浙江省科技计划项目(2006C30021)
- 作品数：5 被引量：19H指数：2
- 相关作者：胡慧珍马炬明王伟国苏长青施正杰更多>>
- 相关机构：第二军医大学解放军第117医院解放军第一一七医院更多>>
- 发文基金：浙江省科技计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 腺病毒介导p16基因表达对胃癌细胞化疗敏感性的增强作用
- 2011年
- 目的研究p16基因对胃癌细胞化疗敏感性的作用。方法构建携带p16基因的腺病毒感染胃癌细胞株SGC-7901;Western blotting鉴定癌细胞p16的表达;MTT法检测顺铂(DDP)对癌细胞存活率的影响;动物体内实验验证p16与DDP对癌细胞生长抑制的协同作用。结果腺病毒感染胃癌细胞后表达p16使癌细胞对DDP更为敏感,其中p16阳性组的细胞在DDP浓度达到1.5mg/L时,细胞存活率降至20%以下,而同期p16阴性组的细胞在相同DDP浓度时存活率仅下降至60%左右。p16腺病毒联合DDP对裸鼠移植瘤的生长抑制明显强于单独应用p16腺病毒或DDP。结论胃癌细胞获得外源性p16表达对DDP的敏感性提高,p16基因治疗联合化疗将有可能提高抗肿瘤效果。
- 胡慧珍王伟国马炬明施正杰
- 关键词：腺病毒P16基因顺铂化疗敏感性胃癌
- 转录因子E2F启动子的克隆及其肿瘤靶向特异性的鉴定
- 2007年
- 目的:克隆转录因子E2F的启动子,研究其针对pRb/E2F/p16调控环路缺陷肿瘤的特异性。方法:提取HepG-Ⅱ细胞基因组DNA,PCR扩增其转录因子E2F启动子(E2Fp),插入pGL3-Basic多克隆位点,构建成pGL3-E2Fp;采用Luciferase报告基因检测方法,在肿瘤细胞和正常细胞内测定E2Fp介导的Luciferase表达,以推测E2Fp肿瘤的特异性。结果:E2Fp在正常细胞内几乎没有活性,而在肿瘤细胞内具有较高的活性,两组间Luciferase报告基因表达的差异有显著性(P=0.0004)。结论:靶向pRb/E2F/p16环路缺陷肿瘤的E2Fp,具有对基因表达调控的特异性,能够提高Luciferase报告基因在肿瘤细胞中表达的靶向性。E2Fp的克隆为改进肿瘤基因治疗的疗效提供了一种可靠的工具。
- 马炬明苏长青王伟国施建国胡慧珍李林芳钱其军
- 关键词：转录因子启动子基因治疗报告基因
- 胃癌细胞p16和CDK4的表达及调控的分子机制
- 2011年
- 目的通过腺病毒携带p16基因感染胃癌细胞,研究p16功能恢复对CDK4表达的调节作用。方法构建携带p16基因的重组腺病毒AdCMV-p16感染胃癌细胞系。Western blotting检测p16和CDK4的表达,MTT法检测癌细胞的增殖活性,DAPI染色计数癌细胞的凋亡比例。结果胃癌细胞感染腺病毒载体AdCMV-p16后获得p16表达,对细胞整体CDK4表达无影响,但可明显降低细胞核CDK4的表达量;AdCMV-p16感染后引起癌细胞增殖活性下降,当感染复数(MOI)为1、10、20时,细胞存活率已经分别低于50%、20%和5%;p16表达可诱导癌细胞凋亡,细胞凋亡率达(13.86±4.65)%。结论 p16功能恢复后核CDK4含量减少,可能是诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡、抑制癌细胞生长的主要分子机制。
- 马炬明王伟国胡慧珍施正杰
- 关键词：P16基因CDK4基因细胞周期胃癌
- 抑癌基因p16的表达与胃癌细胞增殖及胃癌患者预后的关系被引量：17
- 2012年
- 目的探讨p16表达与胃癌细胞的增殖能力、胃癌的临床特征及胃癌患者预后的关系。方法采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、免疫组化和Western blot方法，检测胃癌细胞系SGC-7901、MKN45、MKN28和65例胃癌组织标本中p16mRNA和蛋白的表达。以AdCMV—p16感染胃癌SGC-7901细胞，采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定感染前后SCC-7901细胞存活率的变化，采用流式细胞术检测感染前后SGC-7901细胞细胞周期的变化。比较不同p16表达状态胃癌患者的术后生存情况。结果胃癌细胞系MKN45呈p16弱阳性表达，SGC-7901和MKN28细胞系呈阴性表达。以20PFU／细胞感染腺病毒AdCMV-p16时，原本p16阴性表达的SCC-7901细胞中p16表达转为阳性。转染p16的SGC-7901细胞存活率下降，G。期细胞比例上升，S期细胞比例下降。65例胃癌组织中，p16阳性率为32．3％，明显低于正常胃黏膜组织（81．5％），且p16表达与胃癌的分化程度、淋巴结转移有关。p16阴性组的胃癌患者无瘤生存期明显缩短。结论p16基因对胃癌细胞增殖的调控至关重要，p16的失活赋予了胃癌细胞高增殖、转移活性，并导致了胃癌患者的无瘤生存期缩短。
- 马炬明施正杰陈磊胡慧珍王伟国苏长青杨昌平
- 关键词：胃肿瘤细胞增殖细胞周期预后
- 携带p16基因增殖缺陷型腺病毒对胃癌细胞皮下移植瘤的治疗作用被引量：2
- 2007年
- 目的:研究携带p16基因的增殖缺陷型腺病毒载体对裸鼠皮下胃癌细胞移植瘤的抗肿瘤活性。方法:PCR扩增p16cDNA,构建腺病毒载体pSuCMV-p16表达质粒,在293细胞内重组增殖缺陷型腺病毒AdCMV-p16;建立胃腺癌细胞SGC-7901皮下移植瘤裸鼠模型,分为3组(AdCMV-p16组、Ad-LacZ组、空白对照组),以2×108pfu/100μl的重组腺病毒Ad-CMV-p16直接瘤内多点注射,隔日1次,共5次,空白对照组以等量病毒保存液注射,定时测量瘤体生长情况,并以p16免疫组化、TUNEL凋亡检测等观察AdCMV-p16抗肿瘤的疗效。结果:携带p16基因的增殖缺陷型腺病毒AdCMV-p16对胃腺癌裸鼠移植瘤有明显的抑制作用,抑瘤率为58.12%,而对照病毒Ad-LacZ对胃癌移植瘤的抑瘤率仅为4.26%;病理学检查显示,病毒治疗的癌组织中细胞坏死以凋亡为主,癌细胞中检测到p16基因的表达。结论:携带p16基因的增殖缺陷型腺病毒能恢复胃癌细胞中p16基因的表达,对胃癌移植瘤生长有明显的抑制作用。
- 王伟国苏长青施建国胡慧珍李林芳马炬明
- 关键词：胃癌基因治疗腺病毒抑癌基因
