国家自然科学基金(39970380)
- 作品数：11 被引量：25H指数：4
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- 相关机构：北京大学河北工程大学中国人民解放军261医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 某部女性卵巢及乳腺肿瘤流行病学调查
- 2002年
- 戴燕陈昌松田燕平陈永平秦屹卢伟常香芬樊毅王东香
- 关键词：女性流行病学卵巢肿瘤乳腺肿瘤
- 树突状细胞电转染的优化条件及影响因素被引量：7
- 2007年
- 目的探讨树突状细胞(DC)电转染的方法、优化条件以及影响DC电转染率和存活率的主要因素。方法提取人肝癌细胞(Bel 7402)RNA,利用淋巴细胞分离液密度梯度法分离人外周血单个核细胞(PBMC),并通过贴壁法获取单核细胞作为树突状细胞前体(pDC)。将pDC置含rhGM-CSF和rIL-4的RPMI-1640培养液内联合培养诱导7d,使之充分分化为未成熟的DC(imDC)。应用电穿孔仪(electroporation apparatus)分别将人肝癌细胞总RNA和绿色荧光蛋白(GFP)电转染至imDC,并设定不同的电压、脉冲时间、细胞浓度、温度和电转染缓冲液等条件。荧光镜下和光镜下分别计算绿色荧光阳性细胞数和总细胞数。电转染1d后,用0.4%锥虫蓝染色分别计算其电转染率和存活率。结果当imDC浓度为5×106/ml与40μg的人肝癌细胞总RNA混合,设定电转染仪电压为300V、脉冲时间为500μs时,其电转染率达到最高值,imDC存活率约49.07%。结论电转染提供了一种使人肝癌细胞RNA电转染至imDC的可行技术。影响imDC电转染率的最主要因素是受体细胞imDC的生长状况、电转染的电压及脉冲时间。
- 唐岩唐军民战军刘影常昕莹王国涛单铁英苏安英
- 关键词：电转染树突状细胞
- 人外周血单核细胞分化为树突状细胞过程中核转录因子-κBp50的表达及柴胡皂苷a的影响被引量：3
- 2007年
- 目的观察人外周血单核细胞分化为树突状细胞(DC)过程中,核转录因子-κB p50(NF-κB p50)的表达以及柴胡皂苷a对单核细胞分化为树突状细胞的影响。方法非连续密度梯度离心获取人外周血单核细胞;用含粒单细胞刺激因子(GM-CSF)、IL-4、肿瘤坏死因子(TNF-α)和柴胡皂苷a的RPMI-1640培养液分别对细胞因子组、柴胡皂苷组、联合培养组的单核细胞进行体外培养;应用倒置相差显微镜、瑞氏染色和CD14、CD83、HLA-DR、S-100的免疫细胞化学法鉴定单核细胞和DC;动态观察单核细胞分化为DC过程中不同时间点的NF-κB p50的表达,并进行图像分析。结果CD14、CD83、HLA-DR、S-100免疫细胞化学法证实所获单核细胞和DC符合各自的形态和表型特征。在含GM-CSF和IL-4的RPMI-1640培养液培养7d时,单核细胞分化成未成熟DC(imDC);在含GM-CSF、IL-4和TNF-a的RPMI-1640培养液继续培养3d时,imDC分化为成熟DC(mDC),两者的细胞核内NF-κB p50表达具有显著性差异(P<0.05)。单纯用只含柴胡皂苷a的RPMI-1640培养液培养单核细胞至7d时,可见其细胞核呈NF-κBp50阳性,但未见其分化为DC。