国家自然科学基金(30670816)
- 作品数：7 被引量：30H指数：4
- 相关作者：洪晶孙昱昭顾绍峰付小兵于长江更多>>
- 相关机构：北京大学第三医院中国医科大学附属第一医院解放军总医院第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金沈阳市科学技术计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人骨髓间充质干细胞的培养及鉴定被引量：7
- 2007年
- 目的:探讨人骨髓间充质干细胞(hMSCs)体外分离培养及鉴定。方法:成人骨髓取自手术中非血液系统疾病、非肿瘤及乙肝表面抗原阴性患者摘取的肋骨,采用贴壁筛选法进行体外扩增;用免疫组织化学法对培养的细胞进行鉴定。结果:体外培养的原代hMSCs9d融合,免疫组织化学染色CD44表达阳性。结论:贴壁筛选法在体外很容易分离培养和扩增hMSCs,可作为获得hMSCs的一种有效手段。
- 于长江洪晶
- 关键词：间充质干细胞骨髓
- 体外诱导人骨髓间充质干细胞向角膜上皮细胞分化的初步研究被引量：8
- 2008年
- 目的探讨在体外损伤微环境下,人骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为角膜上皮细胞的可行性。方法体外分离培养人MSCs和人角膜缘干细胞(LSCs),检测细胞CD34、CD44、细胞角蛋白3(CK3)、细胞角蛋白19(CK19)的表达情况。制作人LSCs热损伤模型,加入增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)标记的人MSCs共同培养,2周后检测细胞CK19的表达情况。结果人MSCsCD44表达阳性、CD34表达阴性,流式细胞术显示CD44阳性率为92.59%,CD34阳性率为0.01%;人LSCsCK19表达阳性,CK3表达阴性。共同培养后部分人MSCsCK19表达阳性,并有多核细胞现象。结论在损伤微环境下,人MSCs可以转化为类角膜上皮细胞的细胞,在此过程中存在细胞融合现象。
- 顾绍峰付小兵洪晶
- 关键词：人骨髓间充质干细胞人角膜缘干细胞细胞融合
- 热烧伤后的人角膜组织中基质金属蛋白酶-2、-9表达的研究被引量：3
- 2008年
- 目的:研究热烧伤后人角膜组织中的基质金属蛋白酶-2、-9(MMP-2、MMP-9)的表达与分布,探讨其含量的变化与角膜病变的相关性。方法:收集铁水烫伤后行角膜移植患者病变角膜19例,正常角膜组织10例。应用免疫组化染色方法检测MMP-2、MMP-9在角膜各层次中的分布与表达,应用图像分析系统进行半定量分析。结果:MMP-2、MMP-9在正常角膜组织中均未见阳性表达,平均灰度值分别为117.8188±3.7967,119.1902±0.9679。热烧伤后角膜组织中,MMP-2的阳性表达主要分布于角膜基质层,平均灰度值为94.4197±5.8327;MMP-9的阳性表达主要分布于角膜上皮层和基底膜附近,平均灰度值为115.0188±0.7149。将正常角膜组织中和病变角膜组织中两种酶的平均灰度值分别进行统计学分析,P值均<0.05。随着病程的发展,在病变角膜组织中MMP-2的阳性表达先呈现逐渐增高趋势14d后逐渐下降,角膜基质层溶解达高峰时阳性表达的量最高;MMP-9在患病初期角膜基底膜病变明显时表达较高,后期逐渐下降。结论:MMP-2、MMP-9对热烧伤后的人角膜组织病变的发展起重要的作用。MMP-2主要参与角膜基质层的损害,MMP-9主要参与角膜上皮层和基底膜的损害。
- 于长江段穆洪晶
- 关键词：基质金属蛋白酶角膜热烧伤
- 体外诱导人骨髓间充质干细胞向色素上皮样细胞分化的研究被引量：5
- 2009年
