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rLj-RGD3全RGD缺失基因重组突变体—rLj-112分子克隆及其广谱抑真菌活性被引量：2: 2015年; Lj-112是日本七鳃鳗RGD毒素蛋白野生型Lj-RGD3的RGD全缺失基因突变体,其一级结构具有富组氨酸的特点.富组氨酸糖蛋白具有抑菌功能.为了研究Lj-112是否具有抑菌作用,使用基因合成和原核表达的方法,获得了纯化重组蛋白r Lj-112,将其对不同菌种进行抑菌试验.结果表明,以野生型r Lj-RGD3、RGD模体与组氨酸全缺失突变体r Lj-26为对照,r Lj-112有较广谱的抑菌活性,其中对白念球菌的最低抑菌浓度(MIC)为7μmol/L,对稻瘟病菌的MIC值为7.5μmol/L,对毛癣菌和禾谷病菌的MIC值分别为11.9μmol/L和29.9μmol/L.可见,r Lj-112能作为抗真菌药物候选,为提高农作物的生产质量和减轻人类感染疾病的用药压力奠定了基础.; 白娟吕莉勾萌肖蓉刘欣李庆伟王继红; 关键词：抗菌肽

八氯腺苷诱导SH-SY5Y和SK-N-SH细胞G_2/M期阻滞的分子机制不同被引量：4: 2006年; 为探索八氯腺苷的抗肿瘤作用机制,以神经母细胞瘤SH-SY5Y和SK-N-SH细胞为对象,采用四唑盐比色实验（MTT法）证明,八氯腺苷具有明显的抑制肿瘤细胞增殖的作用,这种抑制作用呈剂量-时间依赖性.流式细胞分析显示,10 μmol/L八氯腺苷作用48 h后可导致靶细胞生长停滞于G2/M期;SH-SY5Y细胞发生明显细胞凋亡,但SK-N-SH细胞却未见凋亡.Hoechst 33342染色显示,SK-N-SH细胞发生了核分裂异常.蛋白质免疫印迹分析证明,10μmol/L八氯腺苷处理SH-SY5Y 48～72 h后,G2检验点调节蛋白ATM、Chk1、Cdc25C和Cdc2磷酸化形式明显上调,同时伴有caspase-3的激活,提示SH-SY5Y细胞发生了G3检验点通路和细胞凋亡途径的激活.与SH-SY5Y细胞不同,在SK-N-SH细胞中,八氯腺苷处理24～96 h时,磷酸化ATM、磷酸化Chk1/Chk2、磷酸化Cdc25C以及磷酸化Cdc2的水平呈现逐渐降低的趋势.结果提示,SK-N-SH细胞在八氯腺苷处理后发生了G2检验点失败.蛋白质免疫印迹分析还显示,八氯腺苷可诱导p53在SH-SY5Y细胞的表达,但却不能影响SK-N-SH细胞的p53组成性表达水平.p21在SK-N-SH的组成性表达随八氯腺苷处理时间延长而逐渐减少,但在处理前后的SH-SY5Y细胞均未检测到p21蛋白的表达.上述实验结果提示,八氯腺苷抑制两种细胞增殖的机制不同：在SH-SY5Y细胞,八氯腺苷可激活ATM-Chk-Cdc25C-Cdc2/cyclin途径和凋亡通路,使细胞发生G2/M期阻滞和细胞凋亡;在SK-N-SH细胞,八氯腺苷诱导G2检验点失败,导致细胞阻滞在有丝分裂期,并发生有丝分裂异常.2种不同的细胞命运可能还与p53和p21表达不同有关.; 朱玄安国顺李淑艳潘颖倪菊华贾弘禔; 关键词：G2/M期阻滞凋亡

八氯腺苷对A549和H1299细胞周期的影响及机制探讨: 2014年; 目的八氯腺苷对肺癌细胞株A549和H1299细胞增殖及细胞周期的影响及其机制探讨。方法 A549和H1299经10.0μmol/L八氯腺苷处理后,MTT法检测细胞生长和增殖情况,流式细胞术检测细胞周期,Western blot检测DNA-PKcs、γ-H2AX、Ku80、Ku70及TopoⅠ的表达情况。结果 MTT法检测结果显示,用10.0μmol/L八氯腺苷分别处理A549、H1299细胞24、48、72h后,A549、H1299细胞生长被抑制;流式细胞分析则显示,A549、H1299细胞G2/M期细胞数增多;Western blot结果表明,γ-H2AX的表达均增加,DNA-PKcs蛋白的表达均下降,而Ku80、Ku70的表达未见明显变化;经八氯腺苷处理后TopoⅠ蛋白在A549细胞中的表达逐渐增加,而在H1299细胞中的表达却逐渐下降。结论八氯腺苷可抑制A549和H1299细胞生长,诱导细胞发生G2/M期阻滞,其机制可能与DNA-PKcs表达下调有关。在A549细胞中TopoⅠ可能通过p53依赖途径介导DNA损伤修复,从而引发对细胞的毒性作用;而在p53缺失的H1299细胞中可能是通过其它途径调控细胞周期。; 范芳安国顺李淑艳倪菊华贾弘禔; 关键词：细胞周期拓扑异构酶I

