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内耳间隙连接和连接蛋白基因家族与遗传性聋被引量：3: 2005年; 耳蜗有非感觉上皮细胞和结缔组织细胞2套间隙连接系统,内耳前庭的感觉上皮也有间隙连接。已发现在内耳表达的连接蛋白有Cx26、Cx30、Cx31、Cx32、Cx43和Cx45。连接蛋白是同一基因家族编码,其中GJB2(Cx26)、GJB3(Cx31)、GJB6(Cx30)、GJA1(Cx43)、GJB1(Cx32)都与遗传性聋有关。GJB2基因敲除小鼠在胚胎期致死。GJB3敲除小鼠60%在胚胎死亡,成活小鼠无耳聋和皮肤疾病等表型。GJA1裸鼠表现心脏发育缺陷与膜内和软骨内成骨延迟。GJB1敲除小鼠表型无明显异常,但外周神经表现脱髓鞘改变。不同间隙连接的缺陷导致听力下降的机制可能不同。间隙连接与耳聋关系的深入研究,可能有助于阐明听觉和耳聋的部分机制。; 肖自安谢鼎华; 关键词：连接蛋白

浆膜蛋白RTN1和RTN4基因在小鼠内耳的表达被引量：2: 2005年; 目的探讨浆膜蛋白RTN1和RTN4基因在小鼠内耳的表达。方法采用5只成年小鼠内耳组织提取总RNA,逆转录后获得小鼠内耳细胞cDNA,根据RTN1和RTN4基因编码区序列设计的引物进行PCR扩增,通过PCR产物分析和DNA测序确定RTN1和RTN4是否在小鼠内耳细胞表达。结果采用小鼠内耳组织总RNA,RT-PCR扩增出RTN1和RTN4基因部分编码区,扩增产物测序证实小鼠内耳中有RTN1和RTN4基因的表达。结论RTN1和RTN4基因在内耳有表达,为RTN1和RTN4与连接蛋白26(connexin26)蛋白的互作关系提供了进一步的证据。浆膜蛋白RTN1和RTN4可能与连接蛋白26在听觉生理中起作用。; 胡鹏谢鼎华肖自安伍伟景陈勇夏昆; 关键词：逆转录聚合酶链反应信使RNA 内耳

非综合征性语前聋人群中α-盖膜蛋白基因突变检测被引量：1: 2004年; 目的　探讨中国人非综合征性语前聋患者α -盖膜蛋白基因突变频率和特性。方法　收集非综合征性语前聋家系 34个 ,大部分来自湖南地区 ,共计 6 5例 ,散发患者 31例 ,健康对照组 10 0例。聚合酶链反应扩增α -盖膜蛋白基因的部分外显子 ,单链构象多态分析初筛可疑突变者 ,发现异常构象带后再行DNA测序。结果　在α-盖膜蛋白基因 9号和 18号外显子的SSCP检测中发现多个患者有异常构象带 ,测序证实为多态性改变。未发现导致非综合征性语前聋的突变。结论　目前在国人非综合征性语前聋患者中尚未检测到α -盖膜蛋白基因的致聋突变。; 胡鹏谢鼎华肖自安伍伟景葛圣雷胡正茂夏昆辉; 关键词：基因突变语前聋

小鼠螺旋神经节细胞电压依赖性钙通道亚单位分析被引量：5: 2004年; 目的分析小鼠螺旋神经节细胞电压依赖性钙通道亚单位的类型。方法手术分离新生小鼠的耳蜗螺旋神经节细胞进行培养,24 h后提取RNA。逆转录后获得螺旋神经节细胞cDNA,根据电压依赖性钙通道7种亚单位序列设计的引物进行聚合酶链反应扩增,通过聚合酶链反应结果分析和DNA测序确定螺旋神经节细胞表达的亚单位类型。结果逆转录聚合酶链反应扩增出α1D、α1E、α2/δ、β1和β3亚单位的片段,测序进一步证明小鼠螺旋神经节细胞中有这几种亚单位的存在。结论小鼠螺旋神经节细胞中有α1D、α1E、α2/δ、β1和β3亚单位的表达。α1D和α1E亚单位的共表达证明在哺乳动物的螺旋神经节细胞中有L型和R型电压依赖性钙通道。; 胡鹏谢鼎华肖自安伍伟景陈勇夏昆; 关键词：小鼠螺旋神经节细胞电压依赖性钙通道亚单位逆转录聚合酶链反应耳蜗

