国家自然科学基金(31071349)
- 作品数：5 被引量：17H指数：3
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- 兔出血症病毒衣壳蛋白VP60的原核表达及多克隆抗体制备被引量：4
- 2012年
- 【目的】构建兔出血症病毒衣壳蛋白VP60基因的原核表达载体,进行原核表达并制备其蛋白抗体。【方法】以保存的VP60基因的质粒(pTeasy-VP60)为模版,用PCR方法获得VP60基因,并将其克隆到pET28a(+)载体上,构建重组表达载体pET28a(+)-VP60,酶切鉴定和测序验证后转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,优化诱导表达时间和IPTG浓度;利用镍离子螯合层析纯化重组蛋白,并制备了高效价的抗VP60多克隆抗体。【结果】成功构建了兔出血症病毒衣壳蛋白VP60的原核表达质粒pET28a(+)-VP60,其在大肠杆菌中以包涵体形式高效表达,重组蛋白分子质量为60ku,制备的多克隆抗体具有较强的免疫结合活性。【结论】成功实现了VP60基因的原核表达,制备了重组蛋白VP60的多克隆抗体,为进一步的VP60转基因研究奠定了基础。
- 张大鹏吕宁符容婕郭蔼光
- 关键词：原核表达多克隆抗体
- 水分胁迫下小麦TaWSI18基因的电子克隆及生物信息学分析被引量：1
- 2016年
- 利用电子克隆和RT-PCR技术,从干旱胁迫的小麦叶片中分离出4条新的具有高度同源性的WSI18基因,即TaWSI18-1、TaWSI18-2、TaWSI18-3和TaWSI18-4(Gene Bank登陆号分别为:KP226849、KP226850、KP226851和KP226852);其开放阅读框均为678 bp,编码225个氨基酸。生物信息学分析表明,该类蛋白具有亲水性,存在多个磷酸化位点,无信号肽结构域及剪切位点,定位于细胞质中,无跨膜结构域;二级结构分析表明,该蛋白α螺旋和无规则卷曲的比例达到90%以上;同源性比较及聚类分析表明,小麦TaWSI18蛋白同无芒雀麦(Bromus inermis,BAN15016)WSI18蛋白和二穗短柄草(Brachypodium distachyon,XP 003569641)LEA3蛋白具有高度的同源性,相似性分别为94%和70%。小麦TaWSI18基因编码蛋白的氨基酸序列的N端存在与LEA蛋白的N端区域高度保守的序列。表明小麦TaWSI18蛋白的性质与LEA3蛋白的相似,说明了小麦的TaWSI18蛋白可能与LEA3蛋白存在相同或相似的功能,为进一步研究其在小麦水分胁迫下的功能奠定基础。
- 樊磊陈娟张艳娥张林生朱维宁张大鹏
- 关键词：小麦水分胁迫电子克隆生物信息学
- 小麦WZY2基因RNA干扰表达载体的构建及遗传转化被引量：3
- 2012年
- 【目的】利用基因枪将WZY2基因RNA干扰表达载体pAHC-WZY2-Ri导入"郑引1号"小麦,获得WZY2基因表达缺失型小麦,为深入分析WZY2基因功能奠定基础。【方法】以植物表达载体pAHC25为基础,构建含有反向重复序列的RNA干扰表达载体pAHC-WZY2-Ri,利用基因枪将其转入"郑引1号"小麦幼胚愈伤组织中,经过筛选、PCR检测得到阳性植株。【结果】从转化的1 500个愈伤组织中获得27株再生植株。利用PCR对再生植株进行检测,获得阳性植株3株,转化率为0.2%。【结论】构建了WZY2基因的RNA干扰表达载体,成功地将WZY2基因RNA干扰表达载体导入"郑引1号"小麦,获得阳性植株。
- 苏君艺陆璇璇朱维宁张林生
- 关键词：小麦RNA干扰
- 外源NO对渗透胁迫下油松种子萌发及幼苗生理特性的作用被引量：4
- 2013年
- 利用PEG6000处理的方法,研究了外源NO对渗透胁迫下油松种子萌发及幼苗生理特性的影响。结果表明,渗透胁迫下,油松种子发芽率下降,严重影响种子胚根的生长,低浓度(0.1～0.3mmol.L-1)NO能有效缓解渗透胁迫的影响,促进种子的萌发;高浓度(>0.5mmol.L-1)NO对油松种子萌发有一定的抑制作用。渗透胁迫条件下,外源NO处理能使油松幼苗SOD活性增强,超氧物阴离子自由基(O2-)、H2O2、和丙二醛(MDA)含量降低,脯氨酸及叶绿素含量增加。这在一定程度上表明,外源NO处理可消除活性氧减轻渗透胁迫引起的膜脂过氧化作用,同时通过增加脯氨酸等渗透调节物质增强油松幼苗的抗逆性。
- 裴乐乐韩锋溪胡景江
- 关键词：油松萌发生理变化
- 干旱-高温交叉逆境对小麦叶片蛋白质表达的影响被引量：6
- 2012年
- 采用溶液培养、PEG处理等方法,研究干旱、高温单一逆境以及干旱-高温和高温-干旱交叉逆境下小麦叶片蛋白质含量和组分的变化,同时探究外源Ca2+和Ca2+螯合剂EGTA对交叉逆境下小麦叶片诱导蛋白表达的影响,以探讨Ca2+信使系统及逆境蛋白表达与交叉适应的关系。结果表明,逆境胁迫会引起小麦叶片可溶性蛋白含量的升高,且交叉逆境下可溶性蛋白含量高于单一逆境胁迫;对小麦叶片全蛋白进行SDS-PAGE分析发现,逆境胁迫诱导产生新的蛋白质,其中最为显著的是分子质量为34.3ku和24.0ku的两种新蛋白,且交叉逆境下两种逆境蛋白的百分含量明也显高于单一逆境,特别是干旱-高温交叉胁迫表达量最高。用不同浓度的Ca2+(CaCl2)处理小麦幼苗,均可提高两种逆境蛋白的表达量;而EGTA对两种逆境蛋白的表达产生抑制作用。逆境下可溶性蛋白质(包括新的逆境蛋白)的表达是植物对不同逆境交叉适应的生理基础之一。可见,Ca2+作为胞内信使参与植物的逆境信号传递过程。
- 宋晓玲韩锋溪胡景江
- 关键词：干旱高温可溶性蛋白
