国家自然科学基金(81060014)
- 作品数：13 被引量：26H指数：3
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- 固有心脏干细胞与心肌再生的研究进展被引量：4
- 2014年
- 目前干细胞治疗已成为心肌梗死后缺血性心脏病治疗的研究热点。现有多种干细胞,如胚胎干细胞、间充质干细胞等应用于心肌缺血损伤后心肌再生的研究,但由于这些细胞心脏归巢少、心血管再生潜能有限等原因而限制了其广泛应用。传统观点认为心脏为终末分化器官,但是,心脏干细胞(cardiac stem cell,CSC)的发现推翻了这一理论。由于这类固有心脏干细胞的组织特异性和心系细胞特异分化的特点,CSC可能成为心血管病细胞治疗的最佳选择。
- 曹桎铭石蓓
- 关键词：干细胞心肌再生心血管病
- 高迁移率族蛋白B1修饰间充质干细胞对球囊损伤大鼠颈动脉的保护效应被引量：1
- 2013年
- 目的探讨高迁移率族蛋白B1(high mobility group box1,HMGB1)修饰间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)对球囊损伤大鼠颈动脉的作用及分子机制。方法 HMGB1重组腺病毒(ad5GFP-HMGB1)转染MSC后,实时定量PCR、Western blot和免疫组化法检测MSC中HMGB1、血管内皮生长因子(VEGF)、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达水平。构建球囊损伤大鼠颈动脉模型,Evans Blue染色评价损伤血管再内皮化;ELISA检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和C反应蛋白(CRP)水平。结果与对照组和空载ad5GFP组比较,HMGB1修饰增加MSC中VEGF和PCNA的mRNA和蛋白表达水平(P均<0.05)。Evans Blue染色显示,与对照组(11.35±2.25)和空载ad5GFP组(36.78±3.75)比较,ad5GFP-HMGB1组(47.66±9.11)损伤血管再内皮化面积明显增加,差异均具有统计学意义(P均<0.01)。ELISA结果显示,HMGB1修饰MSC能降低颈动脉损伤大鼠血清中TNF-α和CRP的表达水平(P均<0.05)。结论 HMGB1修饰MSC对大鼠颈动脉损伤具有保护效应,其机制可能与上调VEGF和PCNA表达及抑制炎症反应有关。HMGB1可能是MSC修复内皮过程中的一个新的治疗靶点。
- 陈攀科石蓓许官学刘志江王正龙马帅赵红彦
- 关键词：间充质干细胞炎症血管损伤
- 腺病毒载体介导hRAMP1调节兔颈动脉球囊损伤后炎症细胞因子表达对增生内膜的影响
- 2012年
- 目的探讨腺病毒载体介导人受体活性修饰蛋白-1(receptor activity modifying protein-1,hRAMP1)基因对兔颈动脉粥样硬化并球囊成形术后炎性细胞因子表达的影响。方法建立兔动脉粥样硬化狭窄模型并行球囊损伤血管(简称血管成形术),随机抽样分为RAMP1组(n=18)和对照组(n=18),经球囊局部注射携带hRAMP1基因腺病毒载体(pAd2-GFP-RAMP1)或PBS,于注射后7、14 d和28 d,应用ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和C-反应蛋白(CRP)表达水平;Western blot检测局部hRAMP1目的基因表达;免疫组织化学染色测定血管局部TNF-α表达,HE染色检测血管形态学。