国家自然科学基金(30670820)
- 作品数：7 被引量：9H指数：2
- 相关作者：陈志强叶章群胡威陈刚朱珉更多>>
- 相关机构：华中科技大学浙江大学医学院附属第一医院南京大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 介导大鼠Ppif基因沉默的慢病毒载体转移质粒的构建及鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的:构建介导大鼠Ppif基因沉默的慢病毒载体转移质粒pGCL-Ppif,为进一步包装慢病毒载体奠定基础。方法:以大鼠Ppif基因为靶基因,根据RNA干扰(RNAi)序列设计原则,设计4对有小发夹结构的RNAi靶点序列,退火形成双链DNA,双酶切后定向克隆到慢病毒载体转移质粒pGCL-Ppif中,构建4个含靶基因片段的重组慢病毒载体转移质粒pGCL-Ppif,并对质粒进行PCR及测序鉴定。结果:Ppif的短发夹RNA(shRNA)片段被成功克隆到慢病毒载体转移质粒pGCL-GFP中,4对插入序列与设计的靶基因片段完全一致。结论:构建了能够表达4个含Ppif靶基因片段的慢病毒载体转移质粒,为进一步包装介导Ppif基因沉默的慢病毒载体奠定了基础。
- 陈志强胡威叶章群夏宗禹马杰锋夏丁朱珉陈刚
- 关键词：慢病毒载体
- 蛋白亲环素D特异性小干扰RNA对大鼠肾小管上皮细胞凋亡的抑制作用
- 2009年
- 目的:探讨蛋白亲环素D(CypD)特异性小干扰RNA对大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响。方法:构建CypD特异性小干扰RNA表达质粒RNAi-Ready pSIREN Ppif,用脂质体转染肾小管上皮细胞(NRK),然后采用逆转录聚合酶链反应检测转染后CypD mRNA的表达,采用MTT法检测转染后NRK细胞的增值情况,流式细胞术检测转染后对NRK细胞调亡的影响。结果:转染RNAi-Ready pSIREN-Ppif载体后,NRK细胞增值加速,凋亡被抑制,细胞凋亡率降低(P<0.05)。结论:CypD特异性siRNA表达载体可以下调NRK细胞CypD的表达,促进细胞增值,抑制细胞凋亡。
- 陈志强胡威夏宗禹叶章群朱珉陈刚
- 关键词：凋亡大鼠肾小管上皮细胞小干扰RNA
- siRNA沉默Ppif基因表达对大鼠肾细胞增殖和凋亡的影响
- 2010年
- 目的:应用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制大鼠基因Ppif的表达,探讨其对大鼠肾细胞(NRK)增殖和凋亡的影响。方法:体外化学合成针对Ppif基因的siRNA序列,在脂质体介导下转染NRK细胞,RT-PCR检测Ppif mRNA表达水平,Western blot检测Ppif蛋白表达水平,流式细胞仪检测细胞凋亡状况,MTT法检测细胞增殖活性。结果:Ppif siRNA转染NRK细胞24 h后,所设计的3对针对不同靶点的siRNA与对照组相比,起始于405、556位点的siRNA在基因水平对Ppif无明显抑制效应(P>0.05);起始于198位点的siRNA在基因和蛋白水平均有明显的抑制效应,基因水平下降75.25%(P<0.05);蛋白水平下降72.13%(P<0.05)。MTT结果显示NRK细胞增殖能力显著增加,转染24 h后,siRNA1～siRNA4细胞抑制率分别为(68.6±3.6)%、(5.3±4.3)%、(7.6±6.3)%和(4.1±4.5)%,凋亡率明显下降。结论:体外化学合成的Ppif siRNA(起始于198位点)可以有效地抑制NRK细胞Ppif的表达,从而抑制细胞凋亡,促进细胞增殖。
- 胡威陈志强叶章群夏宗禹马杰锋夏丁朱珉陈刚
- 关键词：RNA干扰小干扰RNA
- 抑制Ppif基因的表达对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用被引量：2
- 2011年
