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高效稳定表达人缺氧诱导因子抑制因子肠上皮细胞株的建立被引量：1: 2008年; 目的通过转染含有人FIH全长cDNA的质粒pcDNA3.1-V5-His-A-FIH,建立FIH高效表达的肠上皮细胞株。方法对pcDNA3.1-V5-His-A-FIH进行扩增、提取,用脂质体Lipofectamine 2000将pcDNA3.1-V5-His-A-FIH转入Caco-2细胞,经G418筛选并逐步传代,RT-PCR和Western blot法检测阳性细胞克隆FIH mRNA和蛋白表达。结果转染pcDNA3.1-V5-His-A-FIH后Caco-2细胞FIH mRNA是普通Caco-2细胞的1.98倍,而FIH蛋白含量是普通Caco-2细胞的1.70倍。结论成功建立了高效、稳定表达人FIH基因的肠上皮细胞株。; 王裴戚华兵陈传莉刘依凌赵云王凤君; 关键词：肠上皮细胞基因表达

缺氧对肠上皮细胞缺氧诱导因子1α活化影响的实验研究被引量：1: 2008年; 目的了解缺氧对肠上皮细胞缺氧诱导因子1α（HIF-1α）活化的影响。方法将肠上皮细胞分为常氧处理（正常对照）、缺氧（设缺氧1、2、6、12、24h）及缺氧＋寡霉素处理（分别用浓度为5、10、20、40μg／mL寡霉素处理1h，再缺氧6h）。采用蛋白质印迹法检测HIF-1α蛋白表达，免疫荧光法观察HIF-1α向细胞核转位的情况。结果与正常对照（0．08±0．07）相比较，缺氧1h肠上皮细胞HIF-1α蛋白表达（0．52±0．30）即显著升高（P〈0．05），6h达峰值（2．37±1．08，P〈0．05），同时HIF-1α向细胞核转位也明显增加。寡霉素呈剂量依赖性地抑制缺氧引起的肠上皮细胞HIF-1α蛋白表达增加，用5、10、20及40μg／mL寡霉素处理的缺氧肠上皮细胞HIF-1α蛋白表达量分别为1．62±0．96、1．48±0．56、1．08±0．36及0．58±0．11，均较单纯缺氧6h（2．67±1．38）显著降低（P〈0．05），HIF-1α向细胞核转位也被抑制。结论呼吸链抑制剂寡霉素可抑制缺氧肠上皮细胞HIF-1α活化，线粒体呼吸链可能在其发生机制中具有重要作用。; 李牧王裴刘琛陈传莉王凤君; 关键词：缺氧缺氧诱导因子1Α 肠上皮细胞

肌球蛋白轻链激酶介导缺氧后肠上皮屏障功能紊乱的研究被引量：13: 2009年; 目的了解肌球蛋白轻链激酶（MLCK）在缺氧后肠上皮屏障功能损害中的作用。方法建立单层肠上皮细胞缺氧模型，根据缺氧时间不同将细胞分为正常对照组（缺氧0h），缺氧2、6、8、12、24h组，（5-氯萘-1-磺酰）-1-六氢-1，4-双苯妥英钠（ML-9）处理组（缺氧6h并用终浓度为100μmol／L的MLCK特异性抑制剂ML-9处理）。用电阻仪测定单层肠上皮细胞跨细胞电阻（TER）；免疫荧光法检测单层肠上皮细胞紧密连接蛋白ZO-1的变化；蛋白质印迹法检测肠上皮细胞磷酸化肌球蛋白轻链（p-MLC）及MLCK蛋白表达。结果缺氧6、8、12、24h组单层肠上皮细胞TER值分别为（422±17）、（427±27）、（403±40）、（426±22）Q，均低于正常对照组[（451±27）Ω，P〈0．05]，ML-9处理组为（558±110）Ω，显著高于各单纯缺氧组（P〈0．01）。缺氧6h组单层肠上皮细胞紧密连接蛋白ZO-1发生明显改变，主要表现为不规则，出现明显皱褶、圆滑排列程度减弱，甚至有断裂及锯齿等不连续现象。ML-9组肠上皮细胞紧密连接蛋白ZO-1近似于正常对照组，排列较规则，皱褶及锯齿状改变较单纯缺氧组减少或消失。各单纯缺氧组肠上皮细胞MLCK、p-MLC蛋白表达水平均较正常对照组增加。结论MLCK可介导缺氧引起的肠上皮屏障功能紊乱。; 王裴陈传莉李牧王凤君; 关键词：缺氧肌球蛋白轻链肌球蛋白轻链激酶肠上皮细胞

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国家自然科学基金(30670952)

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