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云南省自然科学基金(2011FZ316)
作品数:
2
被引量:2
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相关作者:
陈宏
刘均
李懿
林旭
黄丽春
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相关机构:
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发文基金:
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李懿
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刘均
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印记基因PHLDA2过表达对骨肉瘤细胞的放射增敏作用及机制研究
2014年
目的探讨印记基因PHLDA2过表达对骨肉瘤放射敏感性的影响及相关分子机制。方法通过基因转染技术,将真核表达质粒pEGFP—C3一PHLDA2导入骨肉瘤U20S细胞,经G418持续筛选获得稳定高表达PHLDA2蛋白的亚克隆细胞。实验分为3组:不转染的空白对照组,U20S;稳定转染pEGFP—C3质粒的阴性对照组,U20S—neo;pEGFP—C3-PHLDA2质粒的稳定转染组,U20S—PHLDA2。采用CKK8比色法测定4和8Gyx射线照射后细胞的增殖活性;克隆形成实验观察0~8Gy照射后细胞的存活能力;AnnexinV/PI染色法检测8Gy照射后的细胞凋亡;Westernblot测定蛋白的表达变化。建立人骨肉瘤裸鼠移植瘤模型,观察10Gy照射后PHLDA2基因的体内增敏效应。结果经筛选获得的骨肉瘤亚克隆U20S—PHLDA2细胞中PHLDA2蛋白表达上调(t=13.73,16.28,P〈0.05)。与U20S和U20S-neo组相比,PHLDA2高表达组在4和8Gy的增殖能力明显降低(t=5.00~8.23,P〈0.05),2~8Gy的克隆形成能力明显降低(t=2.52~-1.26,P〈0.05);同时照后裸鼠移植瘤的生长抑制作用显著提高(t=3.27、2.91,P〈0.05)。8Gy照后,PHLDA2高表达组的凋亡率为(17.97±1.69)%,高于U20S组的(6.47±1.01)%和U20S—neo组的(7.15-t-O.96)%(t=10.11、9.61,P〈0.05);同时Caspase-3活性明显提高(t=11.26、10.72,P〈0.05)。结论外源性PHDLA2基因在U20S细胞中稳定过表达能够提高骨肉瘤对x射线的敏感性,其机制可能是通过增强Caspase.3的活性、促进射线诱导的细胞凋亡作用实现的。
李懿
王运来
刘均
李继聪
陈宏
关键词:
骨肉瘤
印记基因
细胞凋亡
印记基因PHLDA2表达与骨肉瘤辐射敏感性的研究
被引量:2
2013年
目的探讨印记基因PHLDA2在骨肉瘤放疗疗效评估中的意义。方法采用免疫组织化学S-P法和RT-PCR方法在36例放射治疗后的骨肉瘤组织及其配对的癌旁组织中检测PHLDA2分子的表达,并结合临床病例参数及辐射敏感性探讨PHLDA2表达的意义。结果放射治疗后的骨肉瘤组织中PHLDA2分子mRNA和蛋白的表达一致,明显低于配对的癌旁组织,差异具有统计学意义(P<0.05);辐射缓解组中PHLDA2的表达阳性率高,与辐射抵抗组差异有统计学意义(P<0.05);但PHLDA2表达与骨肉瘤患者的性别、年龄、病理分型不相关,差异无统计学意义(P>0.05)。结论骨肉瘤组织中PHLDA2的表达显著降低,其表达可作为一种骨肉瘤放疗疗效评估的参考指标,值得在临床上推广运用。
李懿
陈宏
刘均
林旭
黄丽春
李继聪
关键词:
骨肉瘤
放射疗法
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