教育部“新世纪优秀人才支持计划”(NCET-11-1066)
- 作品数：20 被引量：13H指数：3
- 相关作者：朱长军董智雄付成华潘丽娜胡晓晴更多>>
- 相关机构：天津师范大学泰山医学院附属医院山东大学更多>>
- 发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”国家自然科学基金天津市应用基础与前沿技术研究计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 有丝分裂纺锤体及中间小体提取方法的研究被引量：1
- 2014年
- 目的 有丝分裂纺锤体和中间小体均是以在细胞有丝分裂进程中出现的微管为结构基础的暂时性结构,对细胞有丝分裂的顺利进行起着至关重要的作用.本研究旨在建立成熟高效的提取细胞内有丝分裂纺锤体和中间小体的方法.方法 通过细胞周期同步化方法使细胞内出现有丝分裂纺锤体或中间小体,运用低渗肿胀和甘油梯度离心的原理提取纺锤体和中间小体.结果 经Western Blot和细胞免疫荧光染色法鉴定,证实提取物中含有有丝分裂纺锤体和中间小体.结论 建立从人宫颈癌细胞Hela中提取有丝分裂纺锤体及中间小体的方法,可为鉴定有丝分裂纺锤体及中间小体上的蛋白分子垫定实验基础,同时也对研究肿瘤细胞有丝分裂的分子调控机制具有重要意义.
- 武岩潘丽娜朱长军姜伟詹启敏童彤
- 关键词：细胞同步化有丝分裂
- 核糖体蛋白RPL15多克隆抗体的制备与细胞内定位
- 2016年
- 为了解核糖体大亚基蛋白RPL15在细胞中的定位和功能,设计并合成了RPL15蛋白的多肽,作用于抗原免疫兔子,使其产生特异性多克隆抗体,利用蛋白免疫印迹和免疫荧光方法检测RPL15抗体的特异性.结果证实本研究成功制备并纯化了RPL15的多克隆抗体,且该抗体可以特异性识别RPL15蛋白.免疫荧光实验表明RPL15定位于细胞质和细胞核中,主要定位于核仁并呈点状分布,且与UBF、FBL和C23存在部分共定位.
- 梁爽爽冀美超胡晓晴付成华朱长军董智雄
- 关键词：核糖体多克隆抗体免疫荧光细胞内定位
- 染色体驱动蛋白KIF4A抑制胃癌细胞的迁移运动被引量：3
- 2015年
- 探究染色体驱动蛋白KIF4A与胃癌细胞迁移运动的关系,从而为胃癌临床治疗提供新的治疗靶点。用G418筛选的方法构建了两种细胞株:KIF4A低表达的胃癌SGC细胞株与KIF4A过表达的胃癌SGC细胞株,Western与免疫荧光的验证后,对其分别进行细胞划痕与Transw ell迁移实验检测KIF4A对细胞迁移运动能力的影响。成功构建了KIF4A低表达的SGC细胞株(SGC-sh KIF4A)与KIF4A过表达的细胞株(SGC-KIF4A),在KIF4A低表达的SGC细胞株中细胞的迁移速率增加,在KIF4A过表达的细胞株中细胞的迁移速率减慢。染色体驱动蛋白KIF4A抑制胃癌细胞的迁移运动能力,为进一步研究KIF4A与胃癌转移的机制奠定基础。
- 胡晓晴梁爽爽冀美超朱长军潘丽娜
- 关键词：驱动蛋白胃癌迁移
- 驱动蛋白分子Kif14细胞内中小体定位的研究
- 2016年
- 为了探讨决定人体驱动蛋白分子Kif14在细胞有丝分裂末期时定位于细胞中小体的功能域,构建了驱动蛋白分子Kif14各功能域的绿色荧光蛋白(GFP)真核细胞表达质粒,分别转染于人体子宫颈癌细胞He La中.应用聚丙烯酰氨凝胶电泳和免疫印迹法(Western Blot)检测各蛋白的表达情况;应用免疫荧光染色法(immunofluorescence)分别对微管蛋白(Tubulin)、着丝粒相关蛋白(CREST)和DNA染色,荧光显微镜下观察各绿色荧光融合蛋白在有丝分裂末期的亚细胞定位.结果发现,细胞有丝分裂末期,驱动蛋白分子Kif14的N末端GFP融合蛋白定位于中小体(midbody),马达区GFP融合蛋白沿微管分布,杆状尾区GFP融合蛋白以点状分布于细胞质,尾区GFP融合蛋白分布于整个细胞中.由此认为,Kif14驱动蛋白分子的N末端延伸区决定该蛋白分子在细胞有丝分裂末期定位于中小体.