若用含GM-CSF、IL-4和柴胡皂苷a的RPMI-1640培养液联合培养7d时,则该单核细胞分化为imDC;加入TNF-α后继续培养3d,imDC的细胞核呈NF-κB p50强阳性,免疫细胞化学法证实imDC已经分化为mDC。联合培养组细胞的表型表达均强于只加细胞因子组(P<0.05)。结论人外周血单核细胞分化为imDC和mDC过程中,细胞核内NF-κB p50表达逐渐增强。单纯用低浓度柴胡皂苷a不能刺激单核细胞分化为DC,但联合细胞因子GM-CSF、IL-4和TNF-α培养时,可使其分化为imDC和mDC。
- 张丽唐军民唐岩李枫苏安英
- 关键词：细胞表面抗原P50柴胡皂苷A
- 人肝癌细胞RNA电转染至未成熟树突状细胞的扫描电镜观察
- 2007年
- 目的观察电转染人肝癌细胞RNA前后未成熟树突状细胞(imDCs)的表面形态学变化。方法取人外周血,纯化获取单核细胞后诱导其成为imDCs,然后通过电转染方法将人肝癌细胞RNA导入其内;用7种特异性抗体的免疫细胞化学技术对电转染前后的树突状细胞鉴定后,进行扫描电镜观察。结果电转染人肝癌细胞RNA后imDCs内TERT表达显著增加,其他分子表达无显著改变。电转染前,imDCs多呈圆形、椭圆形或不规则形,体积较单核细胞大,但大小不均,在细胞表面可见长短不一的微绒毛,或/和许多泡状、面纱状或云朵状细胞突起;电转染后,可在imDCs表面见到由于电转染所造成的孔,并有一定数量的细胞融合和细胞死亡,但绝大多数细胞可恢复至正常结构状态。结论电转染打孔可为外源物质(如肝癌细胞RNA或其他肿瘤细胞RNA)导入细胞内提供可行性,并为进一步利用imDCs制作肿瘤疫苗,开展肿瘤的生物治疗提供一种可行方案。
- 战军唐军民唐岩
- 关键词：电转染未成熟树突状细胞扫描电镜
- 树突状细胞-肿瘤细胞之融合细胞在抗肿瘤免疫中的研究进展被引量：3
- 2003年
- 伊焕发唐军民
- 关键词：树突状细胞肿瘤细胞融合细胞免疫治疗
- 人外周血树突状细胞-乳腺癌细胞融合细胞被引量：5
- 2003年
- 目的:探讨树突状细胞-肿瘤细胞融合细胞的形态特性,为研制融合细胞疫苗提供形态学依据。方法:将免疫磁珠法分离的人外周血树突状细胞与人乳腺癌细胞株MCF7融合,瑞氏-姬姆萨染色观察;扫描电镜观察树突状细胞、融合细胞的表面超微结构。结果:树突状细胞与MCF7细胞接10:1比例融合后,一个乳腺癌细胞可以与一个或多个树突状细胞相融合;扫描电镜下可见分离的树突状细胞表面有突起,树突状细胞/MCF7融合细胞具两种亲代细胞的表面超微结构特点。结论:树突状细胞与人乳腺癌细胞融合后无明显的形态改变。
- 伊焕发唐军民唐岩孙红亚甄昱戴燕秦屹
- 关键词：乳腺癌细胞树突状细胞融合细胞免疫磁珠法扫描电镜
- 人宫颈上皮内瘤变和浸润癌组织中树突状细胞及T细胞的免疫组织化学定量分析被引量：4
- 2007年
- 目的研究人宫颈上皮内瘤变和浸润癌组织中树突状细胞和T细胞的数量、分布变化,为人宫颈癌的诊断和生物治疗提供实验依据。方法采用免疫组织化学和图像分析技术,测定人宫颈上皮内瘤变、宫颈浸润癌和正常宫颈组织中树突状细胞表型抗原CD1a、S-100及T细胞表面分化抗原CD3、CD8阳性细胞的数量、分布和表达强度。结果与人正常宫颈组织比较,宫颈上皮内瘤变中CD1+a、S-100+、CD3+、CD8+细胞数量增多(P<0.05),与组织分级呈正相关(P<0.05),抗体表达强度增高;宫颈浸润癌中4种抗体阳性细胞数量减少,与临床分期呈负相关(P<0.05),强度略有下降。结论人宫颈上皮癌前病变至浸润癌变过程中树突状细胞和T细胞数量及抗体表达强度发生变化,提示宫颈病变局部的免疫功能发生了改变。
