国家自然科学基金(31160491)
- 作品数：9 被引量：41H指数：5
- 相关作者：杨银凤金鑫范燕茹王佩张曼更多>>
- 相关机构：内蒙古农业大学中华人民共和国农业部乌兰察布职业学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金内蒙古自治区人才开发基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- β-防御素在感染和炎症过程中的作用被引量：2
- 2015年
- 防御素(defensins)在整个进化过程中构成了动物体内最大的一组宿主防御肽,这些富含半胱氨酸的阳离子肽具有广谱的抗微生物活性,能有效杀灭细菌、酵母和病毒等微生物。因此,防御素是生物体内先天性免疫的一个主要组成部分。防御素在免疫调节中的功能已被广泛研究,文章综述了β-防御素的免疫调节活性及β-防御素在感染和炎症过程中作用的最新进展。
- 金鑫张曼范燕茹王佩杨银凤
- 关键词：Β-防御素先天性免疫免疫调节活性炎症
- 酿酒酵母菌对绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素-1(SBD-1)基因表达的影响被引量：12
- 2015年
- 【目的】探索益生性酿酒酵母菌对绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素-1(sheep beta-defensin-1,SBD-1)表达的调节作用,为在分子水平上揭示益生菌对防御素的调控机理提供一定的理论基础及依据。【方法】首先将新鲜的绵羊瘤胃组织用PBS和抗生素处理后进行瘤胃上皮细胞原代培养,当原代细胞数量长到细胞培养瓶的85%以上时,将细胞传于12孔板用于细胞刺激试验。同时将活化并纯化后的酿酒酵母菌25℃、180 r/min有氧培养48 h后,进行5次平行平板计数试验,根据平板计数的数据处理方法,得到浓度为5.2×108CFU·m L-1的酿酒酵母菌液,再通过倍比稀释把所得菌液依次稀释成浓度为5.2×107、5.2×106、5.2×105、5.2×104CFU·m L-1的菌液,用以上不同浓度(5.2×104—5.2×108CFU·m L-1)的酿酒酵母菌对体外培养的绵羊瘤胃上皮细胞分别进行不同时间(2、4、8、12、24 h)的刺激,并设置对照组用DMEM/F12培养基代替酿酒酵母菌。然后提取总RNA,逆转录为c DNA后,利用实时荧光定量PCR技术和酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测瘤胃上皮细胞中SBD-1表达差异。最后用SAS 9.2软件对数据进行相关差异性分析。【结果】荧光定量PCR结果表明,在各时间组内SBD-1 m RNA的表达量随着菌液浓度的增加均呈先升高后降低的趋势,当菌液浓度为5.2×107CFU·m L-1时表达量达到最大,并与对照组和其他浓度组相比差异极显著(P<0.01)。当菌液浓度一定时,SBD-1 m RNA的表达量先是随着刺激时间的延长而呈上升趋势,刺激时间为12 h时SBD-1 m RNA表达量达到峰值,之后呈下降趋势。因此,当浓度为5.2×107CFU·m L-1的菌液刺激瘤胃上皮细胞12 h后,SBD-1基因的表达量达到最高,且与此浓度下其他时间组的表达量相比差异极显著(P<0.01)。ELISA检测结果显示,SBD-1蛋白表达趋势与SBD-1 m RNA检测结果基本一致。不同浓度的菌液分别刺激绵羊瘤胃上皮细胞2、4、8、12、24 h后均
- 金鑫张曼范燕茹王佩杨银凤
- 关键词：酿酒酵母菌实时荧光定量PCR酶联免疫吸附测定绵羊
- 驯鹿β-防御素-1(reBD-1)基因的原核表达及蛋白活性的鉴定被引量：2
- 2011年
