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国家自然科学基金(30800186)

作品数:5 被引量:1H指数:1
相关作者:林瑛孟清王瑾李伟齐兴梅更多>>
相关机构:东华大学上海交通大学更多>>
发文基金:国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家教育部博士点基金更多>>
相关领域:生物学天文地球更多>>

文献类型

  • 5篇中文期刊文章

领域

  • 5篇生物学
  • 1篇天文地球

主题

  • 3篇剪接
  • 2篇蛋白
  • 2篇蛋白质剪接
  • 2篇TER
  • 1篇蛋白激酶
  • 1篇蛋白质
  • 1篇蛋白质反式剪...
  • 1篇蛋白质内含子
  • 1篇蛋白质水平
  • 1篇底物
  • 1篇定向进化
  • 1篇英文
  • 1篇逆转
  • 1篇逆转录
  • 1篇逆转录聚合酶...
  • 1篇转录
  • 1篇磷酸
  • 1篇磷酸化
  • 1篇酶链反应
  • 1篇内含肽

机构

  • 4篇东华大学
  • 1篇上海交通大学

作者

  • 4篇林瑛
  • 3篇孟清
  • 1篇邱沛然
  • 1篇齐兴梅
  • 1篇李伟
  • 1篇王瑾

传媒

  • 1篇生物化学与生...
  • 1篇东华大学学报...
  • 1篇中国生物化学...
  • 1篇Chines...
  • 1篇中国生物工程...

年份

  • 4篇2012
  • 1篇2011
5 条 记 录,以下是 1-5
排序方式:
定向进化提高微小蛋白质内含子Ter DnaE-3剪接活性的研究
2012年
目前,蛋白质内含子在蛋白质工程领域中得到越来越广泛的应用。为提高微小蛋白质内含子Ter DnaE-3(Trichodesmium erythraeum)在异源宿主中的剪接活性,采用易错PCR技术,通过改变反应体系中dNTP、Mg2+、Mn2+的浓度等手段,借助依赖卡那霉素的蛋白质内含子筛选系统进行筛选。Western印迹结果表明:通过定向进化,其中5号突变体的剪接活性从原始的约20%提高至约85%;9号突变体能够避免发生剪接副反应,即N端断裂反应。氨基酸突变位点与剪接活性变化的相关性分析表明:参与α-helix形成的氨基酸的突变极有可能影响蛋白质内含子的断裂反应,参与β-sheet形成的氨基酸的突变则有可能影响蛋白质内含子结构的紧凑性。通过定向进化提高微小蛋白质内含子Ter DnaE-3在异源宿主中的剪接活性,进一步验证依赖卡那霉素抗性的筛选系统的可行性,为扩大蛋白质内含子的应用范围奠定基础。
荀启静林瑛邱沛然孟清
关键词:蛋白质内含子定向进化蛋白质剪接
新型断裂内含肽介导的可控性C端断裂(英文)
2011年
内含肽介导的蛋白质断裂被广泛地应用于蛋白质纯化、连接和环化.但目前的方法都是用传统的连续的内含肽来介导蛋白质断裂反应,因而往往存在自发性断裂、产率低等问题.本实验选择3个S1型新型断裂内含肽Ter ThyX、Ssp GryB和Rma DnaB来实现蛋白质断裂反应的可控性.在可控性C端断裂反应中,S1型断裂内含肽的C端片段(IC)与硫氧还蛋白(T)融合作为前体蛋白,加入化学合成的Ssp DnaB S1型断裂内含肽的N端小肽与二硫苏糖醇(DTT)共同诱导C端断裂反应.结果表明,该小肽可以诱导这3个不同的S1型断裂内含肽的前体蛋白发生C端断裂反应.该方法为利用内含肽C端断裂介导的蛋白质纯化提供了更多的选择,并为内含肽的结构与功能的关系研究提供了有用的线索.
齐兴梅林瑛孟清
关键词:内含肽蛋白质剪接
新型T+1断裂蛋白质内含子的构建
2012年
首次从天然C端外显子为苏氨酸(Thr)的标准蛋白质内含子(TerSnf2)构建出两类T+1型断裂蛋白质内含子:Snf-S0和Snf-S1,通过蛋白印迹法测定Snf-S0和Snf-S1介导的蛋白质反式剪接效率分别达到53.5%和33.3%;当这两类断裂蛋白质内含子C端外显子分别为半胱氨酸(Cys)和丝氨酸(Ser)时均具有剪接活性.所获的两类具有剪接活性的T+1型断裂蛋白质内含子具备一定的插入位点通用性,这一特点为蛋白质反式剪接技术在蛋白质工程领域广泛应用提供了新的契机.
王瑾林瑛郑言成孟清
关键词:蛋白质反式剪接TER
Assessment of XAF1 as A Biomarker to Differentiate Hepatocellular Carcinoma from Nonneoplastic Liver Tissues被引量:1
2012年
Objective: XIAP-associated factor 1 (XAF1) expression has been shown to be related with apoptosis in hepatocellular carcinoma (HCC). However, the correlation of XAF1 expression with HCC tumor grade has not been intensively assessed. XIAP-associated factor-1 (XAF1) is an important apoptosis inducer in human HCC. The aim of this study is to determine the correlation between XAF1 expression and HCC histopathological grades. Methods: The mRNA levels of XAF1 in 24 paired HCC-nonneoplastic specimens were quantified by real-time reverse transcription PCR (RT-PCR). Protein levels of XAF1 in 110 paired HCC-noncancer tissues were investigated by immunostaining specimens on a tissue microarray (TMA). Correlations between XAF1 mRNA levels or protein expression and clinicopathological features were assessed by statistical analysis. Results: Both XAF1 mRNA and protein were significantly under-expressed in HCC tissues compared to their non-neoplastic counterparts. No significant relationship was found between XAF1 mRNA or protein expression and histological tumor grade. Conclusion: All these data suggest that XAF1 is a potential biomarker for differentiating HCC with noncancerous tissues.
Ying LinWei Li
关键词:MRNA水平逆转录聚合酶链反应蛋白质水平
鉴定人甲基化CpG结合结构域蛋白4为蛋白激酶X的底物(英文)
2012年
人蛋白激酶X(PrKX)是由X染色体编码的一种cAMP依赖性蛋白激酶,但是到目前为止已鉴定到的PrKX底物还很少.为了鉴定蛋白激酶X的底物,我们以蛋白激酶X为诱饵进行了酵母双杂交实验,结果发现甲基化CpG结合结构域蛋白4(MBD4)与PrKX在酵母细胞内相互作用较强.GST融合蛋白沉降和细胞内蛋白质的免疫共沉淀证实PrKX与MBD4之间确实存在相互作用.进一步研究表明,大肠杆菌中表达的重组MBD4在体外可以被PrKX磷酸化,而且MBD4蛋白的磷酸化能明显增强它在体外与甲基化DNA探针的结合活性.
李伟林瑛
关键词:磷酸化DNA结合活性
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