国家自然科学基金(81060078)
- 作品数：4 被引量：6H指数：2
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- 玻璃体腔注射roscovitine对大鼠视网膜中Cdk5/p25活性和tau蛋白磷酸化的抑制作用被引量：3
- 2015年
- 背景 视网膜色素变性（RP）与阿尔茨海默病有着共同的发病机制,细胞周期依赖性蛋白激酶（Cdk5）活性及其激活剂参与中枢神经系统的退行性病变.Cdk5抑制剂roscovitine可以抑制Cdk5/p25通路的活性,从而抑制细胞凋亡,但其对RP的影响尚不清楚. 目的 探讨玻璃体腔注射roscovitine对RCS大鼠视网膜组织中p35、p25和tau蛋白表达的影响.方法 12只RCS大鼠于出生后17d右眼玻璃体腔注射4 μlroscovitine作为实验眼,左眼未进行任何干预作为对照眼.分别于注射后8d（出生后25 d）和18d（出生后35 d）用过量麻醉法各处死6只大鼠并分离视网膜,Western blot法检测RCS大鼠视网膜组织中Cdk5、p35、p25蛋白的相对表达水平和tau蛋白磷酸化水平,采用分光光度仪（光谱法）测定大鼠视网膜组织340 nm处的吸光度（A）值,定量分析大鼠视网膜中Cdk5/p25激酶活性,采用配对t检验比较实验眼和对照眼的检测结果.结果 玻璃体腔注射后8d和18d,大鼠实验眼视网膜组织中p35蛋白的相对表达水平分别为1.186±0.019和1.069±0.019,明显低于对照眼的1.364±0.016和1.214±0.008,差异均有统计学意义（t=-6.294、-6.477,均P＜0.05）;大鼠实验眼视网膜组织中p25蛋白的相对表达水平分别为0.312±0.009和0.269±0.018,明显低于对照眼的0.595±0.013和0.473±0.011,差异均有统计学意义（t=-36.508、-11.879,均P＜0.05）;实验眼与对照眼间大鼠视网膜中Cdk5蛋白的相对表达水平差异均无统计学意义（t=0.213、-0.540,均P＞0.05）;实验眼大鼠视网膜组织中tau蛋白磷酸化水平均低于对照眼,差异均有统计学意义（t=-9.854、-6.744,均P＜0.05）.玻璃体腔注射后8d和18d,比色定量测定法测得大鼠实验眼视网膜中Cdk5/p25活性分别为（0.003 8±0.000 14）mol/（s·mg）和（0.00201±0.000 11）mol/（s·mg）,明显低于对照眼的（0.005 47±0.000 27） mol/（s·mg）和（0.003 35±0.000 15） mol/（s·mg）,差异�
- 张金金盛迅伦任英华容维宁李慧平刘雅妮
- 关键词：ROSCOVITINERCS大鼠
- 细胞周期依赖性蛋白激酶5抑制剂Roscovitine对皇家外科学院大鼠视网膜光感受器细胞凋亡的影响被引量：1
- 2015年
- 目的 观察细胞周期依赖性蛋白激酶5（Cdk5）抑制剂Roscovtine对皇家外科学院（RCS）大鼠视网膜光感受器细胞凋亡的影响.方法 RCS雄性大鼠30只,随机数字表法随机分为早期干预组、中期干预组、晚期干预组,每组10只.分别于出生后17、25、35 d,给予右眼玻璃体腔注射Cdk5抑制剂Roscovitine 4μl作为实验眼;左眼玻璃体腔注射Roscovitine溶剂二甲基亚砜4μl作为对照眼.早期干预组、中期干预组、晚期干预组大鼠分别于出生后25、35、45 d处死,摘除眼球作视网膜切片,采用苏木精-伊红（HE）染色观察视网膜外核层厚度变化;采用免疫组织化学染色观察Cdk5、p25及活化型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 （cleave-caspase 3）的阳性表达;采用原位末端标记法（TUNEL）检测视网膜凋亡细胞的表达.取视网膜组织,采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠视网膜中Cdk5、p25及cleave-caspase 3的蛋白表达.对Cdk5、p25、cleave-caspase 3阳性表达与凋亡细胞表达两两变量之间行多变量偏相关分析.结果 早期干预组、中期干预组大鼠实验眼外核层厚度均较对照眼厚,且早期干预组实验眼与对照眼外核层 厚度的差异更明显.晚期干预组大鼠实验眼与对照眼的外核层厚度差异不明显.免疫组织化学染色结果显示,早期干预组、中期干预组实验眼外核层Cdk5、p25、cleave-caspase 3阳性表达均较对照眼降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）.晚期干预组实验眼与对照眼外核层Cdk5、p25、cleave-caspase 3阳性表达比较,差异无统计学意义（P＞0.05）.TUNEL检测结果显示,早期干预组、中期干预组大鼠实验眼视网膜外核层凋亡细胞表达较对照眼明显降低;晚期干预组大鼠实验眼与对照眼视网膜外核层凋亡细胞表达差异不明显.多变量偏相关分析结果显示,Cdk5、p25、cleave-caspase 3阳性表达与凋亡细胞表达两两变量之间均呈明显相关性（P＜0
