国家自然科学基金(39970343)
- 作品数：7 被引量：48H指数：4
- 相关作者：周钦王远程吴兆龙赵昀兰洋更多>>
- 相关机构：复旦大学中国科学院上海生命科学研究院广州军区武汉总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- AP-1在转录水平调控氧化低密度脂蛋白诱导的转化生长因子-β_1表达被引量：20
- 2002年
- 目的 了解转录激活蛋白 1(AP 1)是否参与调控氧化低密度脂蛋白 (Ox LDL)诱导转化生长因子 β1(TGF β1)基因的表达 ,探讨Ox LDL激活AP 1可能的信号转导途径。方法 首先利用SD大鼠TGF β1启动子缺失体 荧光素酶 (luciferase)报告基因瞬时转染系膜细胞并检测虫荧光素酶相对活性 ,找出可能的应答区域 ;然后对AP 1结合位点进行突变并加入c Jun/AP 1抑制剂 ,比较启动子活性的变化情况。利用Western印迹检测了Ox LDL对系膜细胞p38有丝分裂原激活的蛋白激酶 (MAPK)总蛋白和磷酸化水平的影响。最后 ,用凝胶阻滞法 (EMSA)观察在特异性的蛋白激酶抑制剂处理下的AP 1活性的变化。结果 对Ox LDL刺激的应答 ,TGF β1启动子 - 15 5 0到 - 84 5之间是一个正调控区域 ,- 6 2 9到 - 4 2 2之间则是一个负调控区。AP 1结合位点突变和c Jun/AP 1抑制剂均导致TGF β1启动子活性显著降低。在Ox LDL刺激下p38MPAK表现出的不是量的变化 ,而是其磷酸化水平的增加。PKC抑制剂明显地抑制了Ox LDL诱导的AP 1活性 ;与之相反 ,p38MPAK抑制剂则对AP 1活性无显著影响。结论 在大鼠肾系膜细胞 ,AP 1在转录水平参与调控Ox LDL诱导TGF β1表达的过程 ;且Ox LDL可能部分是通过PKC信号转导途径激活AP 1中的c Jun蛋白 ,再由c Jun/AP 1从?
- 周钦兰洋王远程赵昀吴兆龙
- 关键词：肾小球膜氧化低密度脂蛋白信号转导通路肾小球纤维化
- 氧化-低密度脂蛋白诱导系膜细胞转录激活蛋白1活化的信号转导通路被引量：2
- 2003年
- 目的 观察氧化-低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导系膜细胞转录激活蛋白1(AP-1)活化的作用,探讨AP-1活化的上游信号转导机制。方法 大鼠肾小球系膜细胞随机分为正常细胞组,ox-LDL处理组和ox-LDL+蛋白激酶抑制剂组。采用Western blot测定丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)家族磷酸化水平,采用凝胶迁移率实验观察蛋白激酶抑制剂bisindolylmaleimide I、H89、genistein、PD98059及SB203580对ox-LDL诱导系膜细胞AP-1活性的影响。结果 ox-LDL呈浓度和时间依赖性激活JNK1/SAPK(stress activated protein kinase)、p38MAPK磷酸化(P<0.05),而ox-LDL对p44/42MAPK磷酸化无影响(P>0.05)。bisindolylmaleimide I浓度为50、100、200 nmol/L时均显著抑制ox-LDL诱导系膜细胞AP-1活性。H89剂量为0.5、5 μmol/L时,AP-1活性显著受抑制。genistein浓度为25、50 μmol/L时并不抑制ox-LDL诱导AP-1活性,浓度达100 μmol/L时则显著抑制ox-LDL诱导系膜细胞AP-1活性。SB203580和PD98059均不能抑制ox-LDL诱导AP-1活性。结论 PKC、PKA及PTK等多种蛋白激酶参与对ox-LDL诱导系膜细胞AP-1活性的调控。
- 王远程吴兆龙周钦
- 关键词：肾小球疾病发病机制信号转导蛋白激酶类
- 核转录因子-κB对氧化低密度脂蛋白诱导大鼠系膜细胞转化生长因子β1转录的调控被引量：4
- 2003年
- 兰洋周钦吴兆龙
- 关键词：核转录因子-КB氧化低密度脂蛋白肾系膜细胞转化生长因子Β1
- 丙丁酚抑制氧化型低密度脂蛋白诱导系膜细胞转化生长因子-β_1表达被引量：13
- 2005年
