国家自然科学基金(2012-81200438)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
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- 顺式高尔基体蛋白GM130影响小鼠卵母细胞纺锤体组装
- 2013年
- 目的确定顺式高尔基体蛋白GM130对小鼠卵母细胞纺锤体组装的影响。方法免疫荧光法检测GM130在小鼠卵母细胞发育不同时期的亚细胞定位,并用免疫印迹法半定量检测其表达水平;接着用微管解聚药物诺考达唑处理小鼠MI卵母细胞,明确GM130与微管动力的关系。免疫印迹检测注射GM130特定的寡聚核苷酸(morpholino,MO)后卵母细胞中GM130的表达水平,免疫荧光法检测纺锤体的形态变化及中心体相关蛋白γ-tubulin和Plk1的定位。结果 M130在卵母细胞减数分裂成熟的不同阶段有不同的特异性定位,主要集中分布在生发泡周围、纺锤体的两极和中体及分散于胞浆。GM130在MI和MII期与中心体相关蛋白p-MEK1/2共定位并与纺锤体的组装密切相关。免疫印迹试验表明GM130在卵母细胞发育的各个时期均有表达。降调GM130的表达后,纺锤体组装异常比例升高,且大多数为拉长的纺锤体;第一极体排出率下降,在排出的极体中,大极体的比率升高,并影响γ-tubulin和Plk1的正确定位。结论 GM130可能作为一种微管组织中心相关蛋白调节纺锤体的组装。
- 张春晖钱卫平孙洪梅孟繁华
- 关键词：小鼠卵母细胞减数分裂纺锤体
- 顺式高尔基体蛋白GM130影响小鼠卵母细胞减数不对称分裂的研究被引量：2
- 2013年
- 目的确定顺式高尔基体蛋白(GM130)对小鼠卵母细胞纺锤体迁移及减数不对称分裂的影响。方法免疫荧光法检测GM130在小鼠卵母细胞的定位,活细胞工作站延时拍摄系统捕捉纺锤体在降调GM130表达后的的动态变化。结果降调GM130的表达后,第一极体排出率下降,在排出的极体中,大极体的比率升高;但对微丝网络及微丝帽的影响不明显。向卵母细胞内注射β5-tubulin--GFP mRNA和GM130特定的寡聚核苷酸(morpholino,MO)的混合物后,用活细胞工作站延时拍摄系统证实了降调GM130会影响卵母细胞纺锤体的迁移,纺锤体单极拉长,并能与该侧的皮质接触,产生胞质分裂环,导致大极体排出。若拉长的纺锤体尚不能与皮质接触,则细胞阻滞在分裂中期I(MI期),没有极体排出。另外,降调GM130的表达也会影响磷酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶1/2(p-MEK1/2)在纺锤体极的定位,用丝裂原活化蛋白激酶激酶(MEK)的抑制剂U0126处理MI期的卵母细胞则发现GM130不再在纺锤体两极聚集,而是散在分布于胞浆。结论 GM130可能参与丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在小鼠卵母细胞纺锤体迁移及不对称分裂中起重要作用。
- 张春晖钱卫平孙洪梅孟繁华
- 关键词：小鼠卵母细胞纺锤体
