国家科技重大专项(2008ZX08002)
- 作品数：1 被引量：4H指数：1
- 相关作者：符容婕郭蔼光张大鹏吕宁更多>>
- 相关机构：西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 兔出血症病毒衣壳蛋白VP60的原核表达及多克隆抗体制备被引量：4
- 2012年
- 【目的】构建兔出血症病毒衣壳蛋白VP60基因的原核表达载体,进行原核表达并制备其蛋白抗体。【方法】以保存的VP60基因的质粒(pTeasy-VP60)为模版,用PCR方法获得VP60基因,并将其克隆到pET28a(+)载体上,构建重组表达载体pET28a(+)-VP60,酶切鉴定和测序验证后转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,优化诱导表达时间和IPTG浓度;利用镍离子螯合层析纯化重组蛋白,并制备了高效价的抗VP60多克隆抗体。【结果】成功构建了兔出血症病毒衣壳蛋白VP60的原核表达质粒pET28a(+)-VP60,其在大肠杆菌中以包涵体形式高效表达,重组蛋白分子质量为60ku,制备的多克隆抗体具有较强的免疫结合活性。【结论】成功实现了VP60基因的原核表达,制备了重组蛋白VP60的多克隆抗体,为进一步的VP60转基因研究奠定了基础。
- 张大鹏吕宁符容婕郭蔼光
- 关键词：原核表达多克隆抗体