- 目的观察抑制Ppif基因的表达对缺血再灌注损伤肾脏的保护作用，并探讨其作用机制。方法建立大鼠肾缺血再灌注模型，将实验动物随机分为3组：空白对照组、阴性对照组、治疗组（各20只）。治疗组大鼠给Ppif基因靶向RNA干扰（RNAi）慢病毒载体（4I．Lg／g）0．3ml，阴性对照组再灌注时给予0．3ml含体积分数0．01二甲基亚砜（DMSO）的生理盐水，空白对照组不夹闭肾蒂，余处理同阴性对照组。分别检测各组血肌酐（cr）含量、尿素氮（BUN）含量、细胞凋亡指数（AI）、苏木素-伊红（HE）染色组织病理学分析。结果治疗组与阴性对照组比较，血cr和BUN均明显降低，AI明显下降，差异均有统计学意义（P〈0．05），HE染色组织病理学分析结果显示治疗组较另外2组缺血明显减轻。结论Ppif基因靶向RNAi慢病毒载体能抑制大鼠Ppif基因的表达，从而抑制线粒体的凋亡，减轻肾脏缺血再灌注损伤。
- 马杰锋陈志强胡威叶章群
- 关键词：再灌注损伤RNAI
- 小分子干扰RNA抑制大鼠肾细胞Ppif基因的表达被引量：4
- 2010年
- 目的研究siRNA对大鼠肾细胞(NRK)Ppif基因的抑制作用。方法根据大鼠Ppif基因序列设计并化学合成3对siRNA及1对阴性对照siRNA,并在5′端标记FAM羧基荧光素,以LipofectamineTM2000转染入大鼠肾细胞,用RT-PCR和Western blot分别检测Ppif基因和蛋白表达量的改变,验证所设计的siRNA的抑制效应。结果以Li-pofectamineTM2000转染所设计的siRNA进入NRK细胞,转染效率>90%。起始于405、556位点的siRNA在基因水平对Ppif无明显抑制效应(P>0.05),起始于198位点的siRNA在基因和蛋白水平均有明显的抑制效应,基因水平下降75.25%(P<0.05);蛋白水平下降72.13%(P<0.05)。结论起始于198位点的siRNA对大鼠肾细胞的Ppif基因有明显的抑制效应。
- 胡威陈志强夏忠禹叶章群
- 关键词：小干扰RNA
- 中国人肠道产甲酸草酸杆菌oxc基因的克隆及其在真核细胞中的表达被引量：2
- 2008年
- 目的观察中国人肠道产甲酸草酸杆菌（Ox．F）草酰辅酶A脱羧酶基因（oxc）的分离、克隆及其在293细胞中的表达。方法提取中国人肠道Ox．F的基因组DNA，PCR扩增oxc基因片段并克隆人真核表达载体pEGFP—C1，通过限制性内切酶酶切电泳和测序鉴定基因片段。将重组质粒脂质体转染至293细胞，利用RT-PCR和Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测oxc基因在真核细胞中的表达。结果中国人肠道产甲酸草酸杆菌oxc基因全长1707bp，与Gene Bank中的序列比较，碱基序列的同源性为93．61％，氨基酸残基序列的同源性为97．18％。重组质粒转染293细胞后24～48h，可观察到明亮的绿色荧光，从mRNA和蛋白水平上可以检测到oxc基因在真核细胞中的表达。结论中国人肠道产甲酸草酸杆菌中可以分离出oxc基因；中国人肠道产甲酸草酸杆菌oxc基因存在一定的变异；oxc基因可在真核细胞293细胞中表达。
- 叶章群孔德波陈志强郭辉杨为民姚林方刘冠琳
- 关键词：基因表达克隆
- 肾小管上皮细胞体外缺血再灌注新模型的建立被引量：3
- 2009年
- 目的建立稳定的体外大鼠肾小管上皮细胞（NRK cells）缺血再灌注模型，寻找建立模型的最佳条件。观察大鼠Ppif基因在该模型中的表达。方法体外培养NRK细胞，以氧糖剥夺（krebs）液及使用去氧剂连二亚硫酸钠（Na2S2O42mmol／L）和厌氧产气袋充以N2和CO2（95％N2／5％CO2），以模拟体外NRK细胞缺血再灌注，Annexin V／PI染色后，流式细胞仪检测细胞凋亡率，用逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测Ppif基因（CypD的编码基因）的mRNA表达。结果去氧去糖40min再复氧复糖后，NRK细胞凋亡率于16h达到最高值（P〈0．05）。PpifmRNA再灌注16h时达高峰，48h开始回落，各时段与0h比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论本模型可以模拟体内缺血再灌注机制，去氧去糖40min后再复氧复糖16h是体外NRK细胞缺血再灌注诱导凋亡的最佳条件。
- 陈志强夏宗禹胡威叶章群朱珉陈刚
- 关键词：肾小管上皮细胞缺血脱噬作用
