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Burkholderia sp.ZYB002中lipA基因的敲除对细胞脂肪酶活性的影响: 2014年; Burkholderia sp.ZYB002菌株不仅能产生大量的胞外脂肪酶,还能产生大量的细胞结合脂肪酶。对细胞结合脂肪酶的种类进行定性研究,将为开发全细胞脂肪酶催化剂奠定基础。通过分析与Burkholderia sp.ZYB002菌株具有较高同源性的Burkholderia cepacia J2315菌株的脂肪酶基因家族,推测潜在的细胞结合脂肪酶编码基因。通过同源重组插入失活Burkholderia sp.ZYB002菌株的lipA基因,筛选出突变体转化子;测定突变体菌株细胞结合脂肪酶的活性,并与野生型菌株比较。试验结果表明,lipA基因插入失活的Burkholderia sp.ZYB002-ΔlipA菌株的细胞结合脂肪酶活性降低了42%。; 时韶磊林红舒正玉刘艳如李欣武海龙黄建忠; 关键词：基因敲除

理性设计盐桥构建伯克霍尔德菌脂肪酶热稳定突变体被引量：1: 2017年; 【目的】借助蛋白质工程技术提高伯克霍尔德菌ZYB002脂肪酶LipA的热稳定性,以期更好地将其应用于工业生产中。【方法】利用YASARA、Fold X、Rosetta、Gromacs等生物信息学软件,构建1个脂肪酶Lip A的热稳定性提高的微型突变体电子文库;通过对突变体的结构信息和自由能变化进行评估,筛选出潜在的有价值的突变体。继而利用基因定点突变技术,构建上述候选突变体的突变基因文库,通过实验筛选出热稳定性提高的脂肪酶LipA突变体。【结果】利用上述方法,从构建的20个脂肪酶LipA突变体中,筛选到热稳定性有显著提高的3个突变体LipA-Asn^(125)Asp、LipA-Asn^(125)Glu和LipA-Gln^(262)Glu。经55°C处理12 min后,上述3个突变体的T1250值较野生型分别提高4.0°C、5.5°C和4.4°C;在55°C下的半衰期较野生型分别提高了2.2倍、3.8倍和2.6倍。【结论】利用生物信息学软件,构建脂肪酶LipA突变体电子文库,结合蛋白质的结构信息,可以快速筛选到热稳定性提高的脂肪酶LipA突变体。; 刘艳如赵丙春董盼盼邱黎清黄建忠朱晓兰王作镇舒正玉

酶法原位制备过氧乙酸对活性艳蓝KN-R氧化脱色的工艺被引量：4: 2015年; 利用过水解酶催化合成过氧乙酸,过氧乙酸原位氧化活性艳蓝KN-R脱色.在单因子试验的基础上,通过正交优化试验确定活性艳蓝KN-R的最佳脱色条件为:在5 m L反应体系中,最适p H 5.0,加酶量为20 U·反应-1,乙酸乙酯对过氧化氢的摩尔比率为40∶1和活性艳蓝KNR的浓度为80 mg·L-1.在此条件下反应6 h后,活性艳蓝KN-R的脱色率为81.11%,24 h后的脱色率为91.96%.在50倍放大试验中,该工艺24小时的脱色率为84.55%.; 武海龙舒正玉林红李婷刘艳如叶菲慕向朵李欣江贤章黄建忠; 关键词：过氧乙酸原位制备脱色活性艳蓝KN-R

基于空腔填充效应构建伯克霍尔德菌脂肪酶LipA的热稳定性突变体: 2019年; [目的]中温伯克霍尔德菌胞外脂肪酶LipA在工业领域具有重要的应用价值。利用蛋白质工程技术来提高其热稳定性,对开发脂肪酶LipA酶制剂及提高其应用范围及应用效果,具有重要的意义。[方法]利用生物信息学软件Castp、Voronoia和Cave分析LipA分子中存在的空腔及其组成氨基酸残基;利用FoldX软件构建上述氨基酸残基的突变体电子文库,并基于空腔效应(体积变小)、自由能变化值(降低)和空间结构特点等对前述突变体电子文库进行筛选。从突变体电子文库中选择具有代表性的突变体,通过基因工程技术,引入突变。经诱导表达后,实验验证并筛选出热稳定性的突变体。[结果]构建了一个由58个突变体组成的电子文库;并对其中17个代表性的突变体进行了实验验证;筛选到2个热稳定性有明显提高的突变体LipA-His^15Pro和LipA-Ala^210Val;其叠加突变体LipA-His^15Pro/Ala^210Val的T50^12较野生型LipA提高了8℃,在55℃下的半衰期较野生型脂肪酶LipA提高了23.1倍。[结论]基于空腔填充技术构建热稳定性伯克霍尔德菌胞外脂肪酶LipA突变体,是一种行之有效的策略。; 刘艳如李鑫董盼盼黄建忠舒正玉; 关键词：半衰期