- 马新姜伟朱长军
- 关键词：驱动蛋白
- 核仁蛋白RRP15在细胞有丝分裂期的表达与定位
- 2018年
- 为了明确核糖体RNA加工蛋白15(RRP15)在细胞周期不同时期的表达情况与亚细胞定位,以稳定表达GFP-RRP15的He La细胞为实验材料,利用细胞同步化以及蛋白免疫印迹方法研究RRP15在细胞周期不同时期的表达情况,利用细胞免疫荧光染色以及活细胞成像检测RRP15在有丝分裂期的亚细胞定位,利用染色体提取探究RRP15与有丝分裂期细胞染色体的关系.结果发现,RRP15在整个细胞周期中均有稳定表达,且在G1期表达微量上调;在有丝分裂期,RRP15定位于染色体外周和中小体,始终伴随染色体,且染色体外周定位不依赖于DNA.
- 陈超敏杨佳董智雄朱长军
- 关键词：细胞周期有丝分裂染色体
- RNaseⅢ制备的小分子干扰RNA（esiRNA）文库构建及优势分析被引量：4
- 2013年
- 目的建立KIF4A核糖核酸内切酶Ⅲ酶切制备的小分子干扰RNA（esiRNA）文库，并探讨这种新型siRNA制备方法的优势。方法制备502bp的KIF4A基因组序列作为转录模板；体外转录获得双链RNA；用核糖核酸内切酶ⅢGST融合蛋白（GST-RNaseⅢ）酶切双链RNA，制备KIF4AesiRNA文库；应用KIF4AesiRNA和化学合成的KIF4AsiRNA转染胃癌细胞株SGC-7901，应用Q-RTPCR和WesternBlot分别检测KIF4A的mRNA和蛋白水平。结果利用GST-RNaseⅢ成功制备了KIF4AesiRNA文库，该文库可有效抑制SGC．7901细胞内的KIF4A表达，且抑制效果明显优于化学合成的KIF4AsiRNA。结论用生物学方法制备的KIF4AesiRNA文库可有效抑制KIF4A在细胞内的表达，且抑制效果优于化学合成的siRNA。
- 李陪董智雄朱长军刘海燕
- 关键词：RNA干扰
- 染色体驱动蛋白KIF4A参与调控肺癌细胞顺铂耐药
- 2015年
- 目的研究染色体驱动蛋白KIF4A参与肺癌细胞顺铂耐药过程。方法采用逆转录PCR（RT．PCR）及Western Blot实验检测并比较肺癌细胞株A549及其顺铂耐药衍生细胞株A549／DDP中染色体驱动蛋白KIF4A的表达。先用细胞转染技术在A549细胞中过表达外源性KIF4A，或用RNA干扰（RNAi）技术敲降A549／DDP细胞中内源性KIF4A的表达，再用顺铂处理上述细胞，最后通过噻唑蓝（MTY）比色法检测细胞的增殖能力。结果染色体驱动蛋白KIF4A在A549／DDP细胞中mRNA和蛋白质的表达均高于A549细胞。在A549细胞中过表达外源性KIF4A，导致细胞耐受顺铂药物，且细胞增殖能力不受顺铂药物处理的影响。相反，在A549／DDP细胞中敲降KIF4A的表达，导致A549／DDP细胞对顺铂药物敏感，细胞增殖能力下降。结论驱动蛋白分子KIF4A参与调控肺癌细胞A549的顺铂耐药过程，故KIF4A可作为潜在的有效治疗肺癌顺铂耐药的新型生物靶标。
