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国家自然科学基金(30670802)

作品数：10 被引量：36H指数：4
相关作者：姚智周旋任玉祁艳斌梅玫更多>>
相关机构：天津医科大学天津市中心妇产科医院天津大学更多>>
发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划天津市应用基础与前沿技术研究计划更多>>
相关领域：医药卫生生物学更多>>

文献类型

  • 10篇中文期刊文章

领域

  • 9篇医药卫生
  • 1篇生物学

主题

  • 7篇细胞
  • 5篇乳腺
  • 5篇乳腺癌
  • 5篇腺癌
  • 4篇蛋白
  • 4篇细胞系
  • 3篇癌细胞
  • 2篇乳腺癌细胞
  • 2篇乳腺癌细胞系
  • 2篇体外
  • 2篇体外研究
  • 2篇腺癌细胞
  • 2篇卵巢
  • 2篇基因
  • 2篇癌细胞系
  • 2篇PI3KP8...
  • 2篇RNA干扰
  • 1篇蛋白调控
  • 1篇蛋白活性
  • 1篇信号

机构

  • 9篇天津医科大学
  • 2篇天津市中心妇...
  • 2篇天津大学
  • 1篇武警医学院

作者

  • 8篇姚智
  • 4篇梅玫
  • 4篇祁艳斌
  • 4篇任玉
  • 4篇周旋
  • 2篇申潇咏
  • 2篇赵川
  • 2篇杨洁
  • 2篇王越
  • 2篇蒋伶活
  • 2篇周云丽
  • 2篇苏征
  • 2篇高燕
  • 2篇张灏
  • 1篇赵秀兰
  • 1篇赵津辉
  • 1篇熊铁
  • 1篇李宏钊
  • 1篇王凡
  • 1篇东莉洁

传媒

  • 2篇中华微生物学...
  • 2篇中国肿瘤临床
  • 1篇中国肿瘤生物...
  • 1篇中华妇产科杂...
  • 1篇细胞生物学杂...
  • 1篇国际免疫学杂...
  • 1篇中华乳腺病杂...
  • 1篇Clinic...