- 常昕莹唐军民诸雪峻唐岩罗天霞李枫
- 关键词：宫颈上皮内瘤变宫颈癌树突状细胞T细胞
- 人外周血树突状细胞与人肺鳞癌细胞的融合研究被引量：4
- 2003年
- 目的 探讨用杂交瘤技术制备树突状细胞疫苗的方法。研究树突状细胞 肿瘤细胞之融合细胞的形态及表型特征。 方法 用PEG法将免疫磁珠法分离获得的人外周血树突状细胞与人肺鳞癌细胞株LTEP78融合 ,瑞氏 姬姆萨染色观察树突状细胞、LTEP78细胞及其融合细胞的形态结构 ,SP免疫细胞化学染色法检测融合细胞的分子表达。 结果 分离的树突状细胞能高表达HLA DR分子 ,而LTEP78细胞则不表达 ;将树突状细胞与LTEP78细胞按 10∶1比例融合后 ,两者的细胞膜、细胞质依次融合 ,获得的融合细胞仍能表达HLA DR分子。 结论人树突状细胞与人肺鳞癌细胞的融合是一个动态过程 ,通过将两者融合 ,人肺癌细胞获得了人树突状细胞表达的HLA DR分子 ,从而增强了其免疫原性 ,为人树突状细胞疫苗的研制奠定了基础。
- 伊焕发唐军民唐岩甄昱孙红亚戴燕秦屹
- 关键词：外周血树突状细胞肺鳞癌细胞组织化学
- 人单核细胞来源的树突状细胞微观流变学研究
- 2005年
- 目的探讨不同发育阶段树突状细胞(DC)的微观流变学特性及其差异。方法应用密度梯度离心法从正常人外周血分离获得单个核细胞,经贴壁培养和免疫磁珠阴性选择获取纯化的单核细胞,以此作为DC前体(pDC)在体外培养诱导获得未成熟DC(imDC)和成熟DC(mDC)。并用免疫细胞化学、免疫荧光、酶细胞化学、流式细胞仪等技术对不同发育阶段的DC进行鉴定;应用微观流变学研究方法对以上细胞的电泳率、渗透脆性、膜流动性和傅立叶红外光谱(FT-IR)进行测量和分析。结果改进的分选法所获得的CDl4+pDC>97%。体外加入rhGM-CSF和IL-4培养6d后,S-100+imDC占细胞总数的96.9%;再加入rhGM-GSFI、L-4和TNF-α培养48 h后,CD86+mDC占细胞总数的87%。其微观流变学特性为:mDC电泳率明显高于pDC和imDC(P<0.05);3种细胞均具有较强的抗低渗能力,但imDC最强(细胞未破碎率为27%);mDC的膜流动性最大,其荧光偏整度P值为0.062±0.001(P<0.01);FT-IR显示mDC中的蛋白质二级结构发生了较大变化。结论DC的微观流变学特性随其不同的发育阶段而发生了明显变化。
- 王国涛唐军民唐岩战军曾柱文宗耀
- 关键词：树突状细胞电泳率渗透脆性膜流动性
- 树突状细胞表型抗原在人卵巢癌组织中的表达
- 2001年
- 目的 :观察人卵巢癌中CD1c、S 10 0阳性细胞数和表达强度的变化 ,探讨其与卵巢癌发生发展及预后的关系 ,为卵巢癌的生物治疗提供实验依据。方法 :应用ABC免疫组化技术和图像分析法对 31例卵巢癌标本进行检测。结果 :在卵巢癌中CD1c、S 10 0阳性细胞数与正常卵巢组织比较明显减少 (P <0 0 1) ,且其表达强与正常卵巢组织比较明显减弱 (P <0 0 1)。结论 :树突状细胞表型抗原在人卵巢癌组织中的表达总量下降 ,树突状细胞在抗卵巢癌的免疫反应中起重要作用。
- 李银生雷素英戴燕徐立新唐岩唐军民
- 关键词：树突状细胞