- 旨在构建驯鹿β防御素-1(Reindeerβ-defensin-1,reBD-1)基因的原核表达载体pET-32a(+)/reBD-1,诱导reBD-1融合蛋白在大肠杆菌中表达,并对其表达产物的生物学活性进行评价。利用RT-PCR技术扩增reBD-1前原肽。从重组克隆载体PMD19T/reBD-1中扩增reBD-1成熟肽编码基因,并克隆入pET-32a(+)中,在大肠杆菌BL21(DE3)中用IPTG诱导表达reBD-1融合蛋白。表达的融合蛋白扩大培养,进一步纯化后进行体外抑菌试验。结果表明,reBD-1前原肽和成熟肽扩增产物大小分别为215和138bp,目的基因的序列与驯鹿防御素-1mRNA序列同源性为100%。前原肽和成熟肽融合蛋白分子量分别为28和24ku。利用琼脂糖扩散法表明,0.08mg.mL-1的纯化成熟肽蛋白对金黄色葡萄球菌及大肠杆菌的活性有明显抵抗作用。结果显示,reBD-1前原肽及成熟肽在大肠杆菌中得到了高效表达,其成熟肽对革兰氏阳性菌和阴性菌的活性有抗性。
- 苏丽娜杨银凤景岚曹贵方
- 关键词：驯鹿防御素抗菌活性
- 中国驯鹿瘤胃上皮细胞的体外分离培养被引量：9
- 2014年
- 为了建立驯鹿瘤胃上皮细胞的体外分离及培养方法，试验将驯鹿瘤胃组织进行钝性分离得到上皮层，用0．25％Trypsin-0．02％EDTA消化液37℃连续振荡消化上皮组织3～4h，每30min更换新的消化液，从消化第4次起过滤消化液，离心收集细胞，采用含有15％FBS的M199培养液培养和传代，在显微镜下观察其细胞形态进行形态学鉴定以及采取免疫细胞化学的方法检测细胞内的角蛋白CKl9进行化学鉴定。结果表明：用上述试验方法可以获得能够用于培养的细胞，并能将这些细胞成功地进行了原代和传一代的体外培养。通过细胞形态学观察和免疫细胞化学检测，证实所培养的细胞为上皮细胞。说明试验基本建立了驯鹿瘤胃上皮细胞在体外分离培养的方法。
- 范燕茹王佩金鑫王冠玉邱凯王秀芳苏日古格余兴邦杨银凤
- 关键词：瘤胃上皮细胞原代培养体外培养
- 小肠潘氏细胞防御素在肠道免疫中作用的研究进展被引量：1
- 2012年
- 防御素(defensins)是一类低分子质量抗菌肽,广泛地分布于动物和植物界。小肠潘氏细胞防御素是存在于哺乳动物小肠肠腺底部的潘氏细胞颗粒内的一类抗菌肽,是肠道天然屏障的重要组成部分。作者综述了小肠潘氏细胞防御素的分类、分布、分子特征和抗微生物活性及其在肠道免疫中的作用。
- 王永胜杨银凤
- 关键词：防御素小肠潘氏细胞
- 乳酸杆菌诱导绵羊瘤胃上皮细胞内SBD-1的表达被引量：5
- 2016年
- 为了解不同乳酸杆菌的刺激对绵羊瘤胃上皮细胞中绵羊β-防御素-1(sheep beta-defensin-1,SBD-1)的可能调节作用,本研究选用了2株具有益生作用的乳酸杆菌,即干酪乳杆菌Zhang(L.casei Zhang)和植物乳杆菌P-8(L.plantarum P-8),首先,运用实时荧光定量PCR技术(RT-q PCR)检测与乳酸杆菌共培养后的绵羊瘤胃上皮细胞中SBD-1mRNA的相对表达量;其次,探讨了2株乳酸杆菌诱导SBD-1 mRNA表达的差异性,选取优势菌株;最后,运用RTq PCR技术和酶联免疫吸附测定(ELISA)的方法,检测优势菌株活菌、灭活菌及其培养上清液对SBD-1基因及蛋白水平表达的影响。结果表明:2株乳酸杆菌均能促进SBD-1 mRNA的相对表达量,乳酸杆菌的浓度为107CFU/m L、刺激细胞8 h时能极显著促进SBD-1 mRNA的相对表达量(P<0.01),而L.plantarum P-8强于L.casei Zhang;进一步的研究表明L.plantarum P-8的灭活菌亦可显著诱导SBD-1的基因及蛋白表达(P<0.05),但弱于活菌。本研究结果表明L.plantarum P-8和L.casei Zhang均可诱导绵羊瘤胃上皮细胞内SBD-1的差异性表达。
- 范燕茹王佩金鑫杨银凤
- 关键词：乳酸杆菌酶联免疫吸附测定
- 家畜体内防御素多态性和表达的研究进展被引量：14
- 2013年
- 抗菌肽可抵御细菌、病毒和真菌的入侵,在人类和家畜的先天性防御系统中具有重要的作用,是有望用于预防和治疗的药物,因此,抗菌肽被称为"新一代的抗生素"。抗菌肽是一个阳离子肽,其中的一个大家族就是防御素。防御素的结构中普通带有一个β-片状结构,其中包含3个分子内二硫键,可分为α-防御素、β-防御素和θ-防御素,其中β-防御素是最大的一个家族,在人类和家畜的组织内均有表达。结合已有的研究成果,作者主要对家畜体内防御素的表达、多态性及其作为健康和生产性能的遗传标记的潜在应用作一综述。
- 李砚杨银凤
- 关键词：家畜防御素多态性