年份

  • 2篇2011
  • 1篇2010
  • 6篇2009
  • 1篇2008
共 10 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
靶向AKT的RNA干扰调控人乳腺癌细胞生长的体外研究被引量：1
2009年
采用Oligofectamine转染靶向AKT的siRNA至人乳腺癌细胞系MCF-7,利用real-timePCR检测AKT的表达水平;MTT及流式细胞术分析转染后细胞的生物学特征变化;免疫荧光染色及Western印迹方法观察IA型PI3K/AKT通路主要成员的表达变化。Real-time PCR结果表明转染靶向AKT的siRNA组可以有效敲低AKT的表达水平;MTT结果显示AKT siRNA治疗组细胞增殖率显著降低;流式细胞术结果显示AKT siRNA转染组细胞在G_0/G_1期阻滞,凋亡比例明显高于空白对照组与空载体治疗组;免疫荧光和Western印迹结果均表明转染AKT siRNA组细胞AKT、pAKT、Ki67、Bcl-2几个重要癌蛋白的表达水平均有明显的下调。以上结果表明运用AKT siRNA转染人乳腺癌细胞系MCF-7细胞后,可抑制其肿瘤细胞的增殖并诱导凋亡,因此AKT可以作为人乳腺癌基因治疗的候选靶点。
梅玫任玉周旋祁艳斌赵川申潇咏姚智
关键词：AKTRNA干扰乳腺癌基因治疗
SDF—1α和c—MYC蛋白调控速激肽受体-1截短型mRNA表达的研究被引量：1
2011年
目的 观察基质细胞衍生因子1α（stromal cell derived factor 1α,SDF-1α）、c-MYC蛋白对速激肽受体-1截短型（tachykinin receptor 1 trucated,TACRI-Tr）转录水平的影响.方法 构建c-myc基因shRNA表达载体;用小干扰RNA方法沉默乳腺癌细胞MCF-7的c-myc基因,分成c-myc＋细胞组和c-myc-细胞组,相关实验组加SDF-1α细胞因子中和抗体,用实时定量PCR检测TYACR1-Tr mRNA表达水平.结果 c-myc基因shRNA表达载体构建成功;在正常培养条件下,c-myc-细胞组的TACR1-Tr转录水平低于c-myc＋细胞组（P〈0.05）;加了SDF-1α中和抗体后,c-myc-组TACR1-Tr的mRNA表达水平高于c-myc＋组（P〈0.05）.结论 MCF-7细胞在正常培养条件下,c-MYC蛋白可以反式激活TACRI-Tr的转录;但加入SDF-1α因子中和抗体后,c-MYC蛋白失去了这种激活作用.
熊铁周云丽姚智
关键词：基质细胞衍生因子1Α
RKIP基因与卵巢上皮性癌转移的关系被引量：2
2009年
目的探讨一种新的转移抑制基因——RKIP基因与卵巢癌转移的关系。方法应用免疫组化、RT-PCR及蛋白印迹法对卵巢肿瘤的组织标本（卵巢癌组织22份，卵巢交界性肿瘤组织8份，卵巢良性肿瘤组织10份）及卵巢癌细胞系小RKIP基因的表达情况进行检测。将含正义和反义RKIPcDNA的表达载体导入卵巢癌细胞系SKOV3，蛋白印迹法检测转染前后细胞中丝裂原激活的蛋白激酶／细胞外信号调节激酶的激酶（MEK）、细胞外信号调节激酶（ERK）活性的变化。应用四甲基偶氮唑蓝法、双层软琼脂集落形成实验、体外黏附实验、体外侵袭实验、流式细胞仪等观察RKIP基因对卵巢癌细胞生物学行为的影响。结果（1）22份卵巢癌组织中RKIP的表达以阴性（6份，27％）、弱阳性（9份，41％）为主，而10份卵巢良性肿瘤和8份交界性肿瘤组织以强阳性（分别为4份、2份）、阳性（分别为4份、5份）为主。（2）RKIP基因转染后，含正义cDNA的ssRKIP细胞的磷酸化MEK和磷酸化ERK蛋白表达水平下调，ssRKIP#1和ssRKIP#4细胞磷酸化MEK蛋白的相对表达含量分别为0．35和0．34，两者磷酸化ERK蛋白的相对表达含量分别为0．48和0．46。（3）ssRKIP细胞的增殖能力明显低于未转染细胞（P〈0．01）。（4）锚定非依赖性生长能力：ssRKIP#1、ssRKIP#4细胞的集落形成数（83．7±5．7、106．0±9．2）较其对照空载体pcDNA3．1（＋）转染细胞（158．3±14．6）明显减少，分别比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。（5）体外黏附能力：ssRKIP#1、ssRKIP#4细胞的黏附率[分别为（68．3±0．8）％、（64．1±0．9）％]明显低于未转染细胞[（100．0±1．1）％]，分别比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。（6）体外侵袭能力：ssRKIP#1、ssRK]P#4细胞的穿膜细胞数[分别为（24±5）、（25±4）个]明屁低于未转染细胞[（68±5）个]，分别比
王越杨洁高燕赵秀兰李宏钊姚智
关键词：卵巢肿瘤肿瘤转移细胞系肿瘤磷脂酰乙醇胺结合蛋白