结果血管成形术后不同时间点TNF-α表达增加[7 d:(74.13±4.99),14 d:(93.40±6.69),28 d:(67.46±6.57)],外源hRAMP1注射后TNF-α表达下降[7 d:(64.95±6.77),14 d:(75.29±4.73),28 d:(45.08±5.00),P<0.05],病毒注射后7 d和14 d RAMP1组CRP水平[7 d:(29.27±1.57),14 d:(9.68±1.60)]与对照组比较[7 d:(43.96±7.88),14 d:(13.51±1.68)]显著下降(P<0.05),28 d 2组间无差异性;腺病毒注射后28 d损伤血管局部仍检测到hRAMP1蛋白表达,同时RAMP1组局部TNF-α表达与对照组比较明显下降,HE染色显示:RAMP1组新生内膜面积[7 d:(0.07±0.18),14 d:(0.15±0.05),28 d:(0.35±0.05)]与对照组[7 d:(0.14±0.02),14 d:(0.39±0.09),28 d:(0.56±0.05]比较明显降低(P<0.05)。结论外源hRAMP1基因调节兔动脉粥样硬化并血管成形术后CRP和TNF-α的表达,抑制血管成形术后再狭窄。
- 龙仙萍石蓓赵然尊许官学崔璨喻田
- 关键词：炎症细胞因子血管成形术
- CGRP修饰大鼠MSCs对血管平滑肌细胞增殖及表型转化的影响被引量：3
- 2013年
- 目的:探讨降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)修饰的大鼠间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)在体外对大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖和表型转化的影响及其机制。方法:分离、培养及鉴定大鼠MSCs和VSMCs。CGRP重组慢病毒(Lv-CGRP-EGFP)转染MSCs后,real-time PCR和ELISA法检测MSCs中CGRP的表达。MSCs-CGRP与VSMCs共培养后MTT、台盼蓝染色及划痕实验评价VSMCs增殖、迁移能力及细胞存活率。Western blotting法检测VSMCs中α-平滑肌肌动蛋白(alphasmooth muscle actin,α-SMA)和骨桥蛋白(osteopontin,OPN)的表达水平。结果:与MSCs组和空载病毒转染组(MSCs-EGFP)比较,CGRP修饰的MSCs(MSCs-CGRP组)中CGRP的mRNA和蛋白表达水平增高(均P<0.01)。MTT法和划痕实验显示,与MSCs组和MSCs-EGFP组比较,MSCs-CGRP组中VSMCs的增殖和迁移能力明显减弱(P<0.05),而且台盼蓝染色显示,各组细胞存活率均大于90%。Western blotting结果显示,与MSCs-CGRP共培养的VSMCs中α-SMA较MSCs组和MSCs-EGFP组表达增加,OPN的表达减少(均P<0.05)。结论:CGRP修饰的MSCs能分泌CGRP蛋白,并且能抑制VSMCs的增殖和迁移,其机制可能通过抑制VSMCs的表型从收缩表型向合成表型转化有关。
- 陈攀科石蓓龙仙萍刘志江王正龙王冬梅
- 关键词：降钙素基因相关肽血管平滑肌细胞
- 慢病毒载体介导CGRP基因体外转染及对MSC生物学特性的影响被引量：3
- 2015年
- 目的探讨慢病毒载体介导降钙素基因相关肽(CGRP)基因体外转染间充质干细胞(MSC)及其对MSC生物学特性的影响。方法大鼠MSC进行分离、培养及鉴定。CGRP重组慢病毒转染MSC后,采用荧光显微镜和流式细胞技术测定其转染率。实时定量PCR、免疫荧光细胞化学及ELISA法检测MSC中CGRP的表达。慢病毒转染后通过MTT、β-半乳糖苷酶染色和诱导分化评价MSC的增殖、衰老及分化能力。结果慢病毒载体介导CGRP基因转染MSC后48h可稳定表达,MOI=30时,转染率达80%以上。与MSC组和空载病毒转染(MSC-EGFP组)比较,CGRP修饰的MSC(MSC-CGRP组)中CGRP的mRNA和蛋白表达水平增高(均P<0.01)。MTT、β-半乳糖苷酶染色和诱导分化结果显示,病毒转染后对MSC增殖、衰老及向内皮分化基本没有影响。结论 MSC是一种理想的基因载体细胞,可作为CGRP基因转染的靶细胞用于基因治疗,为后续体内、体外实验奠定基础。
- 陈攀科石蓓许官学刘志江龙仙萍张巍马帅
- 关键词：降钙素基因相关肽转染生物学特性