- 枯草芽孢杆菌对绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素-1表达的影响被引量：18
- 2015年
- 选用益生枯草芽孢杆菌研究其对体外培养的绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素表达的调节作用。首先,在体外成功培养绵羊瘤胃上皮细胞,然后用枯草芽孢杆菌对体外培养的绵羊瘤胃上皮细胞进行不同浓度、不同时间的刺激,利用荧光定量PCR技术(Real-time fluorescence quantitative PCR,RT-PCR)从mRNA水平检测刺激后上皮细胞中绵羊β-防御素-1(Sheep beta-defensin-1,SBD-1)基因表达水平的差异。结果表明:当菌液浓度为1010 cfu·mL-1刺激上皮细胞8h后,SBD-1的表达量达到最高;不同的菌液浓度诱导下SBD-1的表达量均有显著增加,109、1010、1011 cfu·mL-1菌液浓度刺激下,SBD-1的表达量与空白相比差异极显著(P<0.01)。结果表明,枯草芽孢杆菌能够诱导绵羊瘤胃上皮细胞内SBD-1基因的表达。
- 王佩范燕茹金鑫杨银凤
- 关键词：枯草芽孢杆菌荧光定量PCR
- 酿酒酵母菌诱导绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素-1(SBD-1)表达的研究
- 为了探索益生性酿酒酵母菌对绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素-1(Sheep Beta-Defensin-1,SBD-1)表达的调节作用。建立绵羊瘤胃上皮细胞培养体系作为体外试验模型,用不同浓度酿酒酵母菌对体外培养的绵羊瘤胃上皮...
- 金鑫张曼范燕茹田巧珍刘骄杨银凤
- 关键词：酿酒酵母菌实时荧光定量PCR绵羊
- 文献传递
- 植物乳杆菌诱导绵羊瘤胃上皮细胞SBD-1表达的信号通路途径初探被引量：2
- 2016年
- 本试验旨在探索乳酸杆菌诱导绵羊瘤胃上皮细胞SBD-1表达的可能途径。采用实时荧光定量PCR(RTqPCR)的方法,对已建立的诱导SBD-1表达模型中Toll样受体2(Toll like receptor 2,TLR2)及其相关因子的基因表达变化进行检测;然后选用3种信号通路抑制剂,即NF-κB信号通路抑制剂PDTC、ERK 1/2信号通路抑制剂PD98059和JNK信号通路抑制剂SP600125,将细胞分为8组:细胞组:不作处理;阳性对照组:只添加植物乳杆菌P-8(L.plantarum P-8)诱导;PDTC组:只添加PDTC预处理细胞(PDTC);PDTC+L.plantarum P-8组:PDTC+L.plantarum P-8诱导;PD98059组:PD98059;SP600125组:SP600125;PD98059+L.plantarum P-8组:PD98059+L.plantarum P-8;SP600125+L.plantarum P-8组:SP600125+L.plantarum P-8。采用RT-qPCR的方法检测各组SBD-1mRNA表达水平。结果表明,绵羊瘤胃上皮细胞被L.plantarum P-8诱导后,TLR2及其转接蛋白MyD88、NF-κB和ERK1/2、JNK各基因的mRNA水平都较空白组细胞内的表达极显著增加(P<0.01);添加抑制剂后再诱导,发现抑制剂PD98059和SP600125均能极显著(P<0.01)抑制细胞内SBD-1 mRNA的表达,而PDTC仅能显著抑制(P<0.05)SBD-1的表达。结果表明,L.plantarum P-8可促进绵羊瘤胃上皮细胞TLR2、MyD88、NF-κB、JNK和ERK1/2基因的mRNA表达;添加NF-κB信号通路抑制剂PDTC、ERK 1/2信号通路抑制剂PD98059和JNK信号通路抑制剂SP600125,可抑制L.plantarum P-8对SBD-1mRNA的诱导作用。综上表明,L.plantarum P-8有可能通过激活绵羊瘤胃上皮细胞内NF-κB、JNK、ERK1/2等信号通路促进SBD-1的表达。
- 范燕茹金鑫田巧珍张曼刘骄杨银凤
- 关键词：乳酸杆菌TOLL样受体2实时荧光定量PCR