P物质及其受体的研究进展被引量：14
2011年
神经肽P物质（sP）是速激肽家族的重要成员，通过与其受体相结合发挥生物学作用。P物质和其偏嗜性受体神经激肽受体-1（NK1R）广泛分布在中枢和外周神经系统及周围组织，sP通过与G蛋白耦联的受体相互作用调控多种功能。目前在mRNA水平和蛋白水平所发现的人NK1R只有两种：由5个外显子组成全长型受体（NK1R—FL）和C-末端缺乏96个氨基酸残基的截短型受体（NK1R—Tr），SP通过与NK1R—Tr或NK1R—FL的相互作用在中枢和外周神经系统及周围组织产生不同的生物学效应。
周云丽姚智
关键词：P物质速激肽神经肽受体
乳腺癌耐药蛋白(BCRP)高表达耐药细胞系的建立及其耐药机制的初步研究被引量：1
2009年
目的:建立稳定表达乳腺癌耐药蛋白(Breast cancer resistance protein,BCRP)的小鼠成纤维细胞系PA317/BCRP,初步探讨其耐药机制。方法:从乳腺癌耐药细胞系MCF-7/ADR中克隆BCRP基因。将编码序列克隆导入真核表达载体pcDNA3.1,转化感受态E.Coli DH5α,获得重组质粒pcDNA3.1/BCRP,酶切并测序鉴定。用电穿孔法将质粒转染PA317细胞,同时转染pcDNA3.1/EGFP。G418筛选阳性克隆。阳性转染细胞提取细胞总RNA,RT-PCR检测BCRP的mRNA表达,Western blot检测BCRP蛋白表达。MTT法检测耐药克隆PA317/BCRP细胞对米托蒽醌(Mitoxantrone,MTZ)耐药性,罗丹明123外排实验验证转染后细胞外排罗丹明123功能。Western blot检测PI3K-AKT信号转导通路下游靶点AKT表达变化。结果:构建质粒pcDNA3.1/BCRP,转染PA317细胞,G418筛选。RT-PCR和Western blot,均检测到细胞中BCRP基因转录及蛋白表达。与空质粒转染细胞、未转染细胞对照组相比,PA317/BCRP细胞对MTZ耐药性增强,且外排罗丹明123能力增强。检测PI3K-AKT途径下游靶点AKT蛋白磷酸化水平在PA317/BCRP细胞内明显增高。结论:1、成功获得稳定表达BCRP的PA317细胞系—PA317/BCRP,经MTF和罗丹明123外排实验证实,其耐药和外排功能增强。2、检测PA317/BCRP细胞PI3K-AKT途径下游靶点AKT的表达,观察到耐药细胞的AKT表达含量明显高于转染空质粒和未转染的PA317细胞。推测BCRP可能通过影响AKT表达上调发挥其耐药作用。
张会来孙燕宋拯刘贤明王华庆
关键词：乳腺癌耐药蛋白转染耐药信号转导
反义miR-221/222上调p27^(kip1)对MCF-7乳腺癌细胞系的放射增敏作用被引量：4
2009年
目的探讨敲低miR-221/222表达上调p27kip1对MCF-7人乳腺癌细胞系放射敏感性的影响。方法经生物信息学分析查询miR-221/222成熟体序列和它们与p27kip1的关系。脂质体共转染反义寡聚核苷酸(反义miR-221/222)后,用Northern blot法检测转染后MCF-7细胞miR-221、miR-222表达水平;将实验细胞分为6组:对照组、对照照射组、无义序列组、无义序列照射组、反义miR-221/222共转染组和反义miR-221/222共转染照射组。用MTT法检测细胞增殖及放射协同作用,流式细胞仪分析细胞周期,克隆形成实验检测细胞增殖,Western blot分析p27kip1蛋白的表达变化。数据间的方差分析采用F检验;两两比较采用LSD-t检验。结果经生物信息学分析显示miR-221/222成熟体序列的种子序列几乎一致,p27kip1是miR-221/222的靶基因。Northern blot显示反义miR-221/222共转染组miR-221、miR-222的表达水平明显下降(miR-221:P=0.000;miR-222:P=0.000)。对照组及无义序列组之间miR-221、miR-222表达水平的差异无统计学意义(miR-221:P=0.371;miR-222:P=0.284)。MTT结果显示转染后第4天共转染组肿瘤细胞生长抑制效果最好,细胞增殖率明显低于对照组和无义序列组(P=0.000),但与放射治疗无协同作用(P=0.091)。流式细胞术检测可见共转染组细胞周期存在G0/G1期阻滞(P=0.000)。经放射治疗后,可明显降低S期比例(P=0.002)。克隆形成实验表明反义miR-221/222可增加MCF-7细胞的放射敏感性。Western blot显示反义miR-221/222共转染组的p27kip1蛋白表达明显上调(P=0.000)。结论反义miR-221/222通过上调p27kip1蛋白表达可以增加MCF-7人乳腺癌细胞系放射敏感性。
梅玫任玉周旋祁艳斌王鸿梅张灏申潇咏赵川苏征姚智
关键词：MIR-221MIR-222
RNAi调下AKT1、PI3K P85表达抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖被引量：5
