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国家自然科学基金(81301470)
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2
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张晓红
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刘文
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基于梅毒核酸疫苗pcD/Tp92的不同接种策略
被引量:4
2017年
目的 评估基于梅毒核酸疫苗pcD/Tp92的各接种优化策略对新西兰兔梅毒螺旋体(Tp)皮肤感染的免疫保护效应。方法 核酸疫苗pcD/Tp92采用2次肌内注射免疫或肌内注射初免鼻饲加强的免疫方式结合黏膜佐剂CpG ODN及Tp92重组蛋白,分别或联合免疫新西兰兔。酶联免疫吸附法(ELISA)检测各接种策略组免疫期间(0 ~ 8周)兔特异性抗体产生及变化水平,免疫8周后兔鼻咽部、阴道黏膜SIgA产生水平及兔脾细胞IL?2、γ干扰素(IFN?γ)诱导水平,噻唑蓝法(MTT)检测兔脾淋巴细胞增殖水平。记录各组在初次免疫后第10周兔皮下接种Tp 标准株感染后接种部位感染早期皮损的变化。结果 采用pcD/Tp92核酸疫苗肌内注射初免,CpG?ODN联合Tp92重组蛋白抗原鼻饲新西兰兔加强免疫的接种策略组(C2组)分别与pcD/Tp92疫苗肌注组(A2组),pcD/Tp92疫苗肌注初免,pcD/Tp92鼻饲加强免疫组(B1组)或结合黏膜佐剂CpG ODN联合免疫的接种策略组(B2组)相比,既能促进pcD/Tp92核酸疫苗在兔体内免疫期间(8周)诱生更高特异性抗体水平(C2组:1.825 ± 0.175;A2组:1.372 ± 0.322;B1组:0.893 ± 0.297;B2组:1.294 ± 0.124;P 〈 0.05),IL?2(C2组:154.7 ± 14.6;A2组:112.3 ± 13.4;B1组:76.6 ± 21.5;B2组:97.3 ± 18.7;P 〈 0.05)及IFN?γ(C2组:277.4 ± 24.4;A2组:232.8 ± 25.3;B1组:165.7 ± 22.6;B2组:211.3 ± 24.6;P 〈 0.05)分泌水平,以及更高的T细胞增殖分化水平(SI C2组:3.57 ± 0.24;A2组:3.08 ± 0.22;B1组:2.12 ± 0.14;B2组:2.88 ± 0.18;P 〈 0.05),还能刺激更高的黏膜特异性SIgA抗体,导致最低Tp感染部位皮损Tp阳性率(6.67%)及溃疡病灶形成率(6.67%)从而达到有效的保护作用。结论 pcD/Tp92核酸疫苗肌内注射初免,CpG ODN联合Tp92重组蛋白鼻饲加强免疫的接种策略能在新西兰兔体内诱导最强的黏膜�
刘安元
陶立坚
赵铁
赵飞骏
张晓红
关键词:
梅毒
苍白密螺旋体
疫苗
梅毒螺旋体体内诱生抗原Tp0462的表达鉴定及在临床血清学诊断中的应用评价
被引量:8
2018年
目的筛选鉴定并评价梅毒螺旋体(Tp)体内诱生抗原Tp0462的临床血清学诊断价值。方法提取TpNichols株全基因组,PCR扩增Tp0462,克隆构建重组质粒pET30a(+)一Tp0462,转化至EcoliR05ett0(DE3)菌,大量诱导表达重组蛋白Tp0462并纯化、鉴定。18只新西兰兔随机平均分为活Tp接种组、紫外线照射灭活Tp接种组和未接种对照组,接种后不同时间点抽血分离血清,用ELISA鉴定Tp0462蛋白的体内诱生性特点。ELISA法(Tp0462.ELISA)、梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)、梅毒初筛ELISA试验及快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)试验检测336份临床梅毒患者血清样本,初步评价该蛋白的诊断价值。结果重组质粒Tp0462-pET30a(+)在E.coliRosetta(DE3)中最适的表达条件为0.5mmol/LIPTG,20℃,180rpm摇床诱导培养4h。活Tp接种组血清Tp0462特异性抗体水平从第2周起呈急剧上升趋势,至5周后趋于平稳,而灭活Tp接种组及未接种对照组血清Tp0462特异性抗体水平一直处于低水平。活Tp接种组Tp0462特异性抗体水平显著高于灭活Tp接种组及未处理组(P〈0.05),而灭活Tp接种组与未处理组相比,差异无统计学意义(P=0.256)。活Tp接种组、灭活Tp接种组Tp92抗体水平显著高于未处理组(P〈O.05),而活Tp接种组与灭活Tp接种组差异无统计学意义(P=0.127)。与TPPA相比,Tp0462-ELISA的灵敏度和特异度分别为91.7%和98.8%,符合率为95.2%,曲线下面积为0.997。Tp0462.ELISA与梅毒初筛ELISA试验的符合率为92.3%,Kappa值为0.846;与RPR试剂盒的符合率为83.9%,Kappa值为0.293。结论Tp0462在梅毒血清学诊断中具有较高的灵敏度和特异度,可以作为潜在的梅毒诊断候选蛋白。
刘文
邓美霞
张晓红
赵铁
罗茜
赵飞骏
尹卫国
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梅毒
苍白密螺旋体
梅毒血清诊断
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