- 目的探讨人骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)向色素上皮样细胞诱导、分化的可行性,为视网膜移植提供种子细胞的来源。方法体外培养人视网膜色素上皮细胞(human retinal pigment epithelium,HRPE)和MSC,应用免疫细胞化学法检测CD34、CD44和角蛋白的表达情况,确定2种细胞的来源;通过Transwell6孔板非接触共培养的方式,建立HRPE和MSC共培养体系,显微镜下观察人MSC的形态学变化;对于诱导后的MSC进行免疫细胞化学鉴定,确定角蛋白的表达情况。结果MSC呈纤维样克隆样生长,人MSC的CD44(+),CD34(-);HRPE原代培养时细胞内布满色素颗粒,角蛋白表达(+)。HRPE和MSC共培养体系中,部分长梭形的MSC逐渐变成多边形,细胞内出现典型的色素颗粒;分化的色素上皮样细胞角蛋白表达阳性。结论MSC与HRPE在非接触共培养诱导方式下能分化成色素上皮样细胞;分化的细胞具有上皮细胞的特异性标志,诱导后的细胞是否具有HRPE的功能尚有待于进一步研究。
- 安刚路璐许苑洪晶
- 关键词：骨髓间充质干细胞角蛋白
- 慢性结膜炎患者泪液中腺病毒与单纯疱疹病毒的检测被引量：6
- 2010年
- 目的探讨慢性结膜炎患者泪液标本中腺病毒和单纯疱疹病毒的表达情况。方法实验研究。2008年11月至2009年6月期间，在北京大学第三医院、北京大学眼科中心门诊采集81例临床确诊为慢性结膜炎（成人组66例、儿童组15例）、9例急性病毒性结膜炎及30例健康者的双眼泪液标本，采用聚合酶链反应（PCR）法特异性检测腺病毒及单纯疱疹病毒核酸的存在情况，并对PCR阳性结果结合临床症状和体征进行分析。采用两个样本例数的卡方检验。结果在慢性结膜炎患者中，腺病毒阳性率为32．1％（26／81），单纯疱疹病毒阳性率为30．9％（25／81）。在慢性结膜炎的儿童组患者中腺病毒阳性率为33．3％（5／15），单纯疱疹病毒阳性率为13．3％（2／15）。成人组中腺病毒的阳性率为31．8％（21／66），单纯疱疹病毒阳性率为34．8％（23／66）。在既往有急性结膜炎病史的患者中腺病毒的阳性率为61．5％（16／26），与既往无急性结膜炎病史的患者比较，差异有统计学意义（x^2=16．884，P〈0．01）。单纯疱疹病毒阳性率为42．3％（11／26），与既往无急性结膜炎病史的患者比较，差异有统计学意义（x^2=5．351，P=0．021）。正常阴性对照组病毒检测阳性率均为0％（0／30），阳性对照组即急性病毒性结膜炎组腺病毒阳性率为100．0％（9／9）。81例慢性结膜炎患者中腺病毒和（或）单纯疱疹病毒阳性者为37例。病毒检测阳性的患者中64．9％（24／37）的患者出现眼红症状，56．8％（21／37）的患者出现眼痒症状，32．4％（12／37）的患者兼有眼红和眼痒，73．0％（27／37）的患者临床体征表现有下睑滤泡。结论慢性结膜炎患者中腺病毒和单纯疱疹病毒的表达占有相当的比例，既往有明确感染史的患者病毒阳性率明显高于无既往感染史患者。
- 靳瑛洪晶
- 关键词：腺病毒科单纯疱疹病毒属
- 人视网膜色素上皮细胞吞噬过程中MERTK基因mRNA表达水平与蛋白激酶C关系的研究被引量：2
- 2010年
