广东省自然科学基金(7300385)
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- 双歧杆菌表达的重组人GrB-VRB融合蛋白诱导KDR阳性细胞凋亡
- 2012年
- 目的在双歧杆菌中表达重组人颗粒酶B-血管内皮生长因子结合肽(GrB-VRB)融合蛋白并研究其对血管内皮生长因子受体I(IKDR)阳性细胞的作用。方法采用电穿孔法将重组表达载体转入双歧杆菌,以ELISA和免疫印迹鉴定表达产物,以细胞增殖试验和TUNEL法分析其对KDR阳性细胞的影响。结果工程化化双歧杆菌培养物的上清和菌体中均有重组产物,重组人GrB-VRB能有效抑制KDR阳性如人脐静脉血管内皮细胞株HUVEC、小鼠结肠癌细胞株CT-26细胞增殖、细胞死亡,这种死亡的机制是细胞凋亡;但对KDR阴性细胞则无这些作用。结论工程化双歧杆菌能分泌性表达重组GrB-VRB融合蛋白,其在VRB的靶向作用下,GrB可有效地诱导KDR阳性细胞凋亡。
- 陈蕾曾位森郑航
- 关键词：颗粒酶B双歧杆菌细胞凋亡
- 兔抗人Cyclin D1b多克隆抗体的制备与鉴定
- 2010年
- 目的:制备Cyclin D1b蛋白C端多肽的多克隆抗体,为后续Cyclin D1b的研究奠定基础。方法:用生物信息学方法分析Cyclin D1b蛋白的同源性、亲水性和抗原性,设计并合成Cyclin D1b C端的氨基酸序列,将合成后的多肽与钥孔血蓝蛋白(Keyhole-limpet hemocyanin,KLH)偶联并免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体。ELISA法检测多抗效价,Western blotting检测Cyclin D1b的表达,免疫组织化学法检测该抗体的特异性与适用范围。结果:成功制备兔抗人Cyclin D1b蛋白C端多肽的多克隆抗体,ELISA法效价为1∶18 000。纯化后的抗体用于Western blotting可特异识别MCF-7细胞中的Cyclin D1b,并可用于免疫组织化学检测。结论:制备成功Cyclin D1b蛋白C端多肽的多克隆抗体,此多抗可用于Western blotting和免疫组织化学等分析。
- 郑航梁继珍苏宁陈逢生李荣
- 关键词：CYCLIN多克隆抗体MCF-7细胞