2010年
目的:探讨RNAi(RNA interference)技术抑制乳腺癌MCF-7细胞中AKT1和PI3KP85亚基的表达对MCF-7细胞增殖和侵袭等的影响。方法:将包含AKT1、PI3KP85两种siRNA开放阅读框的短发夹RNA(shRNA)重组腺病毒质粒表达载体rAd5-siAKT1-siPI3K转染至乳腺癌MCF-7细胞。应用real-timePCR和Western blotting检测转染后目的基因mRNA和蛋白的表达水平,并用Western blotting检测目的基因被沉默后PCNA、cyclinD1和P53的表达情况。应用MTT法、流式细胞术、2-D和3-DMatrigel实验检测MCF-7细胞转染前后的细胞增殖周期和侵袭能力。结果:重组腺病毒质粒表达载体rAd5-siAKT1-siPI3K介导的靶向AKT1,PI3KP85shRNA可以有效抑制目的基因AKT1和PI3Kp85的mRNA和蛋白表达;下游相关因子PCNA、cyclinD1的表达亦下调,P53表达则上调。MTT法结果显示rAd5-siAKT1-siPI3K组细胞生长抑制率>50%,与未转染组和rAd5-siCtrl转染组比较,出现明显的G1/G0细胞周期阻滞;2-D和3-DMatrigel实验显示,未转染组和rAd5-siCtrl转染组细胞呈正常形态,而rAd5-siAKT1-siPI3K转染组细胞贴壁生长能力明显减低,细胞团块明显缩小。结论:靶向AKT1、PI3KP85亚基的shRNA技术可以抑制MCF-7细胞中AKT1、PI3KP85亚基的表达,抑制MCF-7细胞的体外增殖。
梅玫任玉周旋赵津辉王凡高伟祁艳斌姚智蒋伶活
关键词：AKT1PI3KP85
RNAi抑制PI3Kp85α蛋白活性对人乳腺癌细胞系MCF-7生长抑制的体外研究被引量：1
2009年
目的:探讨敲低P13Kp85α表达对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞生长的影响和机制。方法:用靶向P13Kp85α的siRNA转染人乳腺癌细胞系MCF-7,使用Real-time PCR法鉴定转染P13Kp85α表达水平;MTT法评价P13Kp85α siRNA对乳腺癌细胞系MCF-7生长的影响;流式细胞术检测转染后细胞周期分布和凋亡;采用免疫荧光染色及western blot方法观察IA型P13K/AKT通路主要成员的表达。结果:Real-time PCR结果显示P13Kp85αsiRNA转染导致P13Kp85α表达下调;MTF结果显示P13Kp85αsiRNA转染抑制肿瘤细胞生长;流式细胞术检测可见P13Kp85α siRNA转染组细胞周期存在G_0/G_1期阻滞而且凋亡率显著高于对照组与空载体组(F=19.255,P=0.002)。结论:应用P13Kp85α siRNA转染人乳腺癌细胞系MCF-7细胞,可抑制其增殖和诱导细胞凋亡,因此P13Kp85α可以作为人乳腺癌基因治疗的候选靶点。
梅玫任玉周旋苏征祁艳斌张灏姚智蒋伶活
关键词：RNA干扰乳腺癌
Expression of Preprotachykinin-I (PPT-I), Neurokinin-1 (NK-1) and Neurokinin-2 (NK-2) in Breast Cancer Cells Improves Tumor Cell Survival in Bone Marrow in the Early Stage of Metastasis
2009年
OBJECTIVE To study the potential relationship between theexpression of PPT-I, NK-1, NK2 and the development of breastcancer cells in bone marrow stroma and to provide evidence ofpotential molecular mechanisms of bone metastasis in early stageof breast cancer patients.METHODS The cocultures of breast cancer cell line T-47D andmarrow-derived mesenchymal stem cells (MSC) were establishedwith equal numbers. T-47D cells were separated from the coculturesystem at 48 h and 96 h after coculture by MACS magnetic cellsorting (MicroBeads). The expression of PPT-I, NK-1, NK-2 inT-47D