上海市教育委员会创新基金(05IZ02)
- 作品数：2 被引量：6H指数：1
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- 机械生长因子促骨骼肌卫星细胞增殖作用途径的初步研究
- 2014年
- 目的:研究机械生长因子促进骨骼肌卫星细胞增殖的量效关系及可能的作用途径。方法:选用4周龄雄性SD大鼠1只,无菌条件下取后肢肌肉,采用改进的两步酶消化法结合差速贴壁技术,分离及纯化骨骼肌卫星细胞。免疫细胞化学法鉴定骨骼肌卫星细胞。取第3代骨骼肌卫星细胞,随机分为对照组、DMEM对照组、MGF组(M组)、LY+MGF组(LM组)、PD+MGF组(PM组)和LY+PD+MGF组(LPM组),同步化后,相应组细胞换用含有PI3K特异性抑制剂LY294002(30μM)及MEK特异性抑制剂PD98059(50μM)的生长培养基预阻断12 h后,再用含有MGF(25 ng/ml)的生长培养基继续培养24 h后,用CCK-8比色法、BCA比色法观察不同抑制剂干预下SC的增殖及总蛋白含量。结果:1、PM组和LPM组OD值均显著低于M组(P<0.01),而LM组OD值与M组无显著差异。2、LM组、PM组、LPM组SC总蛋白含量均显著低于M组。结论:MEK/Erk途径在MGF对卫星细胞促增殖方面有较重要作用。
- 陆耀飞孙婧瑜
- 关键词：机械生长因子骨骼肌卫星细胞信号通路增殖
- 外源性机械生长因子对大鼠骨骼肌卫星细胞生物学特性的影响被引量：6
- 2011年
- 目的:研究机械生长因子(MGF)促离体培养的骨骼肌卫星细胞增殖的最佳浓度,并观察该浓度对细胞生长曲线、总蛋白及凋亡情况的影响。方法:选用雄性SD大鼠1只,无菌条件下取后肢肌肉,采用改进的两步酶消化法结合差速贴壁技术,分离及纯化骨骼肌卫星细胞。取第3代骨骼肌卫星细胞,分别采用终浓度为15、25、50、100、200 ng/ml的MGF进行干预,作为实验组;另以单纯加入100μl生长培养基作为对照组,以加入100μl DMEM作为阴性对照组。同步化后,于培养24 h后加入CCK-8溶液。采用CCK-8比色法检测不同浓度MGF下细胞的增殖情况并筛选出最佳浓度后,绘制生长曲线,同时运用BCA法及Hoechst 33342、PI双染法测定最佳增殖浓度的MGF对卫星细胞蛋白合成及细胞凋亡的影响。免疫细胞化学法鉴定骨骼肌卫星细胞。结果:①终浓度为15、25、50、100 ng/ml的MGF均有促进骨骼肌卫星细胞增殖的作用(P<0.01),其中25 ng/ml MGF促增殖作用最佳。②与对照组相比,MGF组细胞生长曲线左移,倍增时间、平台期均缩短。③与对照组相比,25 ng/ml MGF作用48 h即对骨骼肌卫星细胞有明显的增殖效果(P<0.05);与对照组相比,25 ng/ml MGF作用骨骼肌卫星细胞48 h和72 h时,其总蛋白含量显著增加(P<0.05);与对照组相比,25 ng/ml MGF作用72h、96h,骨骼肌卫星细胞的平均凋亡指数显著减小(P<0.05)。结论:①机械生长因子可促进体外培养的大鼠骨骼肌卫星细胞增殖,最佳浓度为25 ng/ml;②25 ng/ml MGF可以使骨骼肌卫星细胞提前进入平台期,缩短生长周期;③25 ng/ml MGF可以抑制骨骼肌卫星细胞的凋亡。
- 孙婧瑜陆耀飞
- 关键词：机械生长因子骨骼肌卫星细胞凋亡指数