- 任英华邹刚张金金盛迅伦
- 关键词：细胞凋亡
- 细胞周期依赖性蛋白激酶5／P25激酶活性与RCS大鼠视网膜神经细胞凋亡的关系被引量：2
- 2013年
- 背景视网膜色素变性（RP）是眼科常见的遗传性、致盲性眼病，可能与阿尔茨海默病等慢性神经退行性疾病具有共同的病理生理机制，细胞周期依赖性蛋白激酶5（Cdk5）与光感受器细胞及视网膜神经节细胞正常功能的维持相关，可能是引起RP光感受器细胞凋亡的途径，有可能成为新的治疗靶点。目的探讨Cdk5／P25激酶活性在RCS大鼠视网膜神经细胞凋亡中的作用。方法SPF级RCS变性大鼠及RCS—rdy‘正常对照大鼠各18只，按随机数字表法亚分至出生后17、25、35d组，每亚组各6只大鼠。各组大鼠分别在相应时间点直接处死后摘除眼球，并取视网膜组织，以Westernblot法检测大鼠视网膜组织中Cdk5、P35、P25蛋白的表达和tau蛋白磷酸化水平，并利用紫外分光光度计用光谱法测定两组不同Et龄大鼠视网膜组织吸光度（A。）峰值的变化，定量分析各组Cdk5／P25激酶的活性。结果P35蛋白在17日龄的RCS大鼠和RCS—rdy’大鼠的视网膜组织中表达水平（A。）差异无统计学意义（t=0．52，P〉0．05），25日龄和35日龄RCS大鼠视网膜组织中P35蛋白表达水平分别为2．20±0．48、1．23±0．14，明显高于RCS—rdy’大鼠的1．43±O．13和0．93±0．10，差异均有统计学意义（t：3．78、4．28，P〈0．05）；P25蛋白在17日龄的RCS大鼠及RCS—rdy’大鼠的视网膜组织中均未检测到，但在25日龄和35Et龄的RCS大鼠视网膜组织中表达水平（A。）为0．300~0．003、0．230＋0．004，明显高于RCS—rdy’大鼠的0．040±0．004和0．070±0．004，差异均有统计学意义（t=121．81、77．51，P〈0．01）；Cdk5蛋白在各Et龄的RCS大鼠视网膜组织中的表达水平与RCS—rdy’大鼠相比差异均无统计学意义（t=-0．60、0．19、1．62，P〉0．05）；17日龄RCS大鼠和RCS—rdy’大鼠视网膜组织中Cdk5／P25激酶活性差异无统计学意义（t=0．19，P〉0．05），2
- 张金金盛迅伦任英华容维宁李慧平刘雅妮
- 关键词：RCS大鼠视网膜神经细胞P35TAU磷酸化
- 细胞周期蛋白依赖激酶5与皇家外科学院大鼠视网膜色素变性发病过程中细胞凋亡的关系被引量：1
- 2013年
- 目的观察细胞周期蛋白依赖激酶5（Cdk5）和p25在不同病程皇家外科学院（RCS）大鼠视网膜色素变性（RP）模型视网膜中的表达及与细胞凋亡的关系，探讨Cdk5／p25介导的光感受器细胞凋亡在RP发病过程中的作用。方法取RCSRP大鼠（RCS大鼠）及正常对照RCS-rdy＋ 大鼠17、25、35、60日龄视网膜，光学显微镜下观察视网膜结构，测量外核层厚度；利用免疫组织化学染色法观察视网膜中Cdk5、p25和活化型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（cleave-caspase3）的表达和变化；采用Westernblot法测定视网膜中cleave-caspase3的蛋白质水平；原位末端标记（TUNEL）法检测视网膜中凋亡发生的情况，并对凋亡细胞平均吸光度EA，旧称光密度（OD）]值进行统计分析。采用SPSS17．0统计软件处理数据。结果随着出生日龄的增加，RCS大鼠视网膜厚度较RCS-rdy＋大鼠变薄，主要表现为视杆与视锥层和外核层明显变薄。在RCS大鼠17、25、35日龄组，Cdk5、p25和cleave-caspase3的表达逐渐增强，60日龄组表达下降；对照组RCS-rdy＋ 大鼠各日龄组表达无明显变化。Westernblot法检测结果显示，随着出生日龄的增加，RCS大鼠各日龄组视网膜cleave-easpase3的表达明显增加，以35日龄组增加最为明显，而RCS-rdy＋大鼠各日龄组视网膜cleave-caspase3的表达没有明显的变化。TUNEL法检测结果显示，凋亡细胞主要出现在外核层中，在RCS大鼠17、25、35日龄组，各组凋亡细胞呈逐渐增多的趋势，60日龄组凋亡细胞显著下降；RCS-rdy＋各日龄组凋亡细胞没有明显变化。多变量偏相关分析结果显示，Cdk5表达与p25表达、Cdk5表达与cleave-caspase3表达、Cdk5表达与凋亡细胞表达、p25表达与cleave-caspase3表达、p25表达与凋亡细胞表达、cleave-caspase3表达与凋亡细胞表达的偏相关系数分别为0．949、0．808、0．959、0．887、0．979、0．852，P值为0．000，两�
- 任英华盛迅伦张金金容维宁李慧平刘雅妮
- 关键词：视网膜炎色素性细胞凋亡
