007年; 目的:建立检测DR5双抗体夹心ELISA方法,通过检测慢性乙型肝炎患者血清可溶性DR5水平,探讨其在肝炎发病机理中的作用。方法:采用本室制备的鼠抗DR5的单抗YM366ED作为包被抗体,鼠抗DR5的单抗YM366EC标记HRP,建立检测sDR5的ELISA,并测定52例慢性乙型肝炎和30例正常人血清sDR5浓度。结果:建立了检测人sDR5的夹心ELISA法,方法的变异系数小于5%,回收率85%以上。慢性乙型肝炎患者血清sDR5浓度明显高于正常对照组。结论:成功地建立了一种可用于检测血清sDR5的双抗体夹心ELISA,为判定某些相关疾病患者的病情、疗效及预后提供有用的工具。血中sDR5在慢性乙型肝炎发病过程中可能起着重要作用,检测病人血中sDR5水平可作为慢性乙型肝炎疾病活动性指标。; 白慧玲刘广超赵粤萍马远方; 关键词：ELISA 细胞凋亡肝炎病毒性

重组人可溶性DR5蛋白的分离纯化及其生物活性检测被引量：4: 2007年; 目的:提纯毕赤酵母GS115菌株表达的重组人可溶性死亡受体5(sDR5)蛋白,并研究其对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)所诱导细胞的阻断效应。方法:大量扩增可溶性DR5酵母表达载体转化阳性的毕赤酵母GS115菌株,收集上清,利用Ni-NTA Agarose亲和层析柱纯化获得重组可溶性DR5,用SDS-PAGE检测纯化产物的纯度。用流式细胞仪检测纯化的可溶性DR5对TRAIL诱导Jurkat细胞凋亡作用的阻断效应。结果:转化阳性的毕赤酵母GS115菌株可以成功表达分子量为23kD的可溶性DR5蛋白,经过Ni-NTAAgarose亲和层析柱纯化,SDS-PAGE鉴定显示获得了高纯度的重组人可溶性DR5蛋白,培养上清产量达28.69mg/L;体外活性检测结果显示,纯化的可溶性DR5蛋白几乎完全可以阻断TRAIL诱导的Jurkat细胞凋亡作用。结论:经纯化后的重组人可溶性DR5蛋白可以有效阻断TRAIL诱导的细胞凋亡作用,显示DR5在TRAIL诱导Jurkat细胞凋亡作用中起着十分关键的作用。; 杜耀武刘广超赵粤萍白慧玲马远方; 关键词：死亡受体5 细胞凋亡 JURKAT细胞

诱导细胞凋亡的抗hDR5单抗的研究被引量：16: 2006年; 目的研制能诱导肿瘤细胞凋亡的抗人DR5单克隆抗体(McAb)。方法以可溶性人死亡受体(death receptor,DR)5胞外段免疫小鼠,采用杂交瘤技术制备抗人DIL5的MeAb;MTT方法筛选分泌有细胞毒活性McAb的杂交瘤细胞;亲和层析方法纯化McAb;夹心ELISA法测定McAb亚型; Western blot和斑点ELISA法检测McAb的抗原表位类型;间接ELISA法检测McAb的特异性;流式细胞仪检测FTTC-annexinⅤ／PI双色标记的Jurkat细胞的凋亡率;DNA琼脂糖凝胶电泳测定凋亡细胞的DNA片段化。结果获得1株杂交瘤细胞,其分泌的McAb命名为mDRA-6,为IgG1;其抗原表位类型为构象表位;其特异性识别hDR5,与hFas、hDR4等无交叉反应。mDRA-6对Jurkat细胞具有细胞毒作用;经McAb mDRA-6处理后,Jurkat细胞膜表面高表达丝氨酸磷脂,并导致Jurkat细胞中的DNA片段化。结论mDRA-6是一个具有诱导细胞凋亡活性的新的抗人DR5功能性抗体,在以TRAIL／DR5系统进行肿瘤治疗和探讨DR5的功能结构域研究方面具有广泛应用前景。; 刘广超马远方李淑莲白慧玲张军卢峰杜耀武赵粤萍都景芳; 关键词：死亡受体5 细胞凋亡单克隆抗体

抗人DR5单克隆抗体对人肝细胞系HL7702的凋亡作用被引量：7: 2006年; 目的:探讨抗人DR5单克隆抗体(mDRA6)对人肝细胞系HL7702致凋亡的作用。方法:流式细胞术检测HL7702细胞表面DR5的表达。在荧光显微镜下观察mDRA6对HL7702细胞形态变化的影响;MTT法检测mDRA6的细胞毒性作用;AnnexinVFITC/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:mDRA6导致HL7702细胞呈现典型细胞凋亡的形态特征;MTT法检测显示在40mg/L浓度下可杀伤39%的细胞;经流式细胞术检测显示,3mg/L的mDRA6作用HL7702细胞6h导致25.5%的细胞发生凋亡。结论:mDRA6能够诱导人肝细胞系HL7702凋亡,mDRA6具有诱导细胞凋亡的活性。; 张军马远方刘广超李淑莲卢锋; 关键词：DR5 单克隆抗体细胞凋亡

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河南省医学科技创新人才工程项目(2002119)

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