- 转染hRAMP1的间充质干细胞对心肌梗死后局部血管再生的作用
- 2012年
- 目的探讨腺病毒介导hRAMP1基因转染间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)移植对心肌梗死后新生血管生成及其可能机制。方法密度梯度离心并贴壁培养获得兔骨髓MSCs,并分别转染pAd2-hRAMP1或pAd2-EGFP后给予CGRP刺激,ELISA法测定细胞培养上清液中VEGF和HGF水平。建立心肌梗死再灌注兔模型,采用随机数字表法分为MSChRAMP1组(pAd2-hRAMP1转染MSCs移植)、MSCnull组(pAd2-EGFP转染MSCs移植)组和对照组(等量生理盐水注射)(n=10)。2周时Western blot检测心肌梗死组织促血管生长因子VEGF和HGF蛋白表达;4周时TTC染色测定心肌梗死面积比;抗CD31免疫组化染色检测心肌梗死区及梗死周边区新生毛细血管密度。结果 CGRP诱导72 h后MSChRAMP1培养上清液中VEGF和HGF水平显著高于MSCnull组[VEGF:(1 859.4±267.4)vs(1 344.4±137.2);(1 052.2±239.3)vs(683.8±150.5)pg/ml,P<0.05]。细胞移植后4周TTC染色检测显示MSChRAMP1组心肌梗死面积显著降低对照组和MSCnull组[(10.1±2.9)%vs(30.6±2.7)%和(22.5±3.2)%,P<0.05];抗CD31免疫组化染色显示,MSChRAMP1组的梗死区和梗死交界区新生毛细血管计数明显高于对照组和MSCnull组(P<0.05);Western blot检测显示细胞移植后2周MSChRAMP1组心肌梗死区促血管生长因子VEGF和HGF蛋白表达显著高于对照组和MSCnull组(P<0.05)。结论MSChRAMP1能通过提高梗死区心肌组织中促血管生长因子VEGF和HGF的表达,促进心肌梗死区和梗死交界区新生毛细血管生成,降低心肌梗死面积。
- 赵然尊龙仙萍刘志江王冬梅石蓓
- 关键词：间充质干细胞心肌梗死再血管化
- hRAMP1修饰的骨髓间充质干细胞移植对兔球囊损伤血管再狭窄及心功能的影响被引量：7
- 2012年
- 目的观察受体活性修饰蛋白1（hRAMP1）修饰的骨髓间充质干细胞（MSC）移植对血管再狭窄及心肌梗死后兔心功能的影响及其基因修饰MSC治疗的安全性。方法建立兔心肌梗死早期再灌注模型并行右侧颈动脉球囊损伤（简称双模型），携带增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的腺病毒转染MSC，实验按数字随机分为hRAMP1转染MSC移植组（hRAMP1-MSC组，n,=24），空病毒转染MSC移植组（MSC组，n=24）和PBS移植对照组（对照组，n=24）组，细胞移植后28d免疫荧光检测心肌和血管组织MSC归巢和分化及存活情况，免疫组织化学检测心肌血小板-内皮细胞黏附分子（CD31）及血管α-平滑肌抗体（α-SMA）和增殖细胞核抗原表达（PCNA），HE染色对心肌和血管组织形态学检测，TTC检测心肌梗死面积，超声心动图测定心功能。结果细胞移植28d，损伤血管内膜有EGFP标记的MSC，EGFP表达位置检测到CD31表达，并沿损伤内膜分布，对照组无EGFP表达；与对照组比较，hRAMP1-MSC和MSC组新生内膜面积（0．15±0．05和0．33±0．08比0．77±0．11）与新生内膜和中膜面积比（0．24±0．07和0．51±0．12比1．09±0．23）均明显低（均P〈0．05），尤以hRAMP1-MSC组显著（均P〈0．05）；损伤血管增生内膜细胞α-SMA表达阳性，PCNA表达率在对照组最高，MSC组次之，hRAMP1-MSC组最低（0．627±0．049、0．366±0．013和0．120±O．028，均P〈0．05）。与对照组比较，细胞移植后28dhRAMP1-MSC组和MSC组梗死交界区毛细血管密度增加（44．2±3．8和22．3±1．7比9．3±3．6，均P〈0．05）；心功能均得到改善（射血分数：60．6％±1．5％和50．8％±3．2％比38．2％±2．O％，均P〈0．05）；心肌梗死面积缩小（20．7％±1．4％和33．2％±3．7％比35．6％±2．7％，均P〈0．05），尤以hRAMP1-MSC组显著。结论hRAMP1基因修饰MSC较单纯MSC移植更能改善梗死后心脏�
