国家杰出青年科学基金(30688003)
- 作品数：7 被引量：5H指数：2
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- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程医药卫生更多>>
- Red/ET同源重组系统介导的质粒载体快速构建
- 2013年
- Red/ET重组技术是近年来建立的一种基于高效率体内同源重组的新型遗传工程技术,该技术简便、快速.首先,通过一步融合的方法将链霉素抗性基因和氯霉素抗性基因同时克隆至pUC19上,从而构建出含有正反选择标记的载体pRC;其次,用安普霉素抗性基因或者氯霉素抗性基因替换了常用表达载体pET-28b上的卡那霉素抗性基因,改变了其抗性选择标记,得到的表达载体pMT和pCT可以更广泛地应用于不同宿主中;最后,还将启动和终止表达的区域定点插入pACYC184载体中,使其成为可以独立表达蛋白的表达载体p184.本研究所得到的载体为大肠杆菌宿主菌中的基因克隆和蛋白表达提供了基础.
- 苏春余佳邱荣国唐莉
- 关键词：RED同源重组抗性基因克隆
- 变构菌素生物合成基因簇的研究进展
- 2011年
- 变构菌素是从Streptomyces griseochromogenes菌株中分离得到的第一个高选择性的蛋白磷酸化酶-1(PP-1)抑制剂。变构菌素及其衍生物在神经系统紊乱、代谢综合症、呼吸系统及相关疾病、免疫抑制、肿瘤治疗等诸多领域都有着广泛的应用前景,因而引起了人们对其生物合成途径的研究兴趣。介绍了近年来变构菌素生物合成途径的研究进展。
- 李明唐莉
- 关键词：蛋白磷酸酶生物合成基因簇
- 新型埃博霉素单甲基衍生物抑制人脐静脉内皮细胞增殖及血管新生
- 2012年
- 研究新合成的新型埃博霉素单甲基衍生物对血管新生的影响,以期阐明埃博霉素在肿瘤细胞和血管新生中的效应及其所作用的重要途径,为药物新靶点的开发提供理论依据.首先,以人脐静脉内皮细胞为研究对象,利用MTT法检测细胞增殖,Transwell法检测细胞迁移和侵润,明胶酶谱分析金属基质蛋白酶MMP2的活性,RT-PCR检测MMP2 RNA表达水平;然后以鸡胚绒毛尿囊膜为模型,研究该衍生物对血管新生的影响.结果表明:1)新型埃博霉素单甲基衍生物可以显著抑制人脐静脉内皮细胞HUVEC的增殖、迁移和侵润以及Ⅳ型胶原酶分泌;2)新型埃博霉素单甲基衍生物可以使鸡胚尿囊膜产生明显的无血管区,对血管新生产生明显的抑制作用.结果说明,新型埃博霉素单甲基衍生物可以通过抑制血管内皮细胞的增殖、迁移、侵润以及Ⅳ型胶原酶分泌等显著抑制诱导血管新生过程的步骤,最终抑制血管新生.
- 张洪安凡唐莉邱荣国
- 关键词：增殖金属基质蛋白酶血管新生
- Tautomycetin诱导乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADR的凋亡及其机制被引量：1
- 2012年
- 目的:研究tautomycetin对乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADR增殖及凋亡的影响及其机制。方法:MTT法检测tauto-mycetin对MCF-7/ADR细胞增殖的影响,流式细胞术检测MCF-7/ADR细胞的凋亡,Western blotting法检测tautomycetin对MCF-7/ADR细胞caspase相关蛋白、Bcl-2、Cyto-C、P53蛋白表达和Akt磷酸化的影响。结果:Tautomycetin可剂量(0.01～100μmol/L)依赖性地抑制MCF-7/ADR细胞的增殖(P<0.05),IC50值为(1.26±0.12)μmol/L;与对照组相比,tautomycetin(1μmol/L)可诱导MCF-7/ADR细胞凋亡,早期凋亡比例由(0.67±0.18)%升高至(17.2±3.8)%,晚期凋亡比例由(0.96±0.23)%升高至(28.4±5.7)%(P<0.05)。Tautomycetin可活化MCF-7/ADR细胞中caspase-7和caspase-9,降低Bcl-2蛋白的表达,促进线粒体释放Cyto-C,降低p-Akt的水平,但对caspase-8和P53的表达没有影响。结论:Tautomycetin可阻断Akt活化,以P53非依赖的方式通过Cyto-C介导的通路诱导MCF-7/ADR细胞凋亡。
- 牛铭山孙岩唐莉邱荣国
- 关键词：乳腺癌增殖凋亡CASPASE细胞色素C
- 变构菌素产生菌S.griseochromogenes接合转移体系建立与优化被引量：2
- 2012年
- 以整合型质粒pSET152为出发质粒,建立并优化了变构菌素产生菌Streptomyces griseochromogenes(S.griseochromogenes)与Escherichia coli(E.coli)的属间接合转移体系,确定了适用于变构菌素产生菌灰产色链霉菌的最佳接合转移条件.研究发现Ca2+和甘氨酸都能够提高接合转移的效率,尤其是甘氨酸的效果非常显著.这一工作对于S.griseochromogenes的基因操作、小分子药物生物合成机制的研究以及具有自主知识产权的药物衍生物的开发具有普遍的应用价值.
- 王芬邱荣国唐莉
- 关键词：STREPTOMYCES甘氨酸钙离子
- 变构菌素类似物的分离鉴定及其生物合成机制
- 2013年
- 利用正相色谱、反相色谱法对灰产色链霉菌的发酵副产物进行了分离,采用波谱学方法进行了化合物的结构鉴定;利用生物转化方法对其生物合成途径进行了研究;采用MTT法检测了化合物对HCT-15细胞的抗肿瘤活性.结果表明:从灰产色链霉菌发酵产物中得到了变构菌素的结构类似物A1,A1为全新结构的天然产物.对比变构菌素,A1对HCT15的细胞毒性较差(IC50为70μm),且A1来自于变构菌素的异常生物合成.
- 孔日祥唐莉
- 关键词：分离纯化生物合成
- Fostriecin产生菌Streptomyces pulveraceus遗传转化体系的建立与优化被引量：3
- 2012年
- 【目的】建立并优化链霉菌Fostriecin产生菌Streptomyces pulveraceus的遗传转化系统。【方法】以整合型质粒pSET152为出发质粒,通过供体菌E.coli ET12567/pUZ8002与受体菌Streptomyces pulveraceus进行接合转移。【结果】确定了链霉菌Streptomyces pulveraceus的最佳接合转移条件:培养基为终浓度含15%甘氨酸的MS培养基;孢子热激条件为50°C 10 min;阿伯拉霉素覆盖的时间为18 h,终浓度为20 mg/L。同时,把组成型启动子ermE+与绿色荧光蛋白基因(gfp)克隆到pSET152载体上,通过接合转移整合到该链霉菌中,gfp获得表达。【结论】建立Fostriecin产生菌的遗传转化系统,并发现甘氨酸能显著提高链霉菌的接合转移效率。
- 刘雪娇牛铭山邱荣国唐莉