8-氯腺苷诱导的组蛋白H3K79双甲基化促进NBS1和p21的基因转录激活被引量：1: 2009年; 组蛋白H3第79位赖氨酸甲基化(H3K79me)修饰有单甲基、双甲基及三甲基3种形式,是常染色质的标志.然而,对于组蛋白H3K79三种甲基化各自在基因转录、DNA损伤修复中所起的作用尚不十分清楚.本研究以8-氯腺苷(8-Cl-Ado)为DNA双链断裂(DNAdouble-stranded breaks,DSB)诱导剂,采用Western印迹,在人肺癌细胞H1299检测出了DNA修复分子NBS1、细胞周期检验点相关分子p21,并发现H3K79me1、H3K79me2和H3K79me3三种甲基化修饰的组蛋白明显增加;染色质免疫共沉淀结合实时定量PCR实验显示,只有H3K79me2与DNA损伤检验点分子p21、DNA修复分子NBS1的启动子区域相结合,说明H3K79双甲基化修饰与这些基因的转录激活有关.结果提示,在8-氯腺苷引起DSB时,是H3K79me2、而不是H3K79me1和H3K79me3参与NBS1和p21基因转录激活时的染色质重塑.8-氯腺苷诱导H3K79双甲基化增强、促进H3K79me2所在染色质区域的NBS1和p21基因转录激活可能是8-Cl-Ado抑制肿瘤细胞生长作用机制之一.; 刘畅李文娟陈瑜丁卫安国顺李淑艳倪菊华贾弘禔; 关键词：8-氯腺苷 DNA双链断裂 P21 表观遗传调控

重金属增强核因子与水稻金属硫蛋白基因启动子的结合(英文): 2009年; 植物金属硫蛋白(metallothioneins,MT)被认为在植物应答重金属胁迫方面发挥了重要作用,但该基因的转录调控机制目前仍不清楚.我们以前的研究初步鉴定出位于-331/-194的水稻MT基因(ricMT)启动子区对于金属激活ricMT的表达是必需的.为了明确-331/-194启动子序列在控制ricMT表达中的作用,本课题开展了该序列与核因子的结合特性研究.从2周龄水稻嫩叶中提取了几乎不含叶绿体污染的细胞核,并制备了核蛋白用于凝胶阻滞实验,发现核因子能够与-331/-194启动子序列特异结合.本研究还进一步考察了重金属对核因子结合活性的影响,发现在结合体系中去除重金属离子,核因子与-331/-194序列的结合能力会丧失,而在结合体系中加入重金属离子,结合能力则会随着外加的离子浓度提高而增强,证明这种结合确实依赖于重金属.这些证据结合以前的结果表明,某些金属响应的核因子可能通过结合-331/-194启动子区域来调控ricMT基因表达.; 李甜徐佳雄刘进元; 关键词：水稻

离心力和剪应力应答蛋白1是肿瘤坏死因子受体1的新调控因子: 2011年; 离心力和剪应力应答基因1(responsive to centrifugal force and shear stress gene 1,RECS1)被剔除的小鼠易患囊性内侧坏死和动脉扩张症,伴随着血管组织基质金属蛋白酶9表达水平的增强.本室前期研究发现,稳定表达RECS1的小鼠成纤维细胞对肿瘤坏死因子受体2激动性抗体的敏感性被明显弱化,显示RECS1参与肿瘤坏死因子信号的调控.本文研究了RECS1对肿瘤坏死因子受体1(tumor necrosis factor receptor-1,TNFR1)的调控作用.结果显示,RECS1结合TNFR1,并抑制过量表达TNFR1诱导的核转录因子-κB(NF-κB)活化.缺失突变研究发现,RECS1分子上有NPLY和SPEDY两个模体是其抑制TNFR1信号所必需的.免疫共沉淀实验发现,NPLY是RECS1与TNFR1结合所必需的.而SPEDY的缺失不影响RECS1与TNFR1的结合.另外,免疫共染色实验显示,RECS1与TNFR1共定位于细胞内核体.这些实验结果进一步揭示了RECS1负调控肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)信号进而参与调控血管发育与重塑的生物功能及可能机理.; 廖志勇; 关键词：肿瘤坏死因子受体1 核转录因子-ΚB

