国家重点基础研究发展计划(2013CB531601)
- 作品数：26 被引量：106H指数：6
- 相关作者：廖万清潘炜华方伟陈敏杨雅骊更多>>
- 相关机构：第二军医大学上海长征医院同济大学附属杨浦医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金上海市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 条件启动子pCTR4在隐球菌基因表达调控中的应用被引量：1
- 2014年
- 目的通过条件启动子pCTR4的质粒构建以及其在新生隐球菌中的同源置换,研究其在隐球菌基因表达调控中的应用。方法应用套叠PCR,构建含报告基因NEO的铜离子抑制性启动子质粒pNEO/CTR4和启动子同源重组框,并利用基因枪将其转化入新生隐球菌感受态细胞,常规及实时定量PCR检测条件启动子对目的基因的转录调控效应。结果成功构建了质粒pNEO/CTR和隐球菌条件启动子重建菌株,条件启动子pCTR4对目的基因具有预期的转录诱导和抑制效果。结论新建铜离子抑制性启动子质粒pNEO/CTR4可以应用于对隐球菌目的基因表达水平的调控;隐球菌泛素编码基因UBI 1并非致死性关键基因。我们的研究为今后新生隐球菌泛素系统的分子致病机制研究奠定了基础。
- 赵静宇法振宗方伟孟云芳张超周兆婧潘炜华廖万清
- 关键词：新生隐球菌泛素致病机制
- 免疫正常人群隐球菌性脑膜炎临床分析被引量：9
- 2016年
- 目的分析近似免疫正常患者发生隐球菌性脑膜炎的临床表现及特点。方法回顾分析我院近16a来相关隐球菌性脑膜炎患者的临床表现、实验室检查及诊治情况。结果 44例患者中,平均年龄为(35.9±17.2)岁,男女性别比例为1.2∶1。临床表现不典型,以头痛(93.2%)、恶心(70.5%)、呕吐(68.2%)等最为常见。脑脊液压力偏高,平均为(339.3±75.0)mmH2O。42例首次腰穿后脑脊液行隐球菌墨汁染色的患者中,有41例(97.6%)真菌镜检阳性;查到34例患者的脑脊液乳胶凝集试验信息,其中33例(97.1%)阳性;有培养记录的患者有11例,阳性率为100%。44例患者抗真菌治疗诱导期以两性霉素B联合氟胞嘧啶(6例,13.6%)为主。所有患者经抗真菌治疗之后,治愈14例,好转14例,视力听力受累15人,1例女性患者出现轻瘫,所有患者到随访时间为止无死亡病例。结论新生隐球菌也可累及近似免疫正常患者人群,导致隐球菌性脑膜炎,且早期临床表现不典型,极易误诊漏诊,临床医师对此应提高警惕。对疑似病例及早送脑脊液标本行相关真菌学检查是明确诊断的关键。
- 刘加方文捷洪南李娟陈敏潘炜华廖万清
- 关键词：隐球菌性脑膜炎
- 上海某综合性医院秋季室内外环境空气中真菌种群分布的研究被引量：4
- 2016年
- 目的监测目前上海地区某综合性医院室内外环境空气中真菌种群分布特征,为临床侵袭性真菌感染的防治提供科学依据。方法于2015年秋季以基于微生物气溶胶采集的空气采样器采样法与曝皿法随机对上海地区某综合性三甲医院的26处室内及7处室外环境进行同步空气采样,相关样本在含有氯霉素的沙氏培养基上经培养、分离、纯化及分子鉴定后,对不同采样地点真菌种群结构予以统计学分析。结果上海地区综合性三甲医院室内空气中青霉属(约24.14%)在真菌种群结构中占有明显优势,室外空气中则以分枝孢子菌属占有优势(约34.09%),青霉属在室内空气中所占比重(约24.14%)明显高于室外(11.09%)。结论虽然上海地区的医疗水平国内领先,且被调查医院已按相关规定进行了日常环境消毒工作,但被调查医院室内外空气中仍被发现存在高度多样性的真菌种群结构,且包含了常见的机会致病真菌如烟曲霉等,继续加强综合性医院室内外环境中真菌等病原微生物的监测和加强院内感染的控制是非常必要的。
- 洪南方文捷刘加陈敏潘炜华廖万清
- 关键词：空气采样真菌感染
- 扁桃酸代谢对新生隐球菌毒力作用的探讨
- 2015年
- 目的探讨扁桃酸代谢对新生隐球菌毒力作用的影响。方法采用套叠PCR方法,构建扁桃酸消旋酶、扁桃酸脱氢酶及过氧化氢铜胺氧化酶基因重组片段,利用基因枪将重组片段转入新生隐球菌JEC21,应用PCR筛选、DNA测序等方法对阳性克隆子进行筛选与鉴定。体外观察并检测突变菌株对多种应激条件的应答反应。结果成功构建了新生隐球菌JEC21扁桃酸消旋酶、扁桃酸脱氢酶及过氧化氢铜胺氧化酶的基因缺陷菌株(mreΔ,lmdΔ,pcaoΔ),发现缺陷菌株mreΔ对于毒力功能影响不大,pcaoΔ、lmdΔ在高温、高渗、氧化应激等方面毒力减退,而黑色素分泌增加。结论扁桃酸代谢参与介导新生隐球菌毒力作用的调控,但其具体机制有待于进一步的研究探讨。
- 周兆婧方伟潘炜华廖万清
- 关键词：新生隐球菌扁桃酸
- 烟曲霉播散性感染1例误诊分析被引量：1
- 2016年
- 报道1例由烟曲霉导致的全身侵袭性真菌感染。患者男,32岁,因腹主动脉瘤及腹部肿块入我院血管外科行腹主动脉成型及夹层动脉瘤腔内栓塞术,术中腹部包块冰冻病理提示巨大淋巴结增生症(Castleman病)转入我科进一步治疗。PET-CT提示恶性淋巴瘤,考虑为恶性肿瘤,但骨髓穿刺及细胞免疫表型流式未见明显异常,淋巴结及腹部包块病理回报提示真菌感染,给予米卡芬净等抗真菌治疗,患者因感染严重全身器官衰竭死亡,后病理组织提取真菌DNA经ITS测序后确诊为烟曲霉感染。
- 郭凯项珍珍桑军军陈莉
- 关键词：侵袭性真菌感染烟曲霉误诊
- 高发、新发真菌病的临床流行病学和早期诊断技术研究
- 博士期间(2015-2018)主要致力于临床真菌病诊治和早期诊断技术研发和产品转化。以第一作者(含并列)发表SCI论文9篇(6分以上第一排名2篇),累计IF=28,参编论著两部,持有专利20项,主持科研基金2项,获华夏科...
