国家自然科学基金(30800442)
- 作品数：6 被引量：30H指数：4
- 相关作者：张翠萍付小兵孙同柱陈鹏费阳更多>>
- 相关机构：中国人民解放军总医院第一附属医院中国人民解放军总医院军事医学科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 去分化来源表皮干细胞的分离、培养和鉴定被引量：3
- 2010年
- 目的 分离培养去分化来源的表皮十细胞（dedifferentiation-derived epidermal stem cells,DDESCs）,并进一步观察其表型特征.方法 包皮皮片去除皮下脂肪后,中性蛋白酶消化过夜,分离表皮和真皮.分离的表皮片用Ⅳ型胶原反复粘贴并冲洗去除表皮十细胞后,移植到BALB/c裸鼠背部全层皮肤缺损创面,移植5 d后收集皮片制备单细胞悬液,流式检测CK10、CK19和β1整合素阳性细胞白分数,然后用Ⅳ型胶原粘贴法分离皮片内DDESCs,并采用免疫荧光法和荧光定量PCR法分别检测去分化细胞内CK19、β1整合素、Oct4和Nanog的表达.结果 流式检测结果表明,皮片移植5 d后,CK10阳性细胞减少（P＜0.01）,CK19和β1整合素阳性细胞增加（P＜0.01）.Ⅳ型胶原粘贴分离DDESCs,结果表明,移植皮片组在10 min内约有4.56%的贴壁细胞出现.细胞的表型分析结果表明,DDESCs内CK19、β1整合素、Oct4和Nanog的表达量类似于原始表皮干细胞（P＞0.05）,但明显高于成熟表皮细胞（P＜0.01）.结论 DDESCs的表型特征与原始表皮干细胞相类似,提示去分化细胞有可能代替原始表皮干细胞应用于创伤部位的修复和再生.
- 张翠萍付小兵陈鹏孙同柱
- 关键词：表皮干细胞去分化细胞分离表型
- Wnt信号通路在创伤微环境诱导的表皮细胞去分化过程中的作用被引量：8
- 2009年
- 目的研究创伤微环境对表皮细胞的去分化诱导作用，并探讨Wnt通路在这一过程中的作用。方法包皮皮片去除皮下脂肪后，中性蛋白酶消化过夜，分离表皮和真皮。分离的表皮片用Ⅳ型胶原反复粘贴并冲洗去除表皮干细胞。处理后的表皮片经免疫组化鉴定后移植到BALB／c裸鼠背部全层皮肤缺损创面，5d后用免疫组化法检测皮片内细胞的表型特征，RT—PCR和Western blot检测表皮细胞表型转化过程中Wnts分子及下游分子的表达变化。结果未经处理的表皮片基底部细胞呈CK10染色阴性，CK19和β1整合素染色阳性；Ⅳ型胶原处理后的表皮片内细胞全呈CK10染色阳性。而去基底皮片移植后5d，在皮片的基底侧重新出现CK10染色阴性、CK19和β1整合素染色阳性的细胞。同时在移植皮片内Wnt-10b、Wnt-4和Wnt-7a mR—NA的表达分别增加了3．1倍、2．2倍和1．4倍，而Wnt通路下游β-catenin、cyclin D1和c—myc蛋白表达分别增加了3倍、1．5倍和2倍（P〈0．01）。结论创伤微环境可诱导表皮细胞去分化，Wnt／β-catenin信号通路可能在这一过程中起关键性的调控作用。
- 张翠萍付小兵孙同柱
- 关键词：表皮去分化WNT/Β-CATENIN信号通路
- ERK与NF-κB信号通路在汗腺发育过程中作用的研究进展被引量：4
- 2009年
- 大面积深度烧伤形成的瘢痕组织往往导致患者汗腺等皮肤附属器受损或丧失，从而影响患者的生存质量。因此，汗腺重建研究具有重大的临床意义。汗腺细胞的分化、增殖和结构的形成受多种细胞外基质成分、调控因子、作用蛋白和信号通路的调控，迄今为止人们仍未能在体外建立功能完全的汗腺组织。因此，如何从汗腺发生的角度来实现汗腺的重建成为当前创伤修复研究的重要课题。研究证实胞外信号调节激酶（ERK）信号通路与核转录因子-κB（NF-κB）信号通路在汗腺发生和发育过程中具有重要作用，现就以上两条通路的研究进展综述如下。
- 艾丽李秀霞张翠萍
- 关键词：汗腺细胞发育过程ERK胞外信号调节激酶大面积深度烧伤细胞外基质成分
- Wnt/β-catenin信号通路活化对人表皮细胞表型变化的影响被引量：6
- 2010年