- 目的 观察丙丁酚对ox- LDL诱导系膜细胞AP -1活性和TGF -β1 表达的作用 ,探讨抗氧化剂治疗脂质肾损伤的分子机制。方法 大鼠系膜细胞随机分为正常细胞组、ox- LDL处理组和ox- LDL +丙丁酚处理组。运用凝胶迁移率实验检测AP-1活性变化 ,Western杂交检测c- Jun、JNK/SAPK磷酸化及TGF- β1 蛋白表达水平的改变。运用Northern杂交检测TGF- β1- mRNA表达。结果 丙丁酚 5 0 μmol/L预处理系膜细胞 2 0h ,显著降低ox LDL诱导系膜细胞AP 1活性。丙丁酚浓度为 5 0、1 0 0、2 0 0 μmol/L时 ,均显著抑制ox- LDL诱导JNK ,/SAPK磷酸化 ;且ox LDL +丙丁酚处理组的c Jun蛋白表达分别为ox- LDL处理组的 6 0 %、5 1 %和 4 6 %。Northern杂交显示 :ox LDL为 1 0 μg/mL时并不激活TGF- β1 mRNA表达 (P >0 .0 5 ) ;而当ox-LDL浓度增至 5 0、1 0 0 μg/mL时 ,TGF -β1 mRNA表达分别增加 1 .8和 1 .9倍。Western杂交显示ox -LDL呈剂量依赖方式增加TGF β1 蛋白质表达。加入丙丁酚后显著降低ox LDL诱导系膜细胞的TGF -β1- mRNA和蛋白质表达 (P <0 .0 5 )。结论 丙丁酚可能通过抑制JNK1 /SAPK磷酸化和AP 活性下调ox- LDL诱导系膜细胞TGF- β1 表达。
- 王远程叶志斌周钦张宗梁吴兆龙
- 关键词：丙丁酚NORTHERN杂交JNK/SAPKAP-1活性抗氧化剂治疗杂交检测
- 丙丁酚对系膜细胞转录激活蛋白-1活性的影响被引量：7
- 2000年
- 目的 :研究氧化型低密度脂蛋白 (ox LDL)诱导肾小球系膜细胞转录激活蛋白 1 (AP 1 )活性的改变及抗氧化剂丙丁酚对其影响 ,进一步探讨丙丁酚抗氧化作用的分子机制。 方法 :利用凝胶迁移率实验 (Gelshiftas say)和超迁移率实验 (Gelsupershiftassay)检测不同浓度及不同时相ox LDL对大鼠肾小球系膜细胞AP 1活性的影响、AP 1二聚体中c Jun和c Fos成分的变化及抗氧化剂丙丁酚对其影响。 结果 :ox LDL(1 0 0mg/L)作用系膜细胞后 6h ,核蛋白提取物中AP 1活性开始升高 ,36h达到最大值 ,48h与 36h相比较无明显变化 ;ox LDL作用 2 4h时 ,随着ox LDL浓度的增加 ,AP 1活性逐渐增加 ;超迁移率实验显示ox LDL(1 0 0mg/L)主要激活AP 1二聚体成分中c Jun ,而Fos蛋白未激活 ;丙丁酚 (5 0nmol/L)对一般培养状态下系膜细胞AP 1活性无明显抑制作用 ,但能明显抑制ox LDL(1 0 0mg/L)诱导的系膜细胞AP 1活性。 结论 :丙丁酚降低ox LDL诱导的系膜细胞AP
- 王远程吴兆龙于甬申
- 关键词：丙丁酚氧化型低密度脂蛋白AP-1肾损伤
- a-生育酚抑制高糖诱导大鼠系膜细胞AP-1活性及TGFB_(1)表达被引量：1
- 2000年
- 目的 研究α 生育酚对高糖诱导肾小球系膜细胞转录激活蛋白 1(AP 1)和转化生长因子 β1(TGF β1)的影响 ,探讨抗氧化剂治疗糖尿病肾病的机制。方法 采用凝胶迁移率实验 (Gelshiftassay)和超迁移率实验(Gelsupershiftassay)检测不同浓度及不同时间下葡萄糖对系膜细胞AP 1活性的影响、AP 1二聚体中Jun和Fos成分的变化、Western杂交检测TGF β1蛋白表达水平以及抗氧化剂α 生育酚对上述指标的影响。结果 高糖呈浓度和时间依赖性激活系膜细胞AP 1活性 ,AP 1二聚体中JunD、Fos参与这一作用。同时 ,葡萄糖增加系膜细胞TGF β1蛋白表达。加入α 生育酚预处理系膜细胞后 ,葡萄糖诱导的AP 1活性和TGF β1表达水平降低。结论 α 生育酚抑制高糖诱导的系膜细胞AP 1活性及TGF
- 王远程吴兆龙于甬申
- 关键词：肾小球系膜糖尿病肾病AP-1
- 肾小球系膜细胞转化生长因子-β_1基因启动子中氧化低密度脂蛋白应答元件的研究被引量：5
- 2002年
- 目的 :了解在氧化低密度脂蛋白 (Ox LDL)刺激下 ,转化生长因子 β1(TGF β1)基因启动子中顺式作用元件的应答情况。研究在大鼠肾系膜细胞中 ,Ox LDL对TGF β1基因启动子转录活性的影响作用。 方法 :用聚合酶链反应 (PCR)、酶切和亚克隆的方法 ,构建出 5个TGF β1启动子缺失体—虫荧光素酶 (luciferase)报告基因 ,利用其瞬时转染系膜细胞并检测luciferase相对活性。 结果 :在Ox LDL(10 0mg/L)刺激下 ,luciferase的活性 12h即出现 ,并于 36h达到平台期。对Ox LDL刺激的应答 ,TGF β1启动子 15 5 0到 845之间可能存在着增强子 , 6 2 9到 4 2 2之间则可能有抑制子。计算机软件分析表明 ,前者内有一转录激活蛋白 1(AP 1)精确识别位点。 结论 :在大鼠肾系膜细胞TGF β1基因启动子中 ,AP 1结合序列 (TGAGTCA)可能是应答Ox LDL的顺式作用元件。Ox LDL上调TGF β1的表达至少部分是通过AP 1蛋白来介导的 ,且Ox LDL可能通过蛋白激酶C(PKC)信号通路激活AP 1从而正调控TGF β1基因的转录过程。
- 周钦王远程兰洋赵昀陆长德吴兆龙
- 关键词：肾小球系膜细胞氧化低密度脂蛋白转化生长因子-Β1
