沈阳市科学技术计划项目(1091175-1-00)
- 作品数：3 被引量：12H指数：3
- 相关作者：夏蒲徐小燕郑华川关一夫邢亚楠更多>>
- 相关机构：中国医科大学中国医科大学附属第一医院医学部更多>>
- 发文基金：沈阳市科学技术计划项目辽宁省“百千万人才工程”资助项目留学人员科技活动项目择优资助经费更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- JCV病毒T抗原诱发晶状体上皮肿瘤动物模型建立被引量：5
- 2011年
- 目的利用α-crystallin启动子构建晶状体上皮细胞中JCV T抗原表达转基因鼠,试图建立晶状体自发肿瘤动物模型。方法利用限制性内切酶BclI分离pBSK(pBluescript SK)-T抗原,BamH I同尾连接插入以pBSK为载体的α-crystallin启动子下游,通过NciI酶切电泳分离带有α-crystallin启动子的T抗原核酸序列后显微注射入C57BL/6J小鼠受精卵中。PCR检测转基因阳性鼠及JCV病毒T抗原拷贝数,大体和组织学观察眼球及病变组织,免疫组织化学观察T抗原、p53和β-catenin表达。结果成功构建α-crystallin JCV T抗原表达质粒,转基因阳性鼠中2号鼠(αAT-2)拷贝数最高,该鼠眼球于11个月表现出肿瘤样改变,肿瘤细胞中T抗原、p53和β-catenin呈强阳性表达。结论 JCV T抗原直接诱发晶状体上皮肿瘤动物模型建立为JCV T抗原嵌入所致上皮肿瘤提供了直接实验依据,为JCV所致上皮肿瘤发生和演进分子机理研究奠定坚实基础,同时为抗肿瘤药物筛选及基因治疗监控提供了良好的动物模型。
- 王建平张梅英徐小燕王巍夏蒲郑志宏王禄增高野康雄郑华川
- 关键词：JC病毒T抗原转基因鼠晶状体
- 胃黏膜特异表达JC病毒T抗原质粒构建及表达鉴定被引量：3
- 2010年
- 目的利用鼠胃黏膜上皮细胞中高活性的角蛋白19(K19)启动子构建K19-JCVT抗原表达质粒并进行鉴定。方法利用PCR方法突变JC病毒T抗原中的NdeⅠ位点,并在两端插入BclⅠ位点,通过BamHⅠ位点将DNA片段与K19启动子连接,构建K19-JCVT抗原质粒。利用酶切和DNA测序确认其DNA序列。免疫组化筛选细胞角蛋白19阳性胃癌细胞,对细胞角蛋白19表达阳性的胃癌细胞系AGS进行K19-JCVT抗原质粒转染,用Western blot方法检测JCVT抗原的表达情况。结果K19-JCVT抗原表达质粒成功构建,AGS胃癌细胞系高表达细胞角蛋白19并用于K19-JCVT抗原表达质粒转染,转染K19-T抗原质粒的AGS细胞系有T抗原表达。结论同义突变和相似连接在质粒构建中起到关键作用,酶切位点的甲基化也是值得注意的问题。
- 夏蒲徐小燕贾宝萍王薇关一夫高野康雄郑华川
- 关键词：JC病毒T抗原真核表达
- 冻结破碎法提取组织蛋白方法初探被引量：6
- 2010年
- 目的比较冻结破碎法和匀浆法提取组织蛋白的效率,拟建立一种提取组织蛋白的新方法。方法分别用冻结破碎器具SK-100和匀浆机处理小鼠不同部位的组织,提取总蛋白后进行蛋白定量,然后用Western blot检测β-actin蛋白表达。结果冻结破碎法虽比匀浆法耗时稍长,但与匀浆法提取的总蛋白浓度以及β-actin蛋白表达无明显统计学差异。结论匀浆法与冻结破碎法均可以用于提取小鼠各种组织的蛋白,都可以在实验室中展开,进而在蛋白质水平上进行相关功能的研究。
- 徐小燕夏蒲邢亚楠关一夫郑华川
- 关键词：小鼠蛋白免疫印迹Β-ACTIN