连接蛋白基因一个新致聋突变体p.Y155X及功能分析被引量：7: 2010年; 目的观察连接蛋白（connexin 26,CX26）基因的一个新致聋突变c.465T→A,P.Y155X,在体外表达细胞功能的改变,以探讨其致聋的可能机理.方法常染色体隐性遗传耳聋家系的先证者外周血抽提DNA,DNA直接测序法分析CX26基因突变.将在该家系发现的突变c.465T→A,P.Y155X和野生型CX26（wtCX26）定向克隆到pEGFP-N1质粒,构建CX26 p.Y155X-EGFP及wtCX26-EGFP融合蛋白表达载体,转染HeLa细胞,Western印迹分析蛋白的表达,共聚焦显微镜观察突变蛋白和野生型CX26在HeLa细胞的定位及有无间隙连接斑形成,染料转移实验分析间隙连接的功能.结果在该耳聋家系发现CX26基因一个新的致聋突变：c.465T→A,P.Y155X.CX26 P.Y155X突变体在HeLa细胞表达的突变蛋白的分子量小于野生型蛋白分子量;突变蛋白在细胞质表达,不能分布到细胞膜和形成间隙连接,无染料转移.野生型表达于细胞膜并形成间隙连接斑,能转移染料.结论 CX26 P.Y155X突变体在翻译后不能从细胞内转运到细胞膜,不能形成间隙连接通道.CX26基因c.465T→A,P.Y155X导致常染色体隐性遗传性聋.; 杨中纯肖自安谢鼎华夏昆; 关键词：连接蛋白基因突变耳聋

Feasibility study of marrow stromal cells transplantation into guinea pig cochlea被引量：1: 2005年; Objective This pilot-study was designed to evaluate the feasibility of cell transplantation into guinea pig cochlea. Methods Marrow stromal cells were labeled with DAPI, and then implanted into the cochlea of guinea pig.The existence and differentiation trend were observed roughly two weeks later by histologic analysis. Results Transplant-derived marrow stem cells survived in cochlea two weeks later with a trend of attaching to cochlear architecture but not differentiate into neuron. Conclusions Transplant-derived marrow stem cells can survive in cochlea,and cell transplantation may be a useful strategy in inner ear diseases.; GE Sheng-lei XIE Ding-hua CHEN Zhu-chu XIAO Zhi-qiang YANG Xin-min; 关键词：CELL TRANSPLANTATION CELL NEUROTROPHIN NEUROFILAMENT

基因芯片联合DNA测序法在大前庭水管综合征患者基因诊断中的应用被引量：8: 2011年; 目的应用基因芯片联合DNA测序法对大前庭水管综合征患者进行基因突变检测,分析中国人患者的基因型及探讨其基因诊断策略。方法采集30例大前庭水管综合征患者的外周血,提取基因组DNA。耳聋基因芯片筛查SLC26A4基因的2个突变ⅣS7-2A>G和H723R,发现纯合突变或复合杂合突变即停止筛查。如未发现突变或发现单纯杂合突变则采用DNA测序法检测SLC26A4基因其余外显子,直至发现另一个突变。如仍未发现突变则检测FOXI1基因。结果在30例大前庭水管综合征患者中,基因芯片法联合DNA测序法共检出28例有SLC26A4基因突变(93.33%)。共发现16种突变类型,其中ⅣS7-2A>G突变的发生率最高,其次为H723R。新发现4种突变类型(G368X、ⅣS8-1G>T、ⅣS13+9C>T和Q696X),未发现FOXI1基因突变。结论在中国人大前庭水管综合征患者中,SLC26A4基因的ⅣS7-2A>G突变的发生率最高,其次为H723R。针对这两个突变热点的基因芯片适用于对中国人群进行SLC26A4基因突变的筛查。发现的4例新突变类型对大前庭水管综合征的病因研究和基因诊断具有重要意义。; 朱发梅胡鹏赖若沙谢鼎华; 关键词：前庭水管基因基因芯片

