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LINGO-1-Fc蛋白对低钾诱导小脑颗粒神经元凋亡的保护作用被引量：7: 2006年; 髓鞘抑制因子Nogo-A、MAG和OMgp通过共同的受体信号复合物NgR/p75NTR(或者TROY)发挥对中枢神经纤维再生的抑制作用.新近克隆的跨膜蛋白LINGO-1是该信号途径的另一个重要组成成分和调节分子.LINGO-1特异表达于中枢神经系统,神经元上的LINGO-1被证明参与调节中枢神经再生的抑制信号,而少突胶质细胞表达的LINGO-1分子参与负调节少突胶质细胞的髓鞘化过程.为探讨LINGO-1分子在神经元凋亡过程中的作用,利用包含LINGO-1分子胞外段LRR和IgC2结构域的Fc融合蛋白作为功能性拮抗剂,研究LINGO-1对低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡的保护作用.利用成熟的Hoechst标记凋亡细胞的方法,观察到经LINGO-1-Fc蛋白预处理2h能够显著阻止小脑颗粒神经元的凋亡.仅包括LRR结构域的GST-LINGO-1与LINGO-1-Fc蛋白,虽同样具有与颗粒神经元的结合活性,但是GST-LINGO-1不能有效地阻止低钾诱导的细胞凋亡.这些结果提示,LINGO-1-Fc蛋白能够阻止低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡,并且这种作用可能是IgC2结构域依赖的.; 赵湘辉金卫林MI Sha鞠躬; 关键词：LINGO-1 小脑颗粒神经元凋亡

Nogo-66受体分子在体外培养的星形胶质细胞中的表达: 2005年; 目的检测Nogo-66受体(NgR)在体外培养的大鼠星形胶质细胞中的表达。方法利用RT-PCR、West-ern Blot和间接免疫荧光染色技术,检测原代培养并纯化的星形胶质细胞中NgRm RNA和蛋白分子的表达。结果利用RT-PCR技术,从星形胶质细胞总RNA中扩增出特异的NgR条带;利用Western Blot技术,从星形胶质细胞抽提物中检测到64kD特异性的NgR反应条带;间接免疫荧光染色和Confocal显微镜进一步显示,星形胶质细胞中的NgR免疫反应物主要位于细胞内。同时,来源于大鼠的C6胶质瘤细胞也证明表达NgR蛋白。结论体外培养的星形胶质细胞中表达NgR分子,这为证明NgR在体内胶质细胞中的表达提供了更直接的证据。; 孙芳金卫林龙梅龙梅; 关键词：星形胶质细胞体外

髓鞘相关蛋白Nogo-A在纯化细胞核中的表达: 2007年; 目的:检测Nogo-A蛋白在纯化后的大鼠脊髓和小脑细胞核中的表达。方法:通过差速离心法得到大鼠脊髓和小脑样本的各亚细胞成分,利用非离子性去污剂NP-40纯化细胞核组分,采用Western blot方法检验核纯度并检测Nogo-A在各亚细胞成分中的表达。结果:纯化的细胞核抽提物中检测到特异的Nogo-A反应条带。结论:Nogo-A在纯化的细胞核中仍有明确表达,进一步证明了Nogo-A蛋白在中枢神经元的细胞核中有定位,并提示Nogo-A很可能以全长形式入核。; 孙芳周国庆金卫林龙梅李容鞠躬; 关键词：NOGO-A WESTERN BLOT

人Nanog基因的克隆及其在COS-7L细胞中的表达被引量：6: 2004年; 目的 :克隆人Nanog基因 ,构建其真核表达载体 ,并观察其在哺乳动物细胞COS 7L中的表达。方法 :利用HE2 93细胞的人基因组DNA为模板 ,以LA PCR技术 ,扩增Nango的基因 ,定向克隆到带Flag标签的pCMV载体中 ,测序后 ,挑选序列正确的真核表达质粒pFlag Nanog转染COS 7L细胞。用抗Flag标签的抗体 ,进行Westernblot和间接免疫荧光染色法检测Nango蛋白的表达。结果 :从人基因组DNA中克隆到序列正确的Nanog全长编码序列。所构建的Nanog质粒在COS 7L细胞中获得高效表达。结论 :人Nanog基因的克隆、真核表达载体的构建及在COS 7L中的表达均获得成功 ,为进一步研究其功能 ,尤其是探讨其在神经干细胞中的作用奠定了基础。; 柳霞龙梅蒋晖金卫林焦西英鞠躬; 关键词：NANOG 克隆分子真核表达

Nogo-A在大鼠脑组织中的亚细胞定位被引量：1: 2009年; 目的Nogo-A在中枢神经系统的髓鞘和神经元中广泛表达,并且有多种亚分布形式。在以往研究的基础上,将通过检测Nogo-A/B(N-18)在大鼠脑组织中的亚细胞定位,进一步获得Nogo-A在细胞核中表达的有力证据。方法通过差速离心法和NP-40处理得到大鼠皮层和小脑样本的纯化细胞核亚组分,利用Westernblot来检测各亚细胞成分中Nogo-A的表达。通过免疫荧光双标染色,共聚焦显微镜观察Nogo-A在大鼠皮层和小脑组织中的亚细胞定位。结果WesternBlot在纯化细胞核中可检测到清晰的Nogo-A条带。免疫荧光染色显示胞核内有免疫阳性物质表达,并且和Hoechst复染的胞核着色有广泛重合。结论Nogo-A在大鼠皮层和小脑细胞核中有明确表达,并且很有可能以全长形式入核。; 孙芳金卫林周国庆龙梅李容鞠躬; 关键词：WESTERN BLOT

针对Nogo-66受体分子不同抗体的反应性比较被引量：2: 2005年; 　目的: 比较几种不同的针对Nogo -66受体的抗体的反应性。方法: 利用Westernblot技术, 用不同的NgR的抗体检测转染Flag -NgR或Flag- NgRH1 /H2的COS细胞, 以验证NgR抗体的反应性和特异性; 利用间接免疫荧光染色技术,检测不同的NgR的抗体对转染细胞以及颗粒神经元表达的NgR蛋白的反应性。结果: Westernblot结果显示, AB5615sc- 25659和NgRpAb都可特异识别NgR, 并且不和同源家族分子NgRH1 /H2产生交叉反应; 转染Flag -NgR细胞的免疫荧光双标结果显示 5种NgR的抗体均能与NgR产生特异反应, 其中仅Ngr11- A使核周NgR染色, 其余抗体可使胞膜和胞质均着色; CGN细胞荧光染色结果显示, 除Ngr11- A未观察到细胞染色外, 其余抗体均可使细胞的胞膜和突起特异着色, sc -16708和NgRpAb亦可使胞质着色。结论: 针对Nogo-66受体的这几种抗体都可以与NgR产生特异性反应; 不同NgR的抗体在Westernblot和免疫荧光染色上的表现模式存在一定的差异。; 孙芳金卫林赵湘辉龙梅张萍鞠躬; 关键词：抗体反应性

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国家自然科学基金(30218003)