- 目的探讨人视网膜色素上皮（hRPE）细胞吞噬过程中MERTK基因mRNA表达水平与蛋白激酶C（PKC）的相互作用。方法对照实验研究。采用1×10^10个／L视细胞外节膜盘（ROS），于37℃下孵育体外培养的正常hRPE细胞，在孵育的不同时间终止吞噬反应。用双重荧光标记法，检测hRPE细胞的吞噬能力。用液闪记数γ-^32P放射活性法，检测不同吞噬时间点的PKC活性。以逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法，检测MERTK基因的mRNA水平变化情况。以PKC激活剂和拈抗剂处理hRPE细胞后，再行MERTK基因mRNA表达水平检测。采用SPSS13．0统计学软件进行数据分析，实验组与对照组hRPE细胞吞噬ROS能力、PKC活性比较采用Student’t检验，MERTK基因mRNA表达水平比较采用单因素方差分析。结果ROS孵育后的hRPE细胞结合及吞入ROS的数量逐渐增多，至24h时，hRPE细胞吞噬ROS的数量达到高峰，为（2．85±0．11）×10^5个，与对照组（0．00±0．00）×10^6个比较，差异有统计学意义（t=47．64，P〈0．05）。ROS孵育后的hRPE细胞胞质PKC活性降低，至24h时，PKC活性降至最低，细胞质的PKC活性为（151．13±17．67）nmol·g^-1·min^-1，细胞膜的PKC活性为（152．45±64．83）nmol·g^-1·min^-1；对照组细胞质的PKC活性为（329．63±14．26）nmol·g^-1·min^-1，细胞膜的PKC活性为（467．67±68．87）nmol·g^-1·min^-1；两组间PKC活性比较，差异有统计学意义（细胞质：t=89．66，P〈0．05；细胞膜t=10．31，P〈0．05）。在hRPE细胞与ROS不同时段的孵育过程中，MERTK基因mRNA均呈现出高表达状态，孵育至90min时，MERTK基因mRNA表达灰度值为1．8853±0．0077，与对照组灰度值0．7246±0．0062相比，差异有统计学意义（F=16060．2167，P〈0．05）；孵育至24h时，MERTK基因mRNA表达灰度值为0．5946±0．0082，与对照组灰度值0．3343±0．0064比较，差异有统计学意义（F=919．8421
- 孙昱昭洪晶
- 关键词：蛋白激酶C受体蛋白质酪氨酸激酶类
- 细胞内Ca^2＋及MERTK基因在人视网膜色素上皮细胞吞噬功能中的作用
- 2009年
- 目的观察细胞内Ca^2＋及MERTK基因在人视网膜色素上皮（RPE）细胞的吞噬功能中所起的作用及二者的相互关系。方法用视细胞外节膜盘（ROS）于37℃孵育培养的RPE细胞，在孵育不同终止吞噬反应。双重荧光标记法检测RPE细胞吞噬动力学；钙离子荧光探针负载法在荧光显微镜下测定RPE细胞内Ca^2＋的变化；半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测相应时间点MERTK基因表达的变化及施加Ca^2＋激活剂（A23187载体）或拮抗剂（verapamile）后MERTK基因表达的变化。结果RPE细胞与ROS孵育过程中，ROS结合于RPE细胞表面发生在15min时，RPE细胞吞噬ROS在24h时达到饱和。细胞内Ca^2＋在孵育15min时升高，并在24h内保持高水平；MERTK基因表达在RPE细胞与ROS孵育5min时增强，并在全部孵育过程中呈现出高表达状态；以A23187载体开放钙通道升高RPE细胞内Ca^2＋后，MERTK基因信使核糖核酸（mRNA）水平升高，并呈剂量依赖性。经A23187预处理后的孵育实验中所检测到的MERTK mRNA水平除3h这一时间点外均高于对照组；verapamile拮抗RPE细胞内Ca^2＋后，MERTK基因表达明显下降并呈剂量依赖性；以verapamile预处理后继续与ROS孵育，所检测到的MERTK基因在24h内均低于对照组。结论MERTK基因及细胞内Ca^2＋发挥着维持RPE细胞吞噬过程的重要作用，MERTK作为上游调控信号启动下游的细胞内Ca^2＋信号来维持RPE细胞对ROS的摄入过程。
- 孙昱昭洪晶安刚
- 关键词：CA^2+