- 付成华胡晓晴梁爽爽冀美超董智雄朱长军
- 关键词：肺癌顺铂耐药
- 一种连续蔗糖密度梯度离心分离哺乳动物细胞核糖体前体和核糖体的技术优化
- 2015年
- 目的利用连续蔗糖密度梯度的方法分离提取哺乳动物细胞的核糖体前体和核糖体。方法采用超速离心法建立连续蔗糖密度梯度，分别用梯度为10％～30％和10％-45％的连续蔗糖密度梯度提取哺乳动物细胞内的核糖体前体和核糖体；然后将哺乳动物细胞裂解液加入到已建立好的连续蔗糖密度梯度上进行超速离心；再将不同沉降系数的核糖体前体和核糖体收集到不同的1．5ml离心管中，测量每一个样品的吸光度值A。并提取其中的蛋白质，利用WesternBlot检测核糖体大亚基蛋白RPL15的定位。结果核糖体大亚基蛋白RPL15位于核糖体前体的60S上和成熟核糖体的60S、80S和多聚核糖体上。结论利用水平转头建立的连续蔗糖密度梯度可快捷分离哺乳动物细胞内的核糖体前体和核糖体。该法分离效果好，操作简单，为快速和大量制备、分离多种核糖体提供了一种良好的方法。
- 梁爽爽冀美超胡晓晴付成华朱长军董智雄
- 关键词：核糖体
- 驱动蛋白KIF4A抑制胃癌细胞的侵袭作用
- 2016年
- 目的应用胃癌细胞SGC-7901以及稳定低表达驱动蛋白KIF4A的胃癌细胞SGC-shKIF4A，研究KIF4A对胃癌细胞侵袭能力的作用。方法使用蛋白免疫印迹法鉴定对照胃癌细胞SGC-shNC以技SGC-shKIF4A细胞内KIF4A蛋白的表达水平．并通过细胞侵袭实验计数这两种细胞的侵袭能力。通过细胞免疫荧光染色法观察在SGC-7901、SGC-shNC、SGC-shKIF4A细胞中皮层肌动蛋白（cortactin）的数量变化情况。结果 与对照细胞SGC-shNC相比，SGC-shKIF4A细胞侵袭能力明显增强；与其他细胞相比，SGC-shKIF4A细胞的cortactin数量明显增多（P〈0．01），表明该细胞内侵袭性伪足增多.结论 驱动蛋白KIF4A具有抑制胃癌细胞的侵袭作用，这为KIF4A作为靶点应用胃癌的预后预测以及有效治疗奠定理论基础。
- 冀美超姜虹羽董智雄朱长军
- 关键词：皮层肌动蛋白细胞侵袭胃癌细胞
- A549-KIF4A过表达细胞株的构建与鉴定被引量：1
- 2015年
- 非小细胞肺癌A549细胞中驱动蛋白KIF4A的表达量极低.为研究KIF4A在肺癌发生和发展过程中的作用,利用脂质体转染的方法,将p EGFP-KIF4A质粒和p EGFP-C1质粒分别转入A549细胞中,用G418筛选得到单克隆,并扩增得到稳定表达GFP-KIF4A和GFP的细胞株.利用Western Blot以及免疫荧光染色法对得到的细胞株进行鉴定.结果表明:A549-GFP-KIF4A细胞中GFP-KIF4A蛋白的表达水平较高,A549-GFP-C1中仅表达GFP蛋白.免疫荧光检测表明:A549-GFP-KIF4A过表达细胞中GFP-KIF4A荧光融合蛋白的定位与内源KIF4A的定位相同.
- 宋翔付成华朱长军董智雄
- 关键词：驱动蛋白脂质体转染免疫荧光检测细胞株