- 龙仙萍赵然尊石蓓许官学沈长银
- 关键词：间质干细胞肌细胞平滑肌
- 兔心肌梗死再灌注和血管损伤双模型的建立与评价被引量：1
- 2013年
- 目的制作兔心肌梗死再灌注和血管损伤双模型,为同步研究心肌梗死后心肌重塑和血管重塑提供可行的动物模型。方法选用新西兰大白兔45只,随机分成2组:对照组(n=5)和模型组(n=40)。模型组用高脂饲料饲养建立动脉粥样硬化模型,然后制备心肌梗死再灌注和颈动脉球囊损伤双模型。采用心电图、心肌标志物和组织病理学评价心肌梗死再灌注模型;采用组织病理学评价颈动脉球囊损伤模型。结果心肌标志物升高并随时间变化呈动态演变,而且心肌随时间变化呈凝固性坏死到纤维疤痕改变;右颈总动脉球囊损伤后内膜增生。结论心肌梗死再灌注和血管损伤双模型的建立具有可行性。
- 王正龙刘志江赵然尊郭艳石蓓
- 关键词：心肌梗死再灌注血管损伤
- 大鼠CGRP基因重组慢病毒载体的构建及滴度测定
- 2013年
- 目的构建含大鼠降钙素相关基因肽(CGRP)基因的慢病毒表达载体,为后续转染目的细胞并研究CGRP的功能奠定基础。方法通过基因工程技术将CGRP基因克隆到穿梭质粒中,构建Puc57-CGRP质粒,用双酶切法构建慢病毒表达载体(pLenO-DCE-CGRP),将该质粒载体与4种辅助包装质粒共转染293T细胞,转染的293T细胞继续培养48h后,收集其上清液,浓缩得到高滴度的慢病毒液,然后采用倍比稀释法和流式细胞术检测病毒滴度,并通过实时定量聚合酶链反应(PCR)检测293T细胞中CGRP基因的表达。结果成功构建了pLenO-DCE-CGRP的重组慢病毒载体,滴度为5.1×108TU/mL。结论成功构建了含CGRP基因高滴度的慢病毒载体,为后续转染间充质干细胞(MSC)并研究CGRP的功能奠定了基础。
- 陈攀科石蓓许官学刘志江王冬梅
- 关键词：降钙素基因相关肽慢病毒属
- 慢病毒介导的降钙素基因相关肽转染对大鼠骨髓间充质干细胞内皮分化的影响被引量：4
- 2013年
- 目的:研究慢病毒介导的降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)基因转染对大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)内皮分化功能的影响。方法:用密度梯度离心结合贴壁法培养大鼠骨髓MSCs,携带CGRP的慢病毒载体转染MSCs,未转染MSCs作为对照,应用ELISA法检测CGRP蛋白表达;实验分为转染Lenti-CGRP的MSCs(CGRP)组、转染Lenti-CGRP的MSCs+CGRP受体拮抗剂(CGRP8-37)组(CGRP+CGRP8-37)及未经转染的对照组。应用免疫细胞化学检测细胞CD31和Ⅷ因子相关抗原的表达以鉴定其分化能力;细胞计数法观察转染CGRP后MSCs增殖的影响;Matrigel实验观察转染CGRP对MSCs形成管腔样结构能力的影响。结果:MSCs转染CGRP基因经诱导分化后的CD31和Ⅷ因子相关抗原阳性细胞数量增多,与对照组相比有显著差异(P<0.05);转染CGRP组细胞数量增长较快,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);Matrigel实验显示转染CGRP组细胞微血管新生明显,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。而CGRP+CGRP8-37组上述作用明显被抑制。结论:转染CGRP基因能促进MSCs向内皮分化,并能促进内皮细胞增殖,在一定的条件下,可促进微血管新生。
- 龙仙萍汪松赵然尊石蓓敖竹君
- 关键词：降钙素基因相关肽骨髓间充质干细胞转染内皮分化血管生成