伯克霍尔德氏菌ZYB002脂肪酶lipC24基因的克隆、表达及其酶学性质被引量：2: 2015年; 【目的】克隆伯克霍尔德菌ZYB002菌株中的新型脂肪酶lip C24基因,测定其基本酶学性质,为后续深入研究该基因在菌株中的生理功能奠定基础。【方法】根据洋葱伯克霍尔德菌JK321菌株的全基因组DNA信息,直接设计引物从伯克霍尔德菌ZYB002菌株基因组中扩增出lip C24基因,并对之进行原核表达、重组蛋白的纯化及酶学性质分析。【结果】lip C24基因全长1317 bp,编码438个氨基酸残基;多肽链中具有保守五肽-G-X1-S-X2-G-序列;重组蛋白Lip C24的分子量为45 k Da;能有效水解各种对硝基苯酯,对中链脂肪酸的对硝基苯酯表现出偏爱性;其催化水解反应的最适温度为40℃,最适p H7.5;40℃下的半衰期为15.72 min,在p H 7.0-8.0的条件下,具有较好的稳定性。【结论】lip C24的编码产物为一个45 k Da蛋白,具有明显的脂肪酶活性,为中温中性脂肪酶。; 林红黄建忠舒正玉刘艳如武海龙李欣江贤章叶菲郑贞芬林跃鑫; 关键词：酶学性质

细菌脂肪酶在大肠杆菌细胞表面的功能性展示被引量：1: 2014年; 细胞表面展示技术已广泛应用于突变文库的高通量筛选,有力地促进了蛋白质工程的发展。以来自于铜绿假单胞菌的自转运蛋白Est A的羧基端结构域作为锚定区,构建脂肪酶LipA与EstA羧基端结构域的融合基因,并将融合基因插入到改造后的pACYC-Duet表达载体中,获得表面展示载体pBCCB-X1。将载体pBCCB-X1分别导入到大肠杆菌JK321和大肠杆菌UT5600菌株中,以IPTG诱导融合基因的表达。分别用三丁酸甘油酯定性检测和pNPO定量检测诱导表达后的全细胞脂肪酶的水解活性。试验结果表明,脂肪酶LipA在大肠杆菌JK321和大肠杆菌UT5600细胞表面均得到功能性展示,水解活性分别为(2.8±0.1)U/OD和(2.6±0.06)U/OD。脂肪酶LipA在大肠杆菌细胞表面的功能性展示,为后续高通量筛选LipA突变基因文库,奠定了坚实的基础。; 徐丽香王作镇舒正玉武海龙刘艳如李欣黄建忠; 关键词：大肠杆菌细胞表面展示枯草芽胞杆菌

热稳定性伯克霍尔德菌脂肪酶A突变体的筛选被引量：3: 2015年; 【目的】为更好地提高伯克霍尔德菌ZYB002脂肪酶LipA在TMP纸浆造纸工艺中的应用,有必要利用蛋白质工程技术,提高其热稳定性。【方法】基于B-factor值筛选LipA多肽链中潜在的突变位点,利用迭代饱和诱变技术,构建突变文库,筛选热稳定性提高的突变体。【结果】利用上述方法,从4个突变文库中分别筛选到在55℃下,半衰期较野生型脂肪酶LipA分别提高了1.8倍、3倍、2.2倍和1.7倍的脂肪酶突变体。【结论】基于B-factor值选择突变位点,利用迭代饱和突变技术,快速筛选到热稳定性有显著提高的突变体。; 刘艳如邱黎清黄建忠赵丙春王作镇朱晓兰高媛媛舒正玉; 关键词：热稳定性 B值

伯克霍尔德菌ZYB002胞外脂肪酶的分离纯化及其酶学性质分析被引量：3: 2014年; 伯克霍尔德菌ZYB002胞外脂肪酶发酵上清液经冻干、透析、DEAESepharose Fast Flow层析柱和SephadexG-75层析柱等步骤纯化后，获得电泳纯的脂肪酶．纯化后的脂肪酶分子质量为33ku，水解棕榈酸对硝基苯的比活力为1902．5U·mg^-1．脂肪酶催化水解反应的最适温度和最适pH值分别为50℃和8．5；在30-65℃和pH3．0-10．0的范围内保持相对稳定．脂肪酶对烷烃、非离子型表面活性剂等有机溶剂具有较好的耐受性．在最适条件下，脂肪酶水解pNPP的k和‰。。分别为3．79mmol·L^-1和714．29μmol·mg^-1·min^-1．; 刘艳如邱芳锦舒正玉王作镇邱黎清李欣江贤章黄建忠; 关键词：分离纯化酶学性质

自转运蛋白作为细菌表面展示系统的研究进展被引量：3: 2015年; 细菌表面展示技术已成功应用于生物技术、生物医药等诸多领域。在众多细菌表面展示系统中,基于自转运蛋白构建的细菌表面展示系统因其强大的外源蛋白展示能力,展现出良好的应用潜力和应用前景。本文综述了当前已发现的自转运蛋白的种类、已解析的自转运蛋白的结构及其分泌过程,概述了基于自转运蛋白构建的细菌表面展示系统的优点及其应用情况。; 刘艳如王作镇赵丙春黄建忠朱晓兰邱黎清舒正玉

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福建省科技计划重点项目(2013H0021)

文献类型

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