- 目的探讨Wnt/β-catenin信号通路活化对人表皮细胞表型变化的影响。方法差速贴壁法分离人成熟表皮细胞。并将细胞分为对照组和诱导组,诱导组又分为氯化锂(LiCl,20mmol/L)诱导组和GSK-3β抑制子(15μmol/L)诱导组,诱导6d后观察细胞的形态变化,并采用Westernblot检测表皮细胞内β-catenin的表达水平,免疫组织化学法检测表皮细胞表面标志性蛋白CK10、CK14、CK19和β1整合素的表达变化。结果人表皮细胞内β-catenin的表达在被LiCl(2.15±0.54)和GSK-3β(2.58±0.65)抑制子诱导后分别比对照组(0.71±0.23)增加了2倍和2.5倍(P<0.01)。而且诱导后细胞体积变小变圆,细胞核、细胞质比例变大。免疫组织化学检测结果表明,诱导前表皮细胞高表达CK10,部分细胞表达CK14,CK19和β1整合素表达阴性;诱导后已无CK10阳性细胞存在,有部分CK14阳性细胞,而且CK19和β1整合素的表达呈强阳性。结论 Wnt/β-catenin通路活化可引起人成熟表皮细胞的去分化,即Wnt/β-catenin通路可能是调控人表皮细胞去分化的关键环节。
- 张翠萍陈鹏付小兵孙同柱
- 关键词：表皮细胞表型特征去分化
- 不同来源的表皮干细胞促进皮肤创面愈合的研究被引量：7
- 2011年
- 目的 观察表皮干细胞（ESCs）及去分化来源的表皮干细胞（DESCs）对皮肤创面愈合的促进作用及其异同.方法 由新鲜人包皮标本以贴壁法分离ESCs,随机分为3组,第1组作为原代ESCs：第2组传代培养至第6代时可见细胞成熟呈表皮细胞（ECs）形态,由原来的大克隆生长的小圆细胞形态变为较为肥大的不规则型细胞,无法形成克隆样增殖;其细胞表型也由β1整合素、CK19强阳性、CK10阴性变为β1整合素、CK19阴性,而CK10强阳性,予以100μg/L的碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）培养48 h进行去分化诱导,48 h后ECs周边开始出现小圆细胞并呈克隆样生长,β1整合素、CK19、CK10等细胞表型也趋于与ESCs一致,即DESCs;第3组传代培养至第6代获得ECs.3组细胞皆以D-Hanks液重悬调其终质量浓度为2×106个/ml.将12只裸鼠每只背部左右各制备1个直径6 mm创面,共24个创面.将全部创面随机等分为4组,每组6个,分别以ESCs、DESCs、Ecs及生理盐水（NS）各0.2 ml进行创面注射.于术后0、3、7 d测量创面面积进行统计学分析,并于术后7 d行创面取材苏木素-伊红（HE）染色.结果 ESCs组与DESCs组在术后3 d时创面面积分别为（11.758±2.544）、（11.515±1.351）mm2,7 d时创面面积分别为（1.795±1.063）、（2.043±1.138）mm2,修复速度要明显快于ECs组与NS组[3 d时创面面积分别为（17.857±1.722）、（16.192±2.256）mm2,7 d时创面面积分别为（5.367±1.219）、（5.070±1.357）mm2,P＜0.01];而ESCs与DESCs组之间创面修复速度比较差异无统计学意义（P＞0.05）;ECs组与NS组之间比较差异无统计学意义（P＞0.05）.HE染色提示ESCs组与DESCs组的创面愈合质量优于ECs组与NS组,可见有皮肤附属腺的再生且纤维瘢痕组织较少.结论 ESCs与DESCs皆有促进创面愈合的作用,相互之间无明显差异.
- 费阳张翠萍付小兵
- 关键词：表皮干细胞去分化创面愈合
- 低氧诱导因子-1的病毒载体制备及感染效果被引量：2
- 2008年
- 目的制备低氧诱导因子（HIF）-1腺病毒载体并评价其对表皮角质细胞的感染效果。方法Ad／HIF-1质粒经酶切鉴定后，以4μg质粒转染1．2×10^6个HEK293细胞，2d后荧光显微镜下观察转染效率。1周后收集细胞及上清并感染HEK293细胞进行病毒扩增，待扩增的细胞及上清量达300ml时进行病毒纯化及滴度测定。最后用制备的病毒载体感染表皮角质细胞，流式测定其感染效果。结果Ad／HIF-1质粒酶切鉴定正确；转染或感染HEK293细胞后有绿色荧光蛋白（GFP）表达；获得的腺病毒滴度为1．8×10^11PFU／ml。病毒以MOI=50感染表皮细胞，2d后GFP阳性细胞的比例为97．46％。结论成功制备了HIF-1腺病毒载体，且感染表皮角质细胞后能得到较高的感染效率，从而为腺病毒介导的基因功能研究提供理论基础。
- 张翠萍付小兵李淑云孙同柱
- 关键词：低氧诱导因子-1腺病毒