Stathmin基因在喉鳞状细胞癌中的表达及临床意义被引量：9: 2008年; 目的观察stathmin基因和蛋白质在喉鳞状细胞癌（简称鳞癌）中的表达情况，探讨stathmin基因与喉鳞癌生物学行为的关系及临床意义，进一步认识喉鳞癌发生和发展的分子机制。方法选取2005年3月至2006年4月的38例喉鳞癌患者，术中从肿瘤中心部位取癌组织（实验组），在肿瘤边缘外1．0cm部位取癌旁正常组织（对照组）。应用半定量逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）分析38例患者的喉鳞癌组织和癌旁正常组织中stathmin基因mRNA的表达水平，冰冻切片免疫组织化学方法检测喉鳞癌组织和癌旁正常组织中stathmin蛋白的表达情况。结果RT-PCR结果显示，stathmin基因mRNA在38例喉癌患者的喉癌组织和癌旁正常组织均呈阳性表达；经半定量分析，stathminmRNA在喉癌组织中的表达水平明显高于在癌旁正常组织的表达水平（t=9.655，P〈0．05）。免疫组织化学发现，stathmin蛋白在26例（26／38，68．4％）患者的喉癌组织呈阳性表达，在13例（13／38，34．2％）患者的癌旁正常组织呈弱阳性表达；stathmin蛋白在喉癌组织中的阳性表达率明显高于在癌旁正常组织的阳性表达率（X^2=8．901，P〈0．05）。同时发现，stathmin mRNA的表达水平和stathmin蛋白的阳性表达率在Ⅲ期和Ⅳ期喉癌组明显高于Ⅰ期和Ⅱ期病例组（t=6．284，）（X^2=5.810，P〈0.05），有颈部淋巴转移组明显高于无转移组（t=9．350,X^2=6．923，P〈0.05）。结论stathmin基因和蛋白在喉鳞癌中的表达明显高于癌旁正常组织，在中晚期喉鳞癌中的表达明显高于早期喉鳞癌，并且与颈淋巴转移有关。stathmin基因与喉鳞癌的发生和发展均有密切关系，并可能与喉癌的预后有关。; 张才云肖自安曾益慈杨新明谢鼎华夏昆刘伏友黄伯云; 关键词：喉肿瘤鳞状细胞免疫组织化学

连接蛋白26与神经内分泌特异蛋白的羧基端相互作用被引量：1: 2004年; 目的 :应用酵母双杂交技术筛选和鉴定连接蛋白 2 6 (connexin 2 6 ,Cx2 6 )的相互作用蛋白质。方法 :以正常人DNA为模板 ,PCR扩增Cx2 6 (GJB2 )全长编码区作为诱饵 ,基因重组法定向克隆到第 3代MatchMakerGal4双杂交系统的 pGBKT7质粒 ,用构建的pGBKT7 Cx2 6质粒筛选人胎脑cDNA文库 ,获得的阳性克隆的插入子为Cx2 6的相互作用蛋白质 (猎物 ) ,将Cx2 6和筛选到的相互作用蛋白再一对一回复进行酵母双杂交实验 ,去除假阳性。对阳性克隆插入子的DNA序列进行测序 ,在GenBank中作匹配及生物信息学分析。结果 :1个阳性克隆的插入子与神经内分泌特异蛋白 (neuroendocrinespecificprotein ,NSP)羧基端的 1 4 5个氨基酸残基序列一致 ,阅读框无移位。结论 :Cx2 6与NSP的羧基端具有相互作用 ,NSP可能在Cx2 6蛋白的转运。; 肖自安谢鼎华黄亮群施小六夏昆杨曙夏家辉; 关键词：连接蛋白胎脑人胎阳性克隆

遗传性聋基因研究——进展和未来应用被引量：1: 2004年; 肖自安谢鼎华; 关键词：遗传性聋病原学非综合征性聋病因学基因定位

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