肿瘤干细胞相关信号通路调节与靶向治疗被引量：3: 2017年; 肿瘤干细胞被认为是肿瘤形成的种子,可通过复杂的信号传导与周围微环境中的细胞因子相互作用来调节并控制肿瘤的发生、发展与转移。肿瘤干细胞具有自我更新和分化的特征,影响肿瘤干细胞自我更新和分化的胞内信号通路有Wnt,Hedgehog等通路。肿瘤微环境是肿瘤赖以生存的立体环境,其组成包括肿瘤细胞周围的细胞外基质、微血管、基质细胞（成纤维细胞、间质干细胞、肿瘤相关内皮细胞、炎症细胞）及基质细胞所分泌的细胞因子。肿瘤干细胞通过细胞因子与肿瘤微环境中的各种细胞保持着紧密的联系。本文就肿瘤干细胞的细胞表面标记分子、肿瘤干细胞与肿瘤微环境间复杂的调控网络、细胞信号通路等方面对进行综述,为特异性针对癌症干细胞的癌症治疗提供新的方向和参考。; 郑媛媛王继红李庆伟; 关键词：肿瘤干细胞肿瘤微环境信号通路靶向治疗

G6976转变8-氯-腺苷引起的G_2/M期阻滞为S期阻滞并促进K562细胞凋亡被引量：4: 2008年; 8-氯-腺苷可抑制多种人类肿瘤细胞生长.8-氯-腺苷可引起细胞有丝分裂异常、G2/M期阻滞和晚期凋亡.为探索增强8-氯-腺苷的抗肿瘤作用,本研究以人慢性髓性白血病细胞株K562为靶细胞,联合使用Chk1抑制剂G6976与8-氯-腺苷,观察G6976处理后肿瘤细胞对8-氯-腺苷的增敏效果,探索其作用机制.流式细胞分析发现,G6976可消除8-氯-腺苷引起的K562细胞G2/M期阻滞,使转换为S期阻滞.蛋白质印迹及免疫共沉淀实验显示,G6976可灭活Chk1,激活Chk2,使Chk1-Cdc25C-CDK1级联反应转换为Chk2-Cdc25A-CDK2级联反应,从而引起细胞周期阻滞发生改变.蛋白质印迹实验证明,G6976可明显增强8-氯-腺苷作用引起的凋亡相关分子procasepase-3和PARP的激活;流式细胞分析显示,G6976促进8-氯腺苷引起的细胞凋亡.研究结果提示,G6976增强了靶细胞对8-氯-腺苷的敏感性,通过转换8-氯-腺苷引起的G2/M期阻滞为S期阻滞,促进细胞凋亡.; 周静贾秀珍安国顺李淑艳倪菊华贾弘禔; 关键词：G2/M期阻滞凋亡

唾液富组氨酸蛋白被引量：2: 2015年; 唾液富组氨酸蛋白(histidine-rich protein,HRPs)是由人类和高等灵长动物的腮腺、下颌下腺、舌下腺分泌到唾液中的碱性小分子多肽,分子量为4 k D左右,其氨基酸序列富含组氨酸,分子表面带有正电荷和稳定的α螺旋结构.唾液富组氨酸蛋白具有广谱抗菌性,对革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌及真菌都有杀伤作用,其抗菌机制是作用线粒体呼吸通路,诱发ATP的释放.此外,唾液富组氨酸蛋白具有促进伤口愈合的能力,其作用机制与细胞内信号调节激酶1/2通路相关.同时,它也具有金属离子结合能力、机体免疫调节能力,其作用机制与分子表面本身结构特点和阻滞下游信号通路相关.唾液富组氨酸蛋白是一种天然的功能性蛋白质,有望应用在相关疾病的治疗上,本文对唾液富组氨酸蛋白的结构特点、功能机制、应用前景作一简要论述,为后续功能蛋白质的研发和应用奠定了理论基础.; 白娟李庆伟王继红; 关键词：抗菌肽伤口愈合炎症反应

日本七鳃鳗Lj-RGD3毒素肽的3种单RGD模体突变体的克隆表达及其抑制Lewis细胞活性研究: 2017年; 为了评价Lj-RGD3 3个不同位点RGD模体的存在是否对该蛋白功能具有必要性及影响程度,采用全序列合成的方法合成了3种基于Lj-RGD3的RGD缺失突变体基因,并成功对其进行了pET23b载体的构建及重组蛋白的表达和纯化.将这3种分别保留第1位、第2位、第3位RGD模体的重组蛋白各命名为rLj-113、rLj-114和rLj-115.比较了这3种重组蛋白对Lewis小鼠肺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响,并对其是否能引起Lewis肺癌细胞凋亡进行了测定.结果显示,rLj-113、rLj-114和rLj-115对Lewis的增殖半抑制浓度IC_(50)值分别为2.73,2.75,2.53μmol/L,并且以剂量依赖的方式抑制Lewis小鼠肺癌细胞的增殖;突变体蛋白还能抑制以bFGF(basic fibroblast growth factor)为趋化剂的Lewis小鼠肺癌细胞的迁移及侵袭.综上可知,rLj-RGD3蛋白的RGD模体的位置并不影响其在抗Lewis小鼠肺癌细胞的生物活性,而保留单RGD模体的突变体rLj-113、rLj-114、rLj-115仍然具有抑制Lewis小鼠肺癌细胞增殖、迁移、侵袭以及诱导Lewis细胞凋亡的生物学活性.; 郑媛媛肖蓉王继红李庆伟; 关键词：突变体细胞黏附

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国家自然科学基金(30471975)

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