上海市自然科学基金(10ZR1440000)
- 作品数：2 被引量：4H指数：2
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- 相关机构：中国人民解放军上海中医药大学解放军第四五五医院更多>>
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- 低氧诱导因子1α基因转染的人脂肪源性干细胞对肾小管上皮细胞损伤的影响被引量：2
- 2011年
- 目的:将低氧诱导因子1α(HIF-1α)基因质粒高效感染人脂肪源性干细胞(hADSCs),并与顺铂诱导的人近端肾小管上皮细胞(HK-2)共孵育,观察hADSCs对HK-2细胞损伤的影响。方法:以慢病毒为载体,将HIF-1α转染hADSCs,与顺铂诱导的HK-2细胞共孵育。电镜观察HK-2细胞形态、结构的变化;原位末端标记(TUNEL)检测细胞凋亡指数;Westernblot检测HK-2细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病2基因(Bcl-2)的变化及hADSCs细胞促红细胞生成素(EPO)、血红素氧化酶1(HO-1)及血管内皮生长因子(VEGF)的表达,ELISA检测培养液中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)和肾损伤分子1(KIM-1)的浓度,EPO、HO-1、VEGF和HIF-1α的浓度变化。结果:(1)与顺铂诱导组相比,共孵育后的HK-2细胞结构损伤减轻、凋亡细胞减少,caspase-3的表达低于顺铂诱导组、Bcl-2的表达水平升高;其中HIF-1α转染的hADSCs与HK-2细胞共孵育后,HK-2细胞损伤明显减轻,凋亡蛋白的变化更为明显。(2)顺铂诱导组培养液中NGAL、KIM-1浓度升高,以KIM-1变化明显(P<0.05);细胞共孵育后培养液中KIM-1浓度降低,转染组较明显。(3)转染后的hADSCs细胞内EPO、HO-1、VEGF的蛋白表达升高;培养液中HO-1、VEGF含量增高(P<0.05),HIF-1α、EPO的含量变化不明显。结论:hADSCs与HK-2细胞共孵育后,可以减轻顺铂诱导的HK-2细胞结构损伤、抑制细胞凋亡,HIF-1α转染hADSCs后其作用更为明显,可能与细胞保护因子的高表达有关。
- 王巍巍李慧凛张金元王葳
- 关键词：低氧诱导因子1Α基因转染肾小管上皮细胞
- 慢病毒载体介导的低氧诱导因子-1α在脂肪源性干细胞中的表达被引量：2
- 2011年
- 目的构建携带有增强绿色荧光蛋白（EGFP）和低氧诱导因子-1α（HIF-1α）的重组慢病毒载体，并感染人脂肪源性干细胞（hADSCs）。方法重组慢病毒载体Lenti—hHIF-1α-EGFP转染293T细胞，进行病毒包装并测定病毒滴度。按照MOI=20将Lenti—hHIF-1α-EGFP转染hADSCs，流式细胞仪分选EGFP标记的细胞。对转染后的hADSCs进行多向分化能力鉴定，并检测hADSCs内hHIF-1α的表达。结果病毒滴度为5×10^7pfu／ml。Lenti—hHIF-1α—EGFP转染hADSCs后第3天，荧光镜下观察转染效率70％，经流式细胞仪分选后，98％以上的细胞均有EGFP的表达。转染后的hADSCs茜素红染色及油红O染色阳性，表明hADSCs仍具有多向分化的潜能。hADSCs可以高表达HIF-1α。结论成功构建带有报告基因EGFP和目的基因hHIF-1α的慢病毒表达系统，并以慢病毒为载体将hHIF-1α整合到hADSCs中实现其高效表达。
- 王巍巍张金元王葳
- 关键词：慢病毒载体低氧诱导因子-1Α脂肪源性干细胞转染
