国家自然科学基金(39870575)
- 作品数：16 被引量：107H指数：8
- 相关作者：黄克和陈甫梁俊文唐建霞章刚更多>>
- 相关机构：南京农业大学青岛农业大学中国农业科学院兰州兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 保存在重铬酸钾中的微小隐孢子虫卵囊活性及传染性研究
- 2009年
- 探索保存在4℃2.5%重铬酸钾(K2Cr2O7)中1～30个月的微小隐孢子虫卵囊(CPO)的活性和对免疫抑制BALB/c小鼠的传染性。通过体外脱囊技术评价卵囊的活性,以BALB/c小鼠为感染模型,通过检测CPO感染小鼠的潜伏期、排卵囊数量和回肠末端绒毛中的隐孢子虫数量来评价卵囊的传染性。结果表明:保存在K2Cr2O7中1～16个月的卵囊出现脱囊;免疫抑制BALB/c小鼠在感染保存1～16个月的卵囊后3～8天开始排出大量的卵囊,且在末端回肠绒毛中寄生有大量的隐孢子虫;卵囊的保存时间与潜伏期之间存在强烈的相关性(R2=0.92)。因此,CPO在4℃K2Cr2O7中能保持活性和传染性至少16个月,K2Cr2O7是保存CPO的良好介质。
- 陈甫黄克和
- 关键词：重铬酸钾活性传染性
- 3种微小隐孢子虫卵囊检测方法的比较研究
- 目的:比较3种方法检测鼠粪中微小隐孢子虫卵囊的效果。方法:应用改良抗酸染色法(MAFS)、免疫荧光单克隆抗体(IFA-McAb)检测法和PCR检测法分别对含有不同数量隐孢子虫卵囊的鼠粪样品、隐孢子虫病模型小鼠的粪样品和奶...
- 陈甫黄克和
- 关键词：免疫抑制抗酸染色法免疫荧光单克隆抗体PCR
- 文献传递
- 3种微小隐孢子虫卵囊检测方法的比较研究被引量：16
- 2006年
- 目的比较3种方法检测鼠粪中微小隐孢子虫卵囊的效果。方法应用改良抗酸染色法(MAFS)、免疫荧光单克隆抗体(IFA-McAb)检测法和PCR检测法分别对含有不同数量隐孢子虫卵囊的鼠粪样品、隐孢子虫病模型小鼠的粪样品和奶牛粪样品进行检测。结果MAFS检测法I、FA-McAb检测法和PCR检测法的检测域值分别为10 g鼠粪中含有隐孢子虫卵囊2.0×104、2.0×104、2.0×102个,操作用时分别为35 min6、0 min3、h,检测鼠粪样品的阳性率分别为65.00%、70.00%、85.00%,检测牛粪样品的阳性率分别为21.21%、18.18%、27.27%。3种方法的阳性率差异无显著性(P>0.05)。结论MAFS检测法简单、快速,费用低,试验条件要求不高,适合对大量样品的检测和流行病学调查;IFA-McAb检测法、PCR检测法更适合用于隐孢子虫的鉴定。
- 陈甫黄克和
- 关键词：免疫抑制抗酸染色法免疫荧光单克隆抗体PCR
- 从感染小鼠获得微小隐孢子虫卵囊方法的改进被引量：16
- 2001年
- 目的 建立从感染C5 7BL/ 6N小鼠获得大量微小隐孢子虫卵囊的方法。方法 在饮水中添加不同浓度的地塞米松对人工感染小鼠进行免疫抑制 ,探讨获得最多卵囊数的药物添加量 ;比较不同纯化方法得到的卵囊回收率和纯度 ;探讨来自不同动物、不同纯化方法的卵囊在牛输卵管上皮细胞培养系统的感染情况。结果 地塞米松加入量为 2 0 μg/ml的第 3组获得的卵囊量高达 4 .16× 10 9/ 30个小鼠 ;用饱和盐水漂浮法与用蔗糖密度梯度离心法纯化得到的卵囊具有相同的回收率和纯度 ;从感染小鼠与犊牛中获得的卵囊在感染性上差异不显著。结论 成功地建立了从感染小鼠获得大量微小隐孢子虫卵囊的方法 ,具有简单、方便、快速等优点 ,并且不影响活力。
- 黄克和杨世广唐建霞
- 关键词：细胞培养隐孢子虫病
- 从鼠粪中分离纯化微小隐孢子虫卵囊方法的研究被引量：19
- 2006年
- 目的探索一种实用、纯度和回收率高且卵囊活力强的分离纯化微小隐孢子虫卵囊的方法。方法分别采用经典的不连续蔗糖密度梯度离心法、改良饱和盐水漂浮法、氯化铯(CsCl)密度梯度离心法和Percoll密度梯度离心法分离纯化C57BL/6小鼠粪中隐孢子虫卵囊。并将4种方法分离纯化获得的卵囊各105体外感染牛输卵管上皮细胞(BFTE),48h和72h后油镜下观察各分离法卵囊的发育情况,以比较卵囊的纯度和活性。结果经典的不连续蔗糖密度梯度离心法分离获得的卵囊数[(2.86±0.08)×107]与改良饱和盐水漂浮法[(2.88±0.15)×107]无明显差异(P>0.05),但高于Percoll密度梯度离心法[(1.52±0.08)×107](P<0.01)和CsCl密度梯度离心法[(2.46±0.13)×107](P<0.05)。4种方法分离纯化的卵囊体外感染BFTE48h和72h后隐孢子虫数无明显差异(P>0.05)。但CsCl密度梯度离心法纯化的隐孢子虫卵囊纯度明显高于不连续蔗糖密度梯度离心法。结论改良饱和盐水漂浮法较经典的不连续蔗糖密度梯度离心法操作简单、快速;CsCl密度梯度离心法分离的隐孢子虫卵囊纯度较高。