was then examined before and after coculture by real-timePCR and by Western blot. Alterations in cellular ultrastructureof T-47D cells were detected before and after coculture underelectron microscope. Finally, changes in cell cycle distributionwere examined by flow cytometry, and growth curves from beforeand after coculture were drawn and analyzed.RESULTS Following coculture of T-47D and MSC, the expressionof PPT-I mRNA and protein was significantly upregulated, whilethe expression of NK-1 and NK-2 mRNA and protein was greatlydownregulated. The analysis of cell cycle distribution by flowcytometry showed that the proportion of T-47D during S phasewas increased, and the duration of the G_2/M phase was sharplydecreased. Under electron microscope, we observed that thesynthesis of hereditary material was increased, but the hepatingranules were shown prominent stacking in T-47D cells. Theseresults suggest that although the synthesis of DNA was increased,the proliferation of cells was inhibited after coculture. The cellgrowth curve confirmed the findings from the observation underthe electron microscope and flow cytometry.CONCLUSION Tumor cells could survive through theupregulation in expression of preprotachykinin-I gene duringearly bone metastasis in breast cancer. The phenomenon of growthsuppression in breast cancer cells after coculture in the currentstudy could be induced by downregulation in expression of NK-1and NK-2.
Huilai ZhangHuaqing WangPengfei LiuZhi YaoXishan Hao
关键词：细胞生存
雌激素与IL-6、IL-8在卵巢癌细胞中的调节作用被引量：8
2008年
目的探讨雌激素与IL-6、IL-8在卵巢癌细胞中的交互调节作用及作用机制。方法选择兼有雌激素受体（estrogen receptor，ER）及IL-6、IL-8受体表达的卵巢癌细胞系CAOV-3和OVCAR-3作为研究模型，分别探讨17β-雌二醇（estradiol，E2）对IL-6、IL-8及其受体表达的作用以及IL-6、IL-8对ER表达及ER转录活性的作用。结果一方面E2不仅可经NF—κB途径促进卵巢癌细胞IL-6、IL-8分泌，而且还对二者受体的表达具有一定的调节作用。E2诱导的促IL-6、IL-8分泌作用可被其受体阻断剂他莫昔芬（tamoxifen，Txf）完全阻断。另一方面在无雌激素的条件下，IL-6、IL-8能上调卵巢癌细胞ERα表达及下调ERβ表达，且还能分别通过丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路和Src活化增强卵巢癌细胞ER的转录活性，该作用可被Txf完全封闭。结论雌激素与IL-6、IL-8两种细胞因子在卵巢癌细胞中交互调节，由此通过产生的放大信号通路促进卵巢癌的生长和发展。
王越杨洁高燕东莉洁姚智
关键词：雌激素IL-6IL-8卵巢癌细胞
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