国家自然科学基金(81301404)
- 作品数：2 被引量：5H指数：2
- 相关作者：黄敏君孙岚洪彩玲谷俊朝甘绍伯更多>>
- 相关机构：首都医科大学附属北京友谊医院更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家自然科学基金北京友谊医院科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 弓形虫GRA7致密颗粒蛋白与宿主巨噬细胞蛋白的相互作用被引量：2
- 2014年
- 目的鉴定与弓形虫GRA7致密颗粒蛋白相互作用的宿主巨噬细胞蛋白组分,并研究蛋白相互作用与感染过程的相关性。方法建立基于人源THP-1单核巨噬细胞系的弓形虫-巨噬细胞感染模型。以含GST标签的GRA7全长重组蛋白为诱饵,采用GST沉降体外蛋白相互作用方法 ,捕获与诱饵相互作用的人THP-1单核巨噬细胞系成分,采用液相色谱-两级质谱联用(LC-MS/MS)技术鉴定宿主靶蛋白。采用免疫共沉淀(Co-IP)方法验证其体内的相互作用。采用人碳酸酐酶1(h CA1)抗血清为一抗的蛋白质印迹(Western blotting)验证捕获蛋白为宿主h CA1蛋白组分。采用pc DNA3.1(+)真核质粒过表达宿主靶蛋白的方法研究蛋白相互作用与弓形虫感染巨噬细胞的相关性。结果 GST沉降实验捕获的THP-1细胞蛋白组分主要为相对分子质量为Mr29 000的蛋白,质谱鉴定为h CA1。Co-IP实验证明弓形虫GRA7蛋白与宿主h CA1蛋白在感染过程中具有显著体内相互作用。THP-1巨噬细胞内过表达h CA1基因可显著增强弓形虫的繁殖速度和纳虫泡形成速度,但不影响最终繁殖数量。结论弓形虫GRA7致密颗粒蛋白与THP-1巨噬细胞的h CA1蛋白具有显著蛋白相互作用,且该相互作用与弓形虫在THP-1巨噬细胞内的繁殖速度呈正相关。
- 薛峰洪彩玲黄敏君孙岚甘绍伯谷俊朝
- 关键词：刚地弓形虫致密颗粒蛋白蛋白相互作用
- 刚地弓形虫致密颗粒蛋白GRA2全基因的原核重组表达被引量：3
- 2013年
- 目的克隆弓形虫RH株致密颗粒蛋白2(GRA2)的全长基因,在大肠埃希菌工程菌中重组表达GST-HisGRA2融合蛋白。方法提取弓形虫总RNA,反转录获得cDNA,PCR扩增GRA2基因全长,与pET-41Ek/LIC载体通过基因重组直接连接,在大肠埃希菌RosettaTM(DE3)pLysS工程菌中诱导表达重组融合蛋白,然后采用SDS-PAGE和Western blot鉴定重组蛋白产物。结果 PCR鉴定弓形虫GRA2全基因重组表达质粒构建正确;诱导表达的GSTHis-GRA2融合重组蛋白分子质量单位为52ku,与预测值相符。结论本研究成功构建了弓形虫GRA2全基因重组蛋白质粒,该质粒能表达GRA2蛋白,为研究GRA2与宿主细胞的相互作用奠定了基础。
- 黄敏君薛峰洪彩玲孙岚甘绍伯谷俊朝
- 关键词：刚地弓形虫原核表达