- 方文捷潘炜华廖万清
- 关键词：隐球菌念珠菌
- 文献传递
- 隐球菌感染的免疫疗法
- 2014年
- 隐球菌属属于担子菌门一冬孢菌纲一黑粉菌目一黑粉菌科，包括37个不同种[1]，其中能对人类致病的主要是新生隐球菌和格特隐球菌，而其他变种如罗伦隐球菌、浅白隐球菌等几乎不感染人类[2]。新生隐球菌感染好发于免疫低下的人群，包括HIV感染、接受实体器官移植以及接受其他免疫抑制剂治疗的人群。与新生隐球菌相反的是，格特隐球菌多发生在免疫正常的人群[3]。
- 雷文知潘炜华廖万清
- 关键词：隐球菌免疫
- 建立携带左旋天门冬酰胺酶的红细胞特异性表达系统被引量：1
- 2014年
- 目的:建立基因修饰红细胞输送左旋天门冬酰胺酶(L-ASNase)的体系。方法:采用2A联体技术将L-ASNase和红色单体荧光蛋白基因分别置于红细胞特异性基因调控元件或非组织特异性短延长因子1α启动子控制下,构建慢病毒载体,分别包装成组织特异性重组慢病毒或非组织特异性重组慢病毒,测定病毒滴度,并分别感染靶细胞,用六氧苄基鸟嘌呤/卡莫司汀联合筛选以富集感染的小鼠红白血病阳性细胞;用六亚甲基二乙酰胺诱导富集的阳性细胞向红细胞分化,流式细胞术检测红色单体荧光蛋白报告基因的表达,荧光显微术观察基因表达产物在细胞中的定位,免疫印迹分析L-ASNase的表达水平,评估在红细胞分化过程中组织特异性重组慢病毒的表达优势。结果:经限制性内切酶谱分析和序列测定,构建的重组慢病毒载体结构正确;免疫荧光结果显示在非组织特异性慢病毒感染的HeLa细胞中,L-ASNase主要表达在细胞质,单体红色荧光蛋白主要表达在细胞核内,提示2A序列通过自裂解使同一读框中的2个基因获得了表达;用50μmol/L六氧苄基鸟嘌呤-50μmol/L卡莫司汀联合筛选,可有效富集感染的小鼠红白血病阳性细胞;经六亚甲基二乙酰胺诱导,第7 d的MEL细胞中表达的重组L-ASNase浓度达0.3 U/mg总蛋白。结论:红细胞特异性慢病毒载体可以在小鼠红白血病细胞向红细胞分化过程中使携带基因的表达逐步增高,优于非组织特异性慢病毒载体。本研究为基因修饰造血干细胞、并通过体外细胞分化的方法大量产生携带L-ASNase的红细胞治疗恶性血液病奠定了临床前的实验基础。
- 潘欣曾思良宋维余秀珍张俊张鸿声方伟陈敏廖万清
- 关键词：慢病毒载体基因调控
- 病原性真菌蛋白酶致病机制研究进展被引量：5
- 2017年
- 蛋白酶在真菌的生存和生长过程中具有重要作用,同时也被认为是病原性真菌的重要毒力因子之一。病原性真菌蛋白酶可能参与真菌对宿主的黏附、定植和播散以及逃避宿主的免疫应答过程。部分蛋白酶还被认为是变应原,可诱发哮喘和过敏性疾病。在不同的病原性真菌中,蛋白酶作用也不同。研究蛋白酶的致病机制,可进一步了解真菌感染机制,为诊断及治疗真菌感染提供线索。
- 桑军军李颖芳潘炜华廖万清
- 关键词：蛋白酶致病机制真菌感染
- 新生隐球菌嗜中枢性感染机制的研究进展被引量：7
- 2014年
- 新生隐球菌是临床上最重要的侵袭性病原真菌之一,可感染免疫抑制和免疫正常人群引发具有致命威胁的隐球菌性脑膜脑炎。近年来,隐球菌嗜中枢神经系统感染的机制研究取得了长足的进展,隐球菌参与侵袭中枢神经系统的相关毒力因子及多条宿主细胞应答信号通路相继被发现。
- 法振宗方伟顾菊林廖万清
- 关键词：新生隐球菌中枢神经系统感染毒力因子
