江苏省高校自然科学研究项目(09KJD23003)
- 作品数：2 被引量：54H指数：2
- 相关作者：张鑫宇夏晓莉孙怀昌朱善元左伟勇更多>>
- 相关机构：扬州大学江苏农牧科技职业学院更多>>
- 发文基金：江苏省高校自然科学研究项目公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 非洲猪瘟病毒E183L、B602L、K205R和A104R基因表达及诊断抗原筛选被引量：10
- 2014年
- 为了获得非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)重组蛋白pK205R、pE183L、pA104R和pB602L,将Ba71V株的K205R、E183L、A104R和B602L基因分别亚克隆进行原核表达载体pET30a(+),构建重组质粒pET-E183L、pET-B602L、pET-K205R和pET-A104R,转化大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)。IPTG诱导后,纯化表达的蛋白,并进行Western blotting鉴定,结果4种重组蛋白与预期大小一致,且与ASFV抗体发生特异性反应。为了从表达的4种重组蛋白中筛选最佳诊断抗原,将其分别包被酶标板,间接ELISA检测ASFV阳性血清,发现重组蛋白pK205R、p54和pB602L血清学反应良好;在检测ASFV感染后第13天分离血清时,重组蛋白p54和pK205R效果更佳,这表明p54和pK205R重组蛋白是较好的诊断抗原,可用于ASFV感染后早期或中后期血清学诊断。
- 张鑫宇陈宇刘文俊夏晓莉孙怀昌
- 关键词：非洲猪瘟病毒重组蛋白诊断抗原
- 非洲猪瘟病毒p54抗体胶体金试纸检测方法的建立被引量：47
- 2014年
- 为建立非洲猪瘟病毒（ASFV）p54抗体的胶体金检测方法，本研究原核表达并纯化了带有His标签的p54重组蛋白（aa51～aa183），胶体金标记后，喷涂玻璃纤维垫，分别以SPA和抗p54多克隆抗体作为检测线和质控线，制作ASFVp54抗体检测胶体金免疫层析试纸。检测结果表明，该试纸条的敏感性为200ng／mL，对ASFV抗体阳性猪血清具有高度特异性，与猪其他病毒抗体阳性血清无交叉反应。对141份猪血清样品进行比对检测表明，在ASFV感染早期，胶体金试纸优于OIE推荐间接ELISA检测方法；以western blot检测方法作为参照，该试纸条检测疫区临床阳性样品的符合率比OIEELISA高。表明本研究建立的ASFV抗体免疫层析检测方法具有特异性强、敏感性高等特点，在ASF防控中具有趣好的应用前景。
- 张鑫宇左伟勇朱善元夏晓莉孙怀昌
- 关键词：非洲猪瘟病毒抗体检测