- 陈甫黄克和
- 关键词：微小隐孢子虫卵囊
- 猪源隐孢子虫卵囊的分离及基因型鉴定被引量：1
- 2011年
- 应用RT-PCR方法对南京、上海和合肥猪源隐孢子虫卵囊SSU rRNA部分序列进行扩增,产物测序后提交GenBank,收录号为DQ855266、DQ855267;用BLAST和DNAStar软件与GenBank参考序列进行比较,分析其同源性,绘制系统发育进化树,结合卵囊形态学观察和对小鼠、大鼠、兔、山羊和鸡的传染性试验确定隐孢子虫种类或基因型。结果表明,3地区猪源隐孢子虫分离株与微小隐孢子虫（C.parvum）同源性达94%~100%,与C.parvum＂mouse＂型有99.8%~100%的同源性,并处于进化树的同一分支。因此,3地区猪源隐孢子虫是C.parvum＂mouse＂型,提示猪和鼠之间存在交叉传播的可能。
- 陈甫黄克和
- 关键词：隐孢子虫SSURRNA系统发育进化树
- 微小隐孢子虫感染犬肾细胞模型的建立及生长发育过程的研究被引量：5
- 2009年
- 目的建立微小隐孢子虫体外感染犬肾细胞(MDCK细胞)模型,并观察其生长发育过程。方法利用MDCK细胞为隐孢子虫感染对象,优化隐孢子虫感染MDCK细胞的培养条件,观察隐孢子虫在MDCK细胞中的生长发育过程。将体外感染48h的细胞培养上清接种小鼠,观察其感染情况。结果在含有5%胎牛血清的DMEM培养基中,用1×105隐孢子虫卵囊感染2.0×105个MDCK细胞,培养12h为最佳培养条件。在感染后72h内,隐孢子虫出现连续发育阶段,包括脱囊、子孢子、裂殖子、裂殖体、滋养体、配子体、合子、薄壁卵囊和厚壁卵囊,在60～72h内形成卵囊;用感染48h的细胞培养上清接种于免疫抑制小鼠,10d后有隐孢子虫卵囊排出。结论建立了能稳定用于微小隐孢子虫体外感染的MDCK细胞模型,观察到隐孢子虫的生长发育全过程。
- 陈甫黄克和
- 关键词：微小隐孢子虫MDCK细胞
- 基于SYBR Green检测微小隐孢子虫的实时荧光定量PCR方法的建立及应用被引量：6
- 2009年
- 目的建立一种方便快捷的检测微小隐孢子虫的实时荧光定量PCR(Real-time PCR)方法。方法根据GenBank公布的微小隐孢子虫18s rRNA基因序列设计1对引物,通过质粒DNA和卵囊检测标准曲线的绘制及特异性和重复性的研究,建立检测微小隐孢子虫的基于SYBR Green的Real-time PCR方法,进而对奶牛粪便进行检测。结果建立的Real-time PCR法对检测微小隐孢子虫具有很高的特异性,质粒DNA和卵囊的检测阈值分别达到1个拷贝和10个卵囊,奶牛粪便阳性率为25.93%(21/81),高于普通PCR检测率20.99%(17/80)。结论建立的Real-timePCR方法简便、快速,特异性强,敏感度高,可用于微小隐孢子虫的快速定量检测。
- 陈甫黄克和
- 关键词：实时荧光定量PCR微小隐孢子虫
- 锌与维生素A对隐孢子虫感染小鼠免疫功能的影响被引量：5
- 2005年
- 为探讨锌和维生素A对隐孢子虫感染小鼠免疫功能的影响,将75只清洁级昆明小鼠随机分成5组,各组均饲喂基础日粮。其中Ⅰ组和Ⅴ组不添加锌和维生素A,Ⅱ组以饮水方式添加锌(38.5μmol/mL),Ⅲ组以灌喂的方法添加维生素 A(400 IU/只),Ⅳ组添加锌和维生素 A,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组均在试验开始时灌喂小型隐孢子虫卵囊( 2.56×106/mL),Ⅴ组作为不接种对照。试验结果,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组小鼠的粪便排卵量和排卵持续时间分别显著低于Ⅰ组(P<0.05);在试验的第 2 周和试验结束时,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组小鼠血液中CD4、CD8细胞百分率以及CD4/CD8比值均极显著高于Ⅰ组(P<0.01)。表明,锌和维生素A均能够增强小鼠的细胞免疫功能,提高机体抗隐孢子虫感染的能力。
- 梁俊文黄克和王海涛
- 关键词：隐孢子虫锌维生素AT细胞CD8T细胞
- 过氧化氢对隐孢子虫体外感染的影响和自由基清除剂的保护作用
- 为了探讨自由基在隐孢子虫感染和发病过程中的作用,本文建立了能完成隐孢子虫全部发育的牛输卵管上皮细胞培养系统,并应用单抗隆抗体和免疫荧光技术在该系统上研究了过氧化氢(HO)对隐孢子虫体外感染的影响,以及自由基清除剂的保护作...
- 黄克和
- 